Un modèle de cancer de la vessie orthotopique d'études livraison Gene

Résumé

L'implantation de cellules cancéreuses dans l'organe d'origine peut servir de modèle préclinique utile pour évaluer de nouvelles thérapies. Des cellules de carcinome de la vessie MB49 peuvent être cultivées à l'intérieur de la vessie après l'instillation intravésicale. Ce protocole illustre le cathétérisme de la vessie de la souris dans le but d'implantation de la tumeur et la livraison adénoviral.

Résumé

cancer de la vessie est le deuxième cancer le plus fréquent de l'appareil génito-urinaire et de nouvelles approches thérapeutiques qui peuvent réduire la récidive et la progression sont nécessaires. Le micro-environnement de la tumeur peut influencer de manière significative le développement de la tumeur et la réponse thérapeutique. Il est donc souvent souhaitable de cultiver les cellules tumorales dans les organes dont ils sont issus. Ce protocole décrit un modèle orthotopique de cancer de la vessie, dans laquelle les cellules de carcinome de la vessie murin MB49 sont instillées dans la vessie par l'intermédiaire d'un cathétérisme. Implantation réussie de cellules tumorales dans ce modèle nécessite la rupture de la couche de glycosaminoglycane protectrice, qui peut être réalisé par des moyens physiques ou chimiques. Dans notre protocole de la vessie est traitée avec de la trypsine avant l'instillation de la cellule. Le cathétérisme de la vessie peut également être utilisé pour délivrer la thérapeutique une fois que les tumeurs sont établies. Ce protocole décrit la fourniture d'un produit de construction adenoviral qui exprime un gène rapporteur de la luciférase. Alors que our protocole a été optimisé pour les études à court terme et se concentre sur la livraison de gènes, la méthodologie de la souris cathétérisme de la vessie a de larges applications.

Introduction

cancer de la vessie est le deuxième cancer le plus fréquent de l'appareil génito-urinaire, avec près de 75 000 nouveaux cas et 15 000 décès attendus en 2012 ^1. Les taux élevés de récidive exigent vie suivi, ce qui rend le cancer de la vessie l'un des cancers les plus coûteuses à traiter. Cancer de la vessie qui a envahi la couche musculaire peut se métastaser dans le foie, le poumon ou l'os par l'intermédiaire du système lymphatique. Thérapie multimodale de tumeurs avancées résultats en seulement 20-40% de survie après 5 ans. Par conséquent, les stratégies de traitement efficaces visant à réduire la récidive et de progression du cancer supe....

Protocole

Toutes les procédures impliquant des animaux ont été examinés et approuvés par la institutionnel de protection et d'utilisation des animaux Comité à l'Université médicale de Caroline du Sud. Le protocole a été approuvé en vertu de l'USDA catégorie D pour la douleur.

Une. Cellule Implantation

1. Deux jours avant d'effectuer la procédure, la plaque 1 x 10 ⁶ cellules MB49 en flacons T-25. Utilisation du DMEM élevé en glucose supplémenté avec 10% de FBS et des antibiotiques (si on le souhaite). Un ballon est suffisante pour chacun des groupes de cinq souris à qui sera anesthésié et implanté en parallèle.

Résultats

Hématurie est observée dans presque toutes les souris dans les 8 jours après l'implantation de 200.000 MB49 cellules. Comme le montre la figure 1, le poids de la vessie a plus que doublé, passant de 34,7 ± 3,3 mg (gamme 31-37 mg, n = 4) non tumorales chez des souris porteuses de 87,5 ± 19,2 mg (gamme de 77 à 120 mg, n = 10) chez des souris ont été implantés avec des cellules MB49. En termes de délivrance de gènes, nous avons constaté que l'imagerie souris 24 heures après l'instillation viral.......

Discussion

La principale méthode décrite dans ce protocole est cathétérisme de vessies de souris, qui a de larges applications pour instillation de cellules ou un agent destiné à la distribution locale de l'épithélium de la vessie. Le protocole spécifique décrite ci-dessus a été optimisé pour les études à court terme (~ 10 jours). Implanter le nombre exact de cellules est critique, car un certain nombre de cellules plus élevée entraîne une croissance plus rapide de la tumeur et, éventuellement, la perte de l'animal en rais.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Société	Numéro de catalogue	Commentaires
Souris femelles âgées de 6 à 8 semaines	Jackson Laboratories	Nom de la souche : C57BL/6J Numéro de stock : 000664
Trypsine*	MediaTech	MT25-053-CI	Obtenu par l’intermédiaire de Fisher
DMEM*	MediaTech	MT10-017-CV	Obtenu par Fisher
FBS	Hyclone	SH30071.03	Inactivé par la chaleur
T25 flacons*	Corning Costar	Corning N° : 3056 Fisher : 07-200-63	> Obtenu par Fisher
MB49 cells	N/A	N/A	Obtenu auprès du Dr Boehle (voir référence11)
Puralube Vet Ointement*	Pharmaderm	Henry Schein Company No. :036090-6050059 Fisher : NC9676869	Obtenu par l’intermédiaire de Fisher
Crème dépilatoire : Veet	Pharmacie locale
Lubrifiant : K-Y Jelly	pharmacie locale
Cathéters*	Exel International	Exel International No. :26751 ; Fisher : 14-841-21	Obtenu par Fisher
Isoflurane	Terrell	NDC 66794-011-25	Obtenu par pharmacie hospitalière
1 ml de seringues TB	Becton Dickinson	BD309659 Fisher :14-823-434
D-Luciférine	Gold Biotechnologies	L-123-1
Ad-CMV-Luc	VectorBiolabs	1000 ; Demander une amplification à grande échelle et une purification CsCl pour une utilisation in vivo	Agent infectieux nécessitant un confinement BSL2
Steady-Glo  ; Système de dosage de la luciférase	Promega	E2510 (10 ml), E2520 (100 ml) ou E2550 (10 x 100 ml)
*disponible auprès de plusieurs fournisseurs
EQUIPMENT
Système d’anesthésie	E-Z Systems, Euthanex Corporation	Système d’anesthésie : EZ7000 Appareil de respirabilité de souris à 5 ports : EZ109	Obtenu par l’intermédiaire de Fisher
Xenogen IVIS 200	Caliper Life Sciences	http://www.caliperls.com/products/preclinical-imaging/ivis-imaging-system-200-series.htm
FLUOstar Optima	BMG Labtech	http://www.bmglabtech.com/products/microplate-reader/instruments.cfm?product_id=2