Antijen Özgül Düzenleme için Trans-vivo Gecikmeli Tip Aşırı Duyarlılık Testi
Summary
Biz potansiyel greft reddi yüksek riski olmadan nakli sonrası immünsüpresyonun sonlandırmaya karar için kullanılabilecek değerli bir tanı testi açıklar. Tahlil Gecikmeli Tip Aşırı duyarlılık ilkelerini kullanır ve alıcılar tarafından monte hem donör özel efektör ve düzenleyici immün yanıtın doğru bir değerlendirme sağlar.
Abstract
Gecikmiş tip hipersensitivite cevabı (DTH) konak bağışıklık sistemi son geçmişte sahip olduğu, bir yabancı antijen (Ag), T hücre-bağımlı bağışıklık tepkisini in vivo tezahürü bir hızlıdır. DTH reaksiyonlar genellikle genellikle hassasiyete birkaç gün sonra aşağıdaki ilk antijen deneyim ve bir meydan okuma faz, atıfta, bir hassasiyete faz ayrılır. Deri testleri gösterdiği bir geri çağırma Ag için bir gecikmiş tip aşırı duyarlılık yanıt eksikliği genellikle anerji bir kanıtı olarak kabul edilir. Geleneksel DTH tahlilinde etkili birçok mikrobik enfeksiyonların teşhis kullanılmıştır.
Bu lenfosit infiltrasyonu, ödem ve doku nekrozu gibi benzer bağışıklık özellikleri paylaşan rağmen, doğrudan DTH çünkü donör antijenleri ve greft kaybına hassasiyete neden direkt enjeksiyon olasılığı nakli hastalarında uygun bir tanı yöntemidir değildir. Bu sorunu önlemek için, uğultubir-ile-fare "trans-vivo" DTH tahlilinde 1,2 geliştirilmiştir. Bu test, insan periferal kan tek-çekirdekli hücreleri (PBMC) ve özgül antijen memelerine harici deri altından enjekte edilmiş ya da saf bir fare ve DTH benzeri şişme ayak tabanına 18-24 saat sonra ölçülür 3 edildiği, esas olarak bir transfer DTH deneyidir. Makrofajlar ya da son derece vasküler dokuda fare T hücrelerine DC'ler gibi insan hücreleri tarafından antijen sunan antijen sunumu inflamatuar kademeli tetikler ve şişme yanıta sebep fare bağışıklık hücrelerinin çekmektedir. Tepkisi antijene özgü olan ve daha önceki antijen sensitizyonundan gerektirir. Tv-DTH tayininde pozitif donör-reaktif DTH yanıt nakli hasta organ antijenlerdir doğru bir pro-inflamatuar immün eğilim geliştirdiği yansıtır.
Bu testin en önemli özelliği, aynı zamanda bir seyirci baskılamaya neden düzenleyici T hücreleri tespit etmek için kullanılabilir olmasıdır. A seyirci bastırmaDonör antijen varlığında DTH hatırlama yanıt kabul allogreftler 2,4-14 ile nakli özelliğidir. Tv-DTH tarafından alloreaktivitesini ve düzenleme için nakli takibi reddine veya bozulan böbrek fonksiyonlarının yüksek riski olmadan immünsüpresyonun azalma yararlanabilecek hasta alt tanımlayabilir.
Ümit vaad eden bir alan otoimmünite 15,16 izlenmesi ve aynı zamanda tümör immünoloji 17 TV-DTH testinin uygulanmasıdır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Trans-vivo DTH testi nakli, kanser ve otoimmün hastalarda hücre-aracılı yanıtları değerlendirirken potansiyel bir klinik uygulama ile yeni bir tanı testidir. Bu geri çağırma T efektör yanıtları izlemek yararlı değil, çünkü değerlidir, aynı zamanda T düzenleyici yanıtları algılayabilir. Insan DTH düzenleme algılamak için güvenilir bir yolu tek başına veya tolerans çalışmalar için aday olan hastalarda immün çekilme güvenliği tahmin olabilir.
TV-DTH MHC al…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar nakli düzenlenmiş DTH yanıt anlayışımızın gelişmesine AM VanBuskirk katkıları kabul etmek istiyorum. Bu çalışma NIH hibe PO1AI084853 ve R01AI066219-06 destekli ve AB destekli bir çalışma ile oldu.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACD tube for blood collection | BD | 02-684-26 | |
| Lymphocyte Separation Medium | Cellgro | 25-072-CV | |
| Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline | Cellgro | 21-031-CM | Without calcium & magnesium |
| ACK Lysis Buffer | BioWhittaker | 10-548E | |
| TT/DT or EBV | Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc. | TT/DT 25 μg/injection EBV 8 μg/injection | |
| Protease inhibitor PMSF | Sigma-Aldrich | 78830 | |
| Eosine for cell count | Sigma-Aldrich | E-6003 | |
| Alloantigen | Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates | ||
| 50 ml sterile centrifuge tubes | Fisher Scientific | 06-443-18 | |
| 10 ml pipettes and pipettor | BD Falcon | 13-675-20 | |
| 2 ml safe-lock tubes | Costar | 3213 | |
| 1000 μl, 100 μl , 10 μl pipettes with sterile tips | |||
| Hemocytometer | Fisher | 02-671-10 | |
| Full size centrifuge and microfuge | Beckman Coulter/Eppendorf | ||
| 1/2cc or 1cc insulin syringes | Becton Dickinson | 14-826-79 | 28 gauge |
| Vibracell sonicator | Divtech Equipment Co. Sonocs& Materials Inc | 2 mm probe | |
| Dial thickness gauge | Mitutoyo, Japan | ||
| SCID mice | Harlan | ||
| Isoflurane | Piramal Healthcare | Inhalant anesthesia |
References
- Carrodeguas, L., et al. Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity. Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).
- VanBuskirk, A. M., et al. Human allograft acceptance is associated with immune regulation. J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).
- Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay. Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).
- Burlingham, W. J., et al. Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis. Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).
- Geissler, F., et al. Human liver allograft acceptance and the ‘tolerance assay’: In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression. Transplantation. 72, 571-580 (2001).
- Jankowska-Gan, E., et al. Human liver allograft acceptance and the ‘tolerance assay’. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH. Hum. Immunol. 63, 862 (2002).
- Cai, J., et al. Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance. J. Exp. Med. 199, 1017-1023 (2004).
- Rodriguez, D. S., et al. Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching. Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).
- Xu, Q., et al. Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance. J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).
- Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1. J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).
- Jankowska-Gan, E., et al. Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation. Transplantation. 88, 533-541 (2009).
- Jankowska-Gan, E., et al. Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs. Transplantation. 93, 283-290 (2012).
- Knechtle, S. J., et al. Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring. Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).
- Haynes, L. D., et al. Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients. Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).
- Burlingham, W. J., et al. IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants. J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).
- Bobadilla, J. L., et al. TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).
- Olson, B. M., et al. Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade. J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).
