Hos djur med stora identifierade nervceller (<em> T.ex.</em> Mollusker), är analys av motoriska pooler görs med hjälp intracellulära tekniker<sup> 1,2,3,4</sup>. Nyligen har vi utvecklat en teknik för att extracellulärt stimulera och registrera enskilda nervceller i<em> Aplysia californica</em<sup> 5</sup>. Vi beskriver nu ett protokoll för att använda denna teknik för att identifiera och karaktärisera motoriska nervceller i en motor pool.
Hos djur med stora identifierade nervceller (t.ex. mollusker), analys av motoriska pooler görs med hjälp av intracellulära tekniker 1,2,3,4. Nyligen har vi utvecklat en teknik för att extracellulärt stimulera och registrera enskilda nervceller i Aplysia californica 5. Vi beskriver nu ett protokoll för att använda denna teknik för att identifiera och karaktärisera motoriska nervceller i en motor pool.
Denna extracellulära teknik har fördelar. Först extracellulära elektroder kan stimulera och spela nervceller genom slidan 5, så det behöver inte tas bort. Således kommer neuroner vara friskare i extracellulära experiment än i intracellulära sådana. Andra, om ganglier roteras av lämpliga fastlåsning av manteln, kan extracellulära elektroder komma neuroner på båda sidor av ganglion, vilket gör det lättare och mer effektivt att identifiera flera neuroner i samma beredning. Tredje, extracellunande elektroder behöver inte tränga celler, och därmed lätt kan flyttas fram och tillbaka mellan nervceller, orsakar mindre skada på dem. Detta är speciellt användbart när man försöker spela in flera neuroner under upprepa motoriska mönster som endast kan bestå i några minuter. Fjärde, extracellulära elektroder är mer flexibla än intracellulära sådana under muskelrörelser. Intracellulära elektroder kan dra ut och skada nervceller under muskelsammandragningar. I motsats, eftersom extracellulära elektroder försiktigt pressas mot höljet ovanför neuroner, de stannar vanligen över samma neuron under muskelsammandragningar, och kan sålunda användas i mer intakta beredningar.
Att identifiera motoriska nervceller för en motor pool (särskilt I1/I3 muskel i Aplysia) med extracellulära elektroder kan man använda funktioner som inte kräver intracellulära mätningar som kriterier: soma storlek och läge, axonal projektion, och muskler innervation 4, 6,7. För det speciella motorn poolen används för att illustrera tekniken, spelade vi från buckala nerver 2 och 3 för att mäta axonala projektioner, och mätte sammandragningen krafter I1/I3 muskeln att bestämma mönstret för muskel innervation för de enskilda motoriska nervceller.
Vi visar hela processen från att först identifiera motoriska nervceller med hjälp av muskler innervation, så karakterisera deras timing under motor mönster, vilket skapar en förenklad diagnostisk metod för snabb identifiering. Den förenklade och snabbare diagnostisk metod är överlägsen för mer intakta preparat, t.ex. i den suspenderade buckala massa preparat 8 eller in vivo 9. Denna process kan även tillämpas i andra motoriska pooler 10,11,12 i Aplysia eller i andra djursystem 2,3,13,14.
Hos djur med stora identifierade nervceller, såsom blötdjur (t.ex. Lymnaea, Helix och Aplysia), analys av motoriska pooler görs vanligtvis med hjälp intracellulär inspelning 1,2,3,4. I detta protokoll, beskriver vi ett förfarande för unik identifiering av motoriska nervceller för en motor pool med en extracellulär teknik. Vi använde kraftmätningar som en illustration av denna process. Man kan även använda EMG för att mäta muskel innervations. Kortfattat, för att göra det må…
The authors have nothing to disclose.
Denna forskning stöddes av NIH bidrag NS047073 och NSF bevilja DMS1010434.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Sodium chloride | Fisher Scientific | S671 | Biological, Certified |
Potassium chloride | Fisher Scientific | P217 | Certified ACS |
Magnesium chloride hexahydrate | Acros Organics | 19753 | 99% |
Magnesium sulfate heptahydrate | Fisher Scientific | M63 | Certified ACS |
Calcium chloride dihydrate | Fisher Scientifc | C79 | Certified ACS |
Glucose (dextrose) | Sigma-Aldrich | G7528 | BioXtra |
MOPS buffer | Acros Organics | 17263 | 99% |
Carbachol | Acros Organics | 10824 | 99% |
Sodium hydroxide | Fisher Scientific | SS255 | Certified |
Hydrochloric acid | Fisher Scientific | SA49 | Certified |
Single-barreled capillary glass | A-M Systems | 6150 | |
Flaming-Brown micropipette puller model P-80/PC | Sutter Instruments | Filament used: FT345B | |
Enamel coated stainless steel wire | California Fine Wire | 0.001D, coating h | |
Household Silicone II Glue | GE | ||
Duro Quick-Gel superglue | Henkel corp. | ||
A-M Systems model 1700 amplifier | A-M Systems | Filter settings: 10-500 Hz for the I2 nerve/muscle; 300-500 Hz for all the other nerves | |
Pulsemaster Multi-Channel Stimulator | World Precision Instruments | A300 | |
Stimulus Isolator | World Precision Instruments | A360 | |
AxoGraph X | AxoGraph Scientific | Software for recordings | |
Gold Connector Pins | Bulgin | SA3148/1 | |
Gold Connector Sockets | Bulgin | SA3149/1 | |
Sylgard 184 Silicone Elastomer | Dow Corning | ||
100 x 15 mm Crystalizing Dish | Pyrex | ||
High Vacuum Grease | Dow Corning | ||
Pipet Tips | Fisher Scientific | 21-375D | |
Minutien Pins | Fine Science Tools | 26002-10 | |
Modeling Clay | Sargent Art | 22-4400 | |
Whisper Air Pump | Tetra | 77849 | |
Aquarium Tubing | Eheim | 7783 | 12/16 mm |
Elite Airstone | Hagen | A962 | |
Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Dumont #5 Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
Kimwipes | Kimberly-Clark | 34155 |