रुक सूखे आलू कंद नमूने में रैपिड उच्च Throughput amylose निर्धारण
Summary
इस प्रोटोकॉल आयोडीन और स्टार्च में ग्लूकोज अणु की जंजीरों के बीच एक जटिल के गठन पर निर्भर करता है कि डाल वर्णमिति विधि के माध्यम से एक उच्च वर्णन करता है. आयोडीन amylose और amylopectin भीतर लंबी श्रृंखला के साथ दोनों परिसरों रूपों. एक स्टार्च नमूना करने के लिए आयोडीन के अलावा के बाद, amylose और amylopectin की अधिकतम अवशोषण क्रमश: 620 और 550 एनएम पर होता है. amylose / amylopectin अनुपात 620 और 550 एनएम absorbance के मूल्यों के अनुपात से अनुमान लगाया और विशिष्ट ज्ञात सांद्रता के अवशोषण मूल्यों के खिलाफ साजिश रची है, जिसमें एक मानक वक्र करने के लिए उन्हें तुलना की जा सकती है. इस उच्च throughput, सस्ती विधि आलू क्लोन की बड़ी आबादी के मूल्यांकन की अनुमति, विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है.
Abstract
इस प्रोटोकॉल आयोडीन और स्टार्च में ग्लूकोज अणु की जंजीरों के बीच एक जटिल के गठन पर निर्भर करता है कि डाल वर्णमिति विधि के माध्यम से एक उच्च वर्णन करता है. आयोडीन amylose और amylopectin भीतर लंबी श्रृंखला के साथ दोनों परिसरों रूपों. एक स्टार्च नमूना करने के लिए आयोडीन के अलावा के बाद, amylose और amylopectin की अधिकतम अवशोषण क्रमश: 620 और 550 एनएम पर होता है. amylose / amylopectin अनुपात 620 और 550 एनएम absorbance के मूल्यों के अनुपात से अनुमान लगाया और विशिष्ट ज्ञात सांद्रता के अवशोषण मूल्यों के खिलाफ साजिश रची है, जिसमें एक मानक वक्र करने के लिए उन्हें तुलना की जा सकती है. इस उच्च throughput, सस्ती विधि आलू क्लोन की बड़ी आबादी के मूल्यांकन की अनुमति, विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है.
Introduction
एक आलू कंद की ताजा वजन का लगभग 80% पानी है, लगभग सभी शेष शुष्क बात की स्टार्च 1 है. शेष amylose है जबकि स्टार्च (70%) के अधिकांश, amylopectin से बना है. amylose और amylopectin के बीच अनुपात स्टार्च के भौतिक गुणों को प्रभावित करने के लिए सबसे महत्वपूर्ण संपत्ति है. Amylopectin अल्फा 1-6 शाखाओं 2 के साथ एक रेखीय अल्फा 1-4 श्रृंखला है, जबकि amylose, एक रेखीय अल्फा 1-4 ग्लूकोज श्रृंखला है. जैसे आयोडीन तरीके बंधन, अंतर स्कैनिंग calorimetry (डीएससी), उच्च प्रदर्शन आकार अपवर्जन क्रोमैटोग्राफी (HPSEC) और concanavalin एक बातचीत विभिन्न फसल प्रजातियों 3,4 में स्टार्च निर्धारण के लिए विकसित किया गया है. प्रत्येक प्रोटोकॉल यह मुश्किल एक बार में कई नमूने यों के लिए पैमाने पर करने के लिए बना विशेष कौशल और उपकरणों की आवश्यकता है. यहाँ प्रस्तुत विधि बाध्यकारी एक दोहरी तरंगदैर्ध्य आयोडीन है जो Hovenkamp-Hermelink एट अल. 5 से एक संशोधित प्रोटोकॉल हैदाग स्टार्च कणिकाओं पर आधारित विधि. दूसरों की तुलना में इस विधि का लाभ यह सफ़ाई के बिना कच्चे स्टार्च से amylose दृढ़ संकल्प और विधि 4,6 की शुद्धता बढ़ाने के लिए दोहरी तरंगदैर्ध्य प्रणाली का उपयोग शामिल है.
Protocol
Representative Results
Discussion
आलू कंद में amylose सामग्री आम तौर पर 20-35% 7,8 से चलता है. सबसे मानों इस सीमा के बाहर हैं, तो ये संभव त्रुटियों पर विचार: 1) कच्चे डेटा amylose / amylopectin मानक वक्र के निर्माण के लिए जगह खाली डेटा का इस्तेमाल किया गया है, 2) क?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध के लिए अनुदान USDA-ARS रिसर्च एसोसिएट प्रोग्राम और यूएसडीए फसल जर्मप्लाज्म समिति के हिस्से में प्रदान किया गया.
Materials
| Reagents | |||
| Amylose | Sigma | 859656 | |
| Amylopectin | Sigma | A8515 | |
| Perchloric Acid 60% | Sigma | 311413 | Very hazardous to skin and eyes |
| Iodine | Sigma | 23214TD | |
| Potassium iodide | Sigma | 08625JE | |
| Equipment | |||
| Plate Reader | Bio Tek | ELx800 |
References
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