उच्च नमक आहार और लुईस चूहा में क्रोनिक किडनी रोग प्रेरित करने के लिए नाइट्रिक ऑक्साइड synthase निषेध के साथ संयोजन में 5/6th nephrectomy
Summary
शल्य चिकित्सा गुर्दे जन की 5/6th निकाल कर लुईस चूहे में क्रोनिक किडनी रोग (सीकेडी) की स्थापना के लिए एक दो चरण विधि का वर्णन किया है. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के संयोजन, ओपन स्कूल निषेध और एक उच्च नमक आहार कारण तंत्र और उपन्यास उपचारात्मक उपायों के विकास के अध्ययन के लिए अनुमति देता है, मानव सीकेडी जैसी एक मॉडल की ओर जाता है.
Abstract
Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements of homeostasis, integrative animal models are necessary to study development and progression of CKD. To study development of CKD and novel therapeutic interventions in CKD, we use the 5/6th nephrectomy ablation model, a well known experimental model of progressive renal disease, resembling several aspects of human CKD. The gross reduction in renal mass causes progressive glomerular and tubulo-interstitial injury, loss of remnant nephrons and development of systemic and glomerular hypertension. It is also associated with progressive intrarenal capillary loss, inflammation and glomerulosclerosis. Risk factors for CKD invariably impact on endothelial function. To mimic this, we combine removal of 5/6th of renal mass with nitric oxide (NO) depletion and a high salt diet. After arrival and acclimatization, animals receive a NO synthase inhibitor (NG-nitro-L-Arginine) (L-NNA) supplemented to drinking water (20 mg/L) for a period of 4 weeks, followed by right sided uninephrectomy. One week later, a subtotal nephrectomy (SNX) is performed on the left side. After SNX, animals are allowed to recover for two days followed by LNNA in drinking water (20 mg/L) for a further period of 4 weeks. A high salt diet (6%), supplemented in ground chow (see time line Figure 1), is continued throughout the experiment. Progression of renal failure is followed over time by measuring plasma urea, systolic blood pressure and proteinuria. By six weeks after SNX, renal failure has developed. Renal function is measured using ‘gold standard’ inulin and para-amino hippuric acid (PAH) clearance technology. This model of CKD is characterized by a reduction in glomerular filtration rate (GFR) and effective renal plasma flow (ERPF), hypertension (systolic blood pressure>150 mmHg), proteinuria (> 50 mg/24 hr) and mild uremia (>10 mM). Histological features include tubulo-interstitial damage reflected by inflammation, tubular atrophy and fibrosis and focal glomerulosclerosis leading to massive reduction of healthy glomeruli within the remnant population (<10%). Follow-up until 12 weeks after SNX shows further progression of CKD.
Introduction
इसके प्रगतिशील प्रकृति, आगामी अंतिम चरण गुर्दे की बीमारी, और संबद्ध हृदय रुग्णता और मृत्यु दर के कारण, सीकेडी एक से बढ़ सार्वजनिक स्वास्थ्य समस्या है 1. सीकेडी प्रगति को धीमा इसलिए एक प्रमुख स्वास्थ्य प्राथमिकता है. सीकेडी homeostasis के जटिल derangements की विशेषता है के बाद से, एकीकृत पशु मॉडल सीकेडी के विकास और प्रगति का अध्ययन करने के लिए आवश्यक हैं. गुर्दे एक दूसरे के साथ बातचीत है कि विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं का एक व्यापक रेंज शामिल हैं. इस जटिलता इन विट्रो में मजाक उड़ाया जा सकता.
सीकेडी में उपन्यास उपचारात्मक उपायों का अध्ययन करने के लिए, हम मानव सीकेडी 2,3 के कई पहलुओं जैसी 5/6th nephrectomy पृथक मॉडल, प्रगतिशील गुर्दे की बीमारी के एक प्रसिद्ध प्रयोगात्मक मॉडल का उपयोग करें. गुर्दे मास में सकल कमी प्रगतिशील केशिकागुच्छीय और tubulo-बीचवाला चोट, शेष नेफ्रॉन के नुकसान और प्रणालीगत और केशिकागुच्छीय उच्च रक्तचाप के विकास का कारण बनता है. यह कार्यक्रम के साथ जुड़ा हुआ हैessive intrarenal केशिका हानि 4, सूजन और ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस. के लिए जोखिम कारक हमेशा endothelial समारोह 5 पर प्रभाव सीकेडी. हम सीकेडी के विकास के लिए अपेक्षाकृत प्रतिरोधी है कि एक चूहा तनाव (लुईस) का इस्तेमाल किया है और इसलिए हम नाइट्रिक ऑक्साइड (सं) रिक्तीकरण 6, 7, 8 और एक उच्च नमक आहार 9 के साथ गुर्दे जन की 5/6th को हटाने संयुक्त. आगमन और acclimatization के बाद, जानवरों के दो दिनों के बाद एल NNA की निरंतरता के साथ सही तरफा uninephrectomy (UNX) के बाद 4 सप्ताह की अवधि के लिए पीने का पानी (20 मिलीग्राम / एल) के लिए पूरक एक सं सिन्थेज़ अवरोध करनेवाला (एल NNA), प्राप्त . एक सप्ताह बाद, गुर्दे जन के 2/3rds के योग nephrectomy (SNX) यानी हटाने के बाईं ओर पर किया जाता है. SNX बाद, जानवरों 4 सप्ताह की अवधि के लिए पीने के पानी में 20 मिलीग्राम / एल LNNA द्वारा फिर से पीछा 2 दिनों के लिए ठीक करने के लिए अनुमति दी जाती है. जमीन चाउ (समय रेखा चित्रा 1 देखें) में पूरक एक उच्च नमक आहार (6%), प्रयोग के दौरान जारी रखा है. टीवह सही पक्ष पर UNX प्रदर्शन करने के कारण और बाईं ओर SNX गुर्दे वाहिकाओं यह आसान गुर्दे शरीर के बाहर सामने आ रहा है जब बहुत अधिक जहाजों को खींचने के बिना गुर्दे तक पहुँचने के लिए बनाता है जो बाईं ओर रह रहे हैं . साहित्य में, मॉडल एक सप्ताह बाद 10,11,12 सही गुर्दे की UNX द्वारा पीछा किया, बाएं गुर्दे के खंभे पहले हटा रहे हैं, जिनमें से वर्णित हैं. हमारे हाथ में इस मॉडल गुर्दे की विफलता का एक और अधिक तेजी से विकास से पता चला है, लेकिन यह भी गुर्दे समारोह के नुकसान में एक बहुत बड़ी भिन्नता. गुर्दे की विफलता की प्रगति प्लाज्मा यूरिया, सिस्टोलिक रक्तचाप और प्रोटीनमेह मापने के द्वारा समय के साथ पीछा किया जाता है. SNX के बाद छह सप्ताह तक, गुर्दे की विफलता, विकसित की है glomerular निस्पंदन दर में उल्लेखनीय कमी (69%) और प्रभावी गुर्दे प्लाज्मा प्रवाह (62%) 13 उच्च रक्तचाप (सिस्टोलिक रक्तचाप> 150 एमएमएचजी), प्रोटीनमेह (द्वारा विशेषता> 50 mg/24 घंटा) और हल्के यूरीमिया (> 10 मिमी). ऊतकीय सुविधाओं tubul शामिलO-बीचवाला क्षति सूजन, ट्यूबलर शोष और फाइब्रोसिस और शेष आबादी (<10%) के भीतर स्वस्थ ग्लोमेरुली की भारी कमी के लिए अग्रणी फोकल ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस से परिलक्षित होता है. अनुवर्ती 12 सप्ताह के बाद जब तक SNX उपचारात्मक उपायों के मूल्यांकन के लिए अवसर की एक खिड़की प्रदान करने, सीकेडी की आगे की प्रगति को दर्शाता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
एक उच्च नमक आहार और अस्थायी ओपन स्कूल निषेध के साथ संयुक्त लुईस चूहे में गुर्दे जन के 5/6th के सर्जिकल हटाने मानव सीकेडी जैसा दिखता है कि सीकेडी के एक मॉडल की ओर जाता है और सीकेडी में उपचारात्मक उपायों के क?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम उसे उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए क्रिस्टा मांद Ouden धन्यवाद. इस तकनीक को आर्थिक रूप से डच गुर्दे की नींव अनुदान C06.2174 द्वारा समर्थित किया गया था. MCV के वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए नीदरलैंड संगठन (NWO) Vidi अनुदान 016.096.359 द्वारा समर्थित है.
Materials
| Reagent | |||
| L-NNA | Sigma-aldrich | N5501 | |
| Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm | Johnson&Johnson | Ms0005 | |
| Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 | Ethicon | V303H | |
| Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 | Ethicon | V392H | |
| Buprenorphine (0.3 mg/ml) | Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals | unknown | |
| Equipment | |||
| Student Tissue Forceps – 1×2 Teeth 12 cm | Fine Science Tools (FST) | 91121-12 | |
| Student Standard Pattern Forceps | FST | 91100-12 | |
| Mayo Scissors | FST | 14010-15 | |
| 2X Semken Forceps | FST | 11008-13 | |
| Student Iris Scissors | FST | 91460-11 | |
| Olsen-Hegar Needle Holder | FST | 12002-14 |
References
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