凍結乾燥したジャガイモ塊茎のサンプルの急速なハイスループットアミロース決定
Summary
このプロトコルは、ヨウ素とデンプン中のグルコース分子の鎖の間の複合体の形成に依存して置い比色法による高について説明します。ヨウ素は、アミロースとアミロペクチンの中に長い鎖の両方と複合体を形成している。澱粉試料にヨウ素を添加した後、アミロースとアミロペクチンの最大吸収は、それぞれ、620および550nmで発生する。アミロース/アミロペクチン比は、620および550 nmの吸光度値の比から推定され、特定の既知の濃度を吸収値に対してプロットした標準曲線と比較することもできる。この高いスループットは、安価な方法は、ジャガイモのクローンの大集団の評価ができるように、信頼性と再現性である。
Abstract
このプロトコルは、ヨウ素とデンプン中のグルコース分子の鎖の間の複合体の形成に依存して置い比色法による高について説明します。ヨウ素は、アミロースとアミロペクチンの中に長い鎖の両方と複合体を形成している。澱粉試料にヨウ素を添加した後、アミロースとアミロペクチンの最大吸収は、それぞれ、620および550nmで発生する。アミロース/アミロペクチン比は、620および550 nmの吸光度値の比から推定され、特定の既知の濃度を吸収値に対してプロットした標準曲線と比較することもできる。この高いスループットは、安価な方法は、ジャガイモのクローンの大集団の評価ができるように、信頼性と再現性である。
Introduction
ジャガイモ塊茎の生体重の約80％は水である。ほぼすべての残りの乾物は、澱粉1です。残りはアミロースであり、一方デンプン（70％）のほとんどは、アミロペクチンから構成される。アミロースとアミロペクチンとの比は、デンプンの物理的特性に影響を与える最も重要な特性である。アミロペクチンは、α1-6枝2を有する線状アルファ1-4鎖であるが、アミロースは、直鎖状α-グルコース1-4鎖である。ヨウ素のような方法は、結合、示差走査熱量測定（DSC）は、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（HPSEC）とコンカナバリンAとの相互作用は、異なる作物種3,4におけるデンプンの判定のために開発されている。各プロトコルには、それが困難な時に多数のサンプルを定量化するためにスケールアップすること、特別なスキルや機器を必要とします。我々はここで紹介する方法は、結合二波長ヨウ素であるHovenkamp-Hermelink ら 5から変更されたプロトコルであり、染色されたデンプン粒に基づく方法。他人に対するこの方法の利点は、それを精製することなく、生デンプンのアミロースの決定方法4,6の精度を高めるために二重波長システムの使用を含む。
Protocol
Representative Results
Discussion
ジャガイモ塊茎中のアミロース含量は、典型的には20〜35％ の7,8の範囲である。ほとんどの値がこの範囲外である場合、これらのエラーの可能性を検討し、1）生データは、アミロース/アミロペクチン標準曲線の構築のために代わりにブランクデータを使用した、2）生データは、アミロースの決定のために代わりにブランクデータを用いた/アミロペクチンジャガイモのサンプルから?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究のための資金は、米国農務省、ARSの研究アソシエイト·プログラムおよび農務省作物遺伝資源委員会によって部分的に提供されていました。
Materials
| Reagents | |||
| Amylose | Sigma | 859656 | |
| Amylopectin | Sigma | A8515 | |
| Perchloric Acid 60% | Sigma | 311413 | Very hazardous to skin and eyes |
| Iodine | Sigma | 23214TD | |
| Potassium iodide | Sigma | 08625JE | |
| Equipment | |||
| Plate Reader | Bio Tek | ELx800 |
References
- Composition Hoover, R. molecular structure, and physicochemical properties of tuber and root starches: a review. Carbohydr. 45 (3), 253-267 (2001).
- Bertoft, E., Blennow, A. Structure of Potato Starch. Advances in Potato Chemistry and Technology. , 83-98 (2009).
- Campbell, M. R., Yeager, H., Abdubek, N., Pollak, L., Glover, D. Comparison of methods for amylose screening in maize starches from exotic backgrounds. Cereal Chem. 79, 317-321 (2002).
- Zhu, T., Jackson, D. S., Wehling, R. L., Geera, B. Comparison of amylose determination methods and the development of a dual wavelength iodine binding technique. Cereal Chem. 85, 51-58 (2008).
- Hovenkamp-Hermelink, J., Devries, J., Adamse, P., Jacobsen, E., Witholt, B., Feenstra, W. Rapid estimation of the amylose amylopectin ratio in small amounts of tuber and leaf tissue of the potato. Potato Res. 31, 241-246 (1988).
- Shannon, J. C., Garwood, D. L., Boyer, C. D. Genetics and Physiology of Starch Development. Starch. , 23-82 (2009).
- Haase, N. U., Plate, J. Properties of potato starch in relation to varieties and environmental factors. Stärke. 48 (5), 167-171 (1996).
- Johnston, F. B., Urbas, B., Khanzada, G. Effect of storage on the size distribution and amylose/amylopectin ratio in potato starch granules. Am. Pot. J. 45, 315-321 (1968).
- Gibson, T. S., Solah, V. A., McCleary, B. V. A procedure to measure amylose in cereal starches and flours with concanavalin A. J. Cereal Sci. 25 (2), 111-119 (1997).
- Sun, S., Matheson, N., Yun, S. -. H. Estimation of amylose content of starches after precipitation of amylopectin by concanavalin A. Starch. 42, 302-305 (1990).
