Trans-vivo de type hypersensibilité retardée test pour le règlement spécifique de l'antigène

Résumé

Nous décrivons un test de diagnostic précieux qui pourrait être utilisé pour décider du retrait de l'immunosuppression après transplantation sans risque élevé de rejet du greffon. Le test utilise les principes de type hypersensibilité retardée et fournit une évaluation précise de ces deux réponses immunitaires effectrices et réglementaires spécifiques donneur supporté par les bénéficiaires.

Résumé

Réponse d'hypersensibilité de type retardé (DTH) est une rapide manifestation vivo de la réponse immunitaire des cellules T dépendantes à un antigène étranger (Ag) que le système immunitaire de l'hôte a connu dans un passé récent. Réactions SRD sont souvent divisés en une phase de sensibilisation, se référant à l'expérience initiale de l'antigène, et une phase de défi, qui suit généralement plusieurs jours après la sensibilisation. L'absence d'une réaction d'hypersensibilité de type retardé à un Ag rappel démontré par des tests cutanés est souvent considéré comme une preuve d'anergie. Le test de SRD traditionnel a été effectivement utilisé dans le diagnostic de nombreuses infections microbiennes.

Bien qu'ils partagent des caractéristiques immunitaires similaires tels que l'infiltration lymphocytaire, l'œdème et une nécrose des tissus, le DTH directe n'est pas une technique de diagnostic possible chez les patients transplantés en raison de la possibilité d'une injection directe entraîne une sensibilisation à des antigènes du donneur et la perte du greffon. Pour éviter ce problème, le bourdonnementun-à-souris de test DTH "trans-vivo" a été développé ^1,2. Ce test est essentiellement un test de DTH de transfert, dans lequel les cellules humaines mononucléées du sang périphérique (CMSP) et les antigènes spécifiques ont été injectés par voie sous cutanée dans le coussinet plantaire pennes ou d'une souris naïve et gonflement DTH-like est mesurée après 18-24 h ^3. La présentation de l'antigène par les cellules présentatrices d'antigènes humains telles que les macrophages ou DCS pour les cellules T dans un tissu très vasculaire de la souris déclenche la cascade inflammatoire et attire les cellules du système immunitaire de la souris dans les réponses résultant de gonflement. La réaction est spécifique de l'antigène et nécessite une sensibilisation préalable de l'antigène. Une réponse DTH donateurs réactive positive dans le dosage Tv-SRD reflète le fait que le patient transplanté a développé une disposition pro-inflammatoire immunitaire vers alloantigènes greffe.

La caractéristique la plus importante de ce test est qu'il peut également être utilisé pour détecter les cellules T régulatrices, qui provoquent la suppression du spectateur. suppression du spectateur d'unRéponse de rappel DTH en présence de l'antigène de donneur est caractéristique des greffés avec des allogreffes acceptées ^2,4-14. Le suivi des patients transplantés pour alloréactivité et la régulation par la télévision DTH peut identifier un sous-ensemble de patients qui pourraient bénéficier de la réduction de l'immunosuppression sans risque élevé de rejet ou de détérioration de la fonction rénale.

Un domaine prometteur est l'application du test Tv-DTH dans le suivi de l'auto-immunité ^15,16 et également en immunologie tumorale ^17.

Protocole

1. Préparation des lymphocytes

1. Recueillir le sang dans des tubes ACD (acide citrate dextrose).
2. Isoler PBMC du sang périphérique humain frais en utilisant des lymphocytes milieu de séparation selon les méthodes classiques.
3. Laver les CMSP trois fois avec PBS pour éliminer les plaquettes contaminantes. Les plaquettes ont été trouvés pour interférer avec dosage de SRD trans-vivo. Maximal admissible de contamination plaquettaire préparation des CMSP est ≤ 1x10 ⁷ / injection.
4. S'il ya une contamination des globules rouges visibles, effectuer la lyse des globules rouges en utilisant un tampon de lyse ACK après le premie....

Résultats

1. Évaluation des receveurs de transplantation rénale pour une réponse spécifique de l'antigène donneur en utilisant un dosage Tv-DTH

Pour tester le donneur réactif immunité cellulaire chez les transplantés rénaux nous avons injecté PBMC de ces patients avec des antigènes du donneur seul ou avec un rappel antigène anatoxine tétanique (TT). En tant que cellules de contrôle positif ont été injectés avec TT seul. Nous observons trois grandes tendances de l'hypersensibilité de type retardé .......

Discussion

Le test DTH trans-vivo est un test diagnostique roman avec une application clinique potentielle dans l'évaluation des réponses à médiation cellulaire en transplantation, le cancer et les patients auto-immunes. Il est précieux car il n'est pas seulement utile dans le suivi rappel réponses effectrices T, mais il peut aussi détecter des réponses T régulatrices. Un moyen fiable de détecter la réglementation DTH humain peut prédire la sécurité du retrait de l'immunosuppression chez les patients qui sont des candi.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tube ACD pour prélèvement sanguin	BD	02-684-26
Milieu de séparation des lymphocytes	Cellgro	25-072-CV
Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco	Cellgro	21-031-CM	Sans calcium & magnésium
Solution tampon de lyse ACK	BioWhittaker	10-548E
TT/DT ou EBV	Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc.		TT/DT 25 μg/injection EBV 8 μg/injection
Inhibiteur de protéase PMSF	Sigma-Aldrich	78830
Éosine pour numération cellulaire	Sigma-Aldrich	E-6003
Alloantigène			Antigènes HLA purifiés, des allopeptides synthétiques peuvent être utilisés à la place de lysats cellulaires sans donneur
Tubes stériles de centrifugation de 50 ml	Fisher Scientific	06-443-18
Pipettes de 10 ml et pipeteur	BD Falcon	13-675-20
Tubes sécurisés de 2 ml	Costar	3213
Pipettes de 1000 μl, 100 μl, 10 μl avec embouts stériles
Hémocytomètre	Fisher	02-671-10
Centrifugeuse pleine taille et microcentrifugeuse	Beckman Coulter/Eppendorf
Seringues d'insuline de 1/2 cc ou 1 cc	Becton Dickinson	14-826-79	aiguille de calibre 28
Sonicateur Vibracell	Divtech Equipment Co. Sonocs Materials Inc		sonde de 2 mm
Compteur d'épaisseur Dial	Mitutoyo, Japon
Souris SCID	Harlan
Isoflurane	Piramal Healthcare		Anesthésique inhalé