长期的嗅觉适应性的分子读数<em> C.线虫</em
Summary
在这里，我们描述了一个长期的嗅觉适应性的分子读出<em>秀丽隐杆线虫</em>。蛋白激酶G，EGL-4，稳定的适应措施是必要的，在初级感觉神经元对AWC。在长时间的气味暴露EGL-4转位从细胞质到细胞核的AWC。
Abstract
在持续的刺激感官的神经元减少其对信号的灵敏度，以适应他们的反应。适应的反应有助于形状的重视和保护细胞过度刺激。 C.适应内的嗅觉电路线虫最早是由Colbert和巴格曼1,2。在这里，作者定义的参数的嗅觉适应的范例，这是他们设计一个隔离的能力，以适应挥发性气味的化学传感器翼细胞C型（AWC）感觉神经元检测缺陷的突变体的遗传筛选。当野生型C.线虫动物暴露于一个有吸引力的AWC-检测到的气味3为30分钟，他们会适应他们的气味的响应，然后将忽略适应中的趋化行为〜1小时测定气味。当野生型C.线虫动物暴露于一个有吸引力的AWC-〜1小时检测到的气味，他们将忽略在交流的适应气味hemotaxis行为分析〜3小时。这两个阶段的嗅觉适应性C.线虫被描述为短期嗅觉适应30分钟后，气味暴露引起的，长期的嗅觉适应60分钟后，气味暴露引起的。 L'Etoile酒店等。后来的工作，发现了一种蛋白激酶G（PKG）EGL-4的短期和长期的嗅觉适应性AWC神经元所需要的。 EGL-4蛋白含有核定位序列，有必要为长期的嗅觉适应性反应，但可有可无的短期嗅觉适应性反应的AWC 4。绿色荧光蛋白标记EGL-4，这是可能的可视化本地化的EGL-4在AWC暴露在长时间的气味。使用此功能齐全的GFP标记的EGL-4（GFP :: EGL-4）分子，我们已经能够开发出分子读出长期的嗅觉适应性AWC 5。使用这个米olecular读出的嗅觉适应，我们已经能够进行正向和反向遗传筛选，以确定突变的动物表现出有缺陷的亚细胞定位模式GFP :: EGL-AWC 6,7。在这里，我们描述：1）建造的GFP :: EGL-4表达动物; 2）的协议，用于培养动物长期臭味诱导核易位测定;和3）的得分长期臭味诱导核易位核GFP :: EGL-4状态的事件和恢复（重新过敏）。
Protocol
Representative Results
Discussion
这里描述的气味诱导核项目的GFP标记的EGL-4分子提供了一个强大的分子C.嗅觉适应中读出的线虫 。气味引起的核易位检测很简单，只需要几天的准备时间。 pyIs500，我们已经建立了这些实验动物，表达了标记，这说明了的AWC神经元以及表达GFP标记的EGL-4蛋白。因此，我们认为，实验者可以非常迅速，几乎没有工作经验这一类的神经元（也许是经检查几十动物）后开始感觉很舒服?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们想感谢斯科特·哈密尔顿，奥哈洛伦实验室的成员，仔细阅读这篇稿子。我们也感谢匿名审稿人很好的建议和有见地的意见。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Bacto Agar | Difco | DF0140-07-4 | NGM plates |
| Sodium Chloride | Fisher Chemical | S671-10 | NGM plates |
| Bacto Peptone | Difco | DF0118-07-2 | NGM plates |
| Potassium Phosphate Dibasic | Fisher Chemical | S375-500 | S-Basal buffer and NGM plates |
| Potassium Phosphate Monobasic | Fisher Chemical | P285-500 | S-Basal buffer and NGM plates |
| Kimwipes – Small | Kimberly-Clark | LS2770 | |
| Ethanol 100% | Gold Shield Chemical Co. | 43196-115 | diluting odors for chemotaxis assays |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C8106-500G | NGM plates |
| Magnesium Sulphate | MP Biomedicals | 150136-500G | NGM plates |
| Sodium Azide 99% | Fisher Scientific | ICN10289180 | Anesthetic |
| Agarose – UltraPure | Invitrogen | 16500-500 | Agarose pads |
| Benzaldehyde | Sigma-Aldrich | B1334-100G | AWC odor |
| Butanone, ACS Grade | Sigma-Aldrich | 360473-500ML | AWC odor |
| Microcentrifuge Tubes – 1.5 ml Colored | Denville | LS8147 | |
| Pasteur Pipet Disposable Glass 5-3/4″ | Fisher Scientific | 13-678-20B | |
| Stratalinker | Stratagene | Stratalinker 2400 | UV integration |
| Filter Vacuum Bottle – 500 ml | Nalgene | 09-740-25B |
References
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