アポトーシス細胞のクリアランスのイメージング中に生きる<em>ショウジョウバエ</em>胚
Summary
ここでは、アポトーシス細胞のクリアランスのダイナミクスを研究するための効果的な方法を説明<em生体内で></em>。この方法では、住んで採用<em>ショウジョウバエ</emアポトーシス細胞と食細胞の特異的標識を用いたアポトーシス細胞の貪食を監視するための強力なモデルとして>胚。
Abstract
アポトーシスとその後の食作用を通じて不要なまたは異常な細胞の適切な除去（アポトーシス細胞のクリアランス）は、すべての後生生物の正常な発達のために重要です。アポトーシス細胞のクリアランスは密接に細胞死に関連付けられている非常にダイナミックなプロセスである; unengulfedアポトーシス細胞はほとんど通常の条件下では、生体内で見られる。アポトーシス細胞のクリアランスの異なるステップを理解し、 'プロ'食と比較するためには-にマクロファージや樹状細胞を'非専門家' -組織常駐隣接セルは、プロセスのin vivoライブイメージングでは、非常に貴重なものです。ここでは、ライブショウジョウバエ胚におけるアポトーシス細胞のクリアランスを研究するためのプロトコルを記述します。貪食に異なるステップのダイナミクスに追従するために、我々はアポトーシス細胞と食細胞に対して特異的なマーカーを使用しています。また、並行して2食のシステムを監視することができます： 'プロ'マクロファージおよび 'セミプロフェッショナルエディション現像中枢神経系におけるssional 'グリア（CNS）。ここで説明する方法は、アポトーシス細胞クリアランスのリアルタイムの研究のための優れたモデルとしてショウジョウバエ胚を用いる。
Introduction
アポトーシスとその後の食作用を通じて不要なまたは異常な細胞の適切な除去は、胚発生のためだけでなく、成人で組織の恒常性のために重要です。アポトーシス細胞やアポトーシス細胞の貪食クリアランスは4段階で進行する非常にダイナミックなプロセスである：アポトーシス細胞の貪食細胞の（1） 募集 （ '見つける-私'）、食作用の標的として細胞の（2） 認識 （ ' -私を食べて'）、（3）の貪食 、アポトーシス粒子1-5の（4） ファゴソーム成熟と劣化が続く。 'プロ'マクロファージや未熟樹状細胞、および'非専門家'組織常駐隣接セル、後生動物の開発6,7時のアポトーシス細胞のクリアランスのために重要である：食細胞の2つのタイプがあります。
ショウジョウバエの開発では、アポトーシスを通して余分細胞の除去は、3メートルで発生後期胚の半ばで初めて、その後中旬蛹で、再び初期の成人におけるAINフェーズ、。胚発生の間にアポトーシス粒子は'プロ'食細胞、マクロファージ、および'非専門家'外胚葉およびグリア8,9によって除去される。
我々の以前の研究では、胚発生の間に食細胞にのみ発現している、（シミュレーション）六ミクロンアンダー、貪食受容体を同定した。 シミュレーションのプロモーターを用いて、我々は、ライブ胚8で同時に外胚葉およびグリア、マクロファージを監視することを可能に貪食細胞集団（ シミュレーションcytGFP）に特異的マーカーを生成しました。さらに、アポトーシスの異なる段階においてアポトーシス細胞に特異的なマーカーを用いて、我々は、 生体内のアポトーシス細胞クリアランスのダイナミクスに従うことができる。
Protocol
Representative Results
Discussion
アポトーシス細胞のクリアランスは非常に動的であるアポトーシスの重要な最後の段階である。したがって、プロセスの実時間研究は極めて重要である。ここでは、開発してショウジョウバエの胚を生体内アポトーシス細胞のクリアランスの監視を可能にするプロトコルを記述します。アポトーシス細胞と食細胞：この手順では、細胞の2つの集団は、特異的なマーカーを使用してマー…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、マリーキュリー社会復帰グラント（IRG249084）によってサポートされていました。私たちは、Kurant研究所のすべてのメンバーに感謝します。
Materials
| Reagent | |||
| Annexin V | Molecular Probes | A35108 | |
| PhiPhiLux G2D2 | OncoImmunin | A304R2G-5 | |
| LysoTracker | Molecular Probes | L-7528 | |
| Halocarbon oil 700 | Sigma | H8898 | |
| Material | |||
| Capillary tubing | FHC | 30-30-0 | |
| Cell Strainer | SPL | 93100 | |
| Paintbrush |
References
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