La barre stabilisatrice: Administration de l'alcool à mouches

Résumé

Drosophila a émergé comme un système modèle important pour disséquer les fondements cellulaires et moléculaires de réponses comportementales à l'alcool. Nous présentons ici un protocole pour la collecte de données sur la sensibilité de l'alcool dans un contexte circadien qui peut être facilement appliquée à d'autres expériences et est bien adapté pour la recherche de premier cycle.

Résumé

Les mouches des fruits (Drosophila melanogaster) sont un modèle établi pour la recherche de l'alcool et de la biologie circadienne. Récemment, nous avons montré que l'horloge circadienne module la sensibilité à l'alcool, mais pas la formation de la tolérance. Ici, nous décrivons notre protocole en détail. L'alcool est administré à vol utilisant la barre stabilisatrice. Dans cette configuration, la vapeur d'alcool saturé est mélangé avec l'air humidifié dans des proportions fixes, et administré à vol dans quatre tubes simultanément. Les mouches sont élevées dans des conditions normalisées de manière à minimiser la variation entre les répétitions. Trois jours anciens mouches de différents génotypes ou de traitements sont utilisés pour les expériences, de préférence par vol de deux points différents dans le temps (par exemple, CT 5 et CT 17) de faire des comparaisons directes possible correspondant. Pendant l'expérience, les mouches sont exposés pendant 1 heure pour le pourcentage prédéterminé de la vapeur d'alcool et le nombre de mouches qui présentent la perte du réflexe de redressement (Lorr) ou sedation sont comptées toutes les 5 min. Les données peuvent être analysées selon trois approches statistiques différentes. La première consiste à déterminer l'heure à laquelle 50% des mouches ont perdu leur réflexe de redressement et en utilisant une analyse de la variance (ANOVA) pour déterminer s'il existe des différences significatives entre les points dans le temps. Le second est de déterminer le pourcentage des mouches qui montrent Lorr après un certain nombre de minutes, suivie d'une analyse de variance. La dernière méthode est d'analyser l'ensemble des séries chronologiques en utilisant les statistiques multivariées. Le protocole peut également être utilisé pour des expériences ou des comparaisons non circadiens entre les génotypes.

Introduction

Drosophila melanogaster démontrer réponses comportementales biphasique à l'alcool ¹ qui sont analogues aux réponses humaines à ce médicament ^2,3. Lors de l'exposition initiale à de faibles concentrations d'alcool, les mouches augmentation de l'activité locomotrice d'exposition, remplacé par un manque de coordination motrice, la perte du contrôle postural et les réflexes de redressement (perte du réflexe de redressement: Lorr), et une sédation (absence complète de l'activité du moteur en réponse à la stimulation mécanique) que l'exposition à l'alcool progresse ^4-9. L'horloge circadienne endo....

Protocole

1. Assemblée de la barre stabilisatrice

Justification et vue d'ensemble: Le système est conçu pour administrer des pourcentages contrôlées de vapeur d'alcool aux mouches. Remarque: La figure 1 donne un aperçu schématique de la barre stabilisatrice mis en place comme décrit ci-dessous en trois étapes (assemblage de l'écoulement de l'air, mise en place de l'alcool et des bouteilles d'eau, et l'assemblage des flacons d'observation). En bref, un flux d'air constant est divisé en deux fractions qui sont gondolées par l'alcool et de l'eau, respectivement, mélangés, et administrés à 4 fl....

Résultats

Modulation circadienne de l'alcool Sensibilité à l'aide de 50% Lorr comme un marqueur.

Un exemple représentatif montrant modulation circadienne de la sensibilité de l'alcool au cours de la journée est présenté à la figure 2. Lorr a été mesurée à six points dans le temps au cours de la 2 ^e journée de DD à Canton-S et les 50% Lorr a été déterminée pour chaque point de temps. L'analyse a montré un effet significatif du moment de la journée (ANOVA: F <.......

Discussion

Les coûts de l'abus d'alcool et l'alcoolisme pour la société est énorme, tant en termes de coûts humains et économiques ^{29 30,31.} Drosophile comme modèle propose un système rapide et souple pour examiner rapidement les réponses comportementales d'un grand nombre d'individus et en tant que tel a été largement utilisé à la fois pour la recherche et l'alcool ^5,7,32-34 circadien ^35-37.

Ici, nous avons décrit un protocole simple po.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Alcool 190 proof	Divers
Aérateur	Animalerie		Nous utilisons Whisper 60
Tube en silicone 1/8"	VWR	408060-0030
120° ; Connecteur en Y	VWR	82017-256
Déconnexions rapides	VWR	46600-048
Colliers de serrage en plastique	Produits Bell-art	132250000	Soit ce dernier, soit le suivant
Régulateur d’air miniature	McMaster-Carr	8727K11	Ce dernier ou le précédent
Support de montage du régulateur d’air miniature	McMaster-Carr	9891K66
Débitmètre Gilmont taille 12	VWR	29895-242
Pinces à outils	McMaster-Carr	1722A43	Pour tenir les débitmètres
Flacon	VWR	89092-722
Bouchon en caoutchouc à deux trous	VWR	59585-186	S’adapte aux flacons
Tubes en verre Pyrex de 5 mm	Trikinetics	PGT5x65	S’adapte le mieux au bouchon précédent
Ruban téflon	Quincaillerie		Pour obtenir un ajustement parfait dans les bouchons si nécessaire
Bouchon en caoutchouc à deux trous	VWR	59582-122	Convient à nos bouteilles
Pipettes en verre jetables	VWR	53283-768	Coupé à longueur et plié par chauffage
Filet en nylon très fin	VWR	Diverses
ampoules de 15 watts	Quincaillerie		Feu
rouge zénithalFiltres			Lumière rouge zénithière
Mini lampes de poche avec filtres rouges	Mag-light

locale de lumière de sécurité rouge photographique