Cet article présente une méthodologie complète pour préparer et conserver In vitro Coupes d'hippocampe aiguë de souris adultes. Ce protocole permet l'enregistrement de potentialisation à long terme durable très stable (LTP) pendant plus de 8 heures avec un taux de réussite de 95%.
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Article de méthode
Amélioration de la préparation et la conservation de l'hippocampe Tranches de souris pour un enregistrement très stable et reproductible de potentialisation à long terme
Dans cet article
Résumé
Résumé
Potentialisation à long terme (LTP) est un type de plasticité synaptique caractérisée par une augmentation de la force synaptique et censé être impliqué dans l'encodage de la mémoire. LTP a suscité dans la région CA1 de tranches d'hippocampe aiguë a été largement étudiée. Cependant, les mécanismes moléculaires qui sous-tendent la phase d'entretien de ce phénomène sont encore mal compris. Cela pourrait être dû en partie aux différentes conditions expérimentales utilisées par les différents laboratoires. En effet, la phase de maintien de la LTP est fortement dépendant de paramètres extérieurs tels que l'oxygénation, la température et l'humidité. Il dépend aussi de paramètres internes tels que l'orientation du plan de tranchage et la viabilité de la tranche après dissection.
L'optimisation de tous ces paramètres permet l'induction d'une potentialisation très reproductible et très stable à long terme. Cette méthode offre la possibilité d'explorer plus avant les mécanismes moléculaires impliqués dans l'augmentation stablela force synaptique dans des coupes d'hippocampe. Il souligne également l'importance des conditions expérimentales dans l'investigation in vitro de phénomènes neurophysiologiques.
Introduction
Aujourd'hui, il ya une compréhension limitée de la façon dont les souvenirs complexes sont mémorisés et rappelés au niveau du circuit neuronal. Cependant, une hypothèse unificatrice de stockage de mémoire est disponible et largement acceptée: les souvenirs sont stockés comme des changements dans la force des connexions synaptiques entre les neurones dans le système nerveux central. À elle seule, la recherche sur la plasticité synaptique a largement bénéficié de deux découvertes révolutionnaires. (1) Dans un essai séminal, Bliss et Lomo 1, en utilisant le lapin anesthésié intact, a constaté que la livraison d'une brève haute fréquence (1 sec, 100 ....
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Protocole
Toutes les procédures d'animaux ont été effectuées en conformité avec les Instituts de réglementation de la Santé nationale pour le soin et l'utilisation des animaux en recherche et avec l'accord du comité d'éthique local.
1. Préparation de Artificial liquide céphalo-rachidien
Les mêmes médias sont utilisés pour disséquer, couper et perfuser tranches (1 ml / min) pendant la période de repos et les enregistrements électrophysiologiques. Ce support est composée de NaCl 124 mM, 4,4 mM de KCl, 26 mM NaHCO3, 1 mM de NaH 2 PO 4, 2,5 mM de CaCl2, 1,3 mM M....
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Résultats
Cette méthodologie a été utilisée pour analyser les propriétés de potentialisation à long durable à long terme induite dans des coupes d'hippocampe aiguë de souris C57BL/6J adultes (JANVIER SAS, France) 14. Étonnamment, l'amélioration des conditions expérimentales a conduit à une nouvelle façon de regarder LTP. Nous avons montré que augmentation durable de la force synaptique n'exigeait pas la synthèse de nouvelles protéines.
Ici, nous montrons que l'induction de L.......
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Discussion
Nous avons développé dans notre laboratoire un protocole résultant de la combinaison des méthodes développées et utilisées par d'autres laboratoires ayant une grande expertise dans la LTP enregistrements 11,17. Ce protocole est adapté à l'hippocampe de souris adulte et peut être utilisé chez les animaux de tout âge et de tout génotype de fond. Il permet également l'analyse de LTP dans des souris transgéniques développement des maladies neurodégénératives comme la maladie d'Alzheimer 18,19.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Nous remercions Bernard Foucart pour l'assistance technique. Ce travail a été financé par le Fonds belge de la recherche scientifique (FRS-FNRS) et par le Fonds Reine Elisabeth pour la recherche médicale. Agnès Villers est chercheur au Fonds de la Recherche Scientifique.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Réactif/Matériel | |||
| NaCl | Sigma - Aldrich | S7653 | |
| NaHCO3 | Sigma - Aldrich | S8875 | |
| KCl | Sigma - Aldrich | P9333 | |
| D-glucose | Sigma - Aldrich | G7528 | |
| NaH2PO4 | Sigma - Aldrich | S9638 | |
| MgSO4 1M | Sigma - Aldrich | 63126 | |
| CaCl2 | Sigma - Aldrich | C4901 | |
| Carbogen | Air Liquide (Belgique) | ||
| Capillaires | WPI, Inc. (Royaume-Uni) | TW150-4 | |
| Électrodes de stimulation | FHC (USA) | CE2B30 | |
| Outils chirurgicaux | FST (Allemagne) | ||
| Papier filtre 84 g/m2 | Sartorius | FT-3-105-110 | |
| Mesh | Lycra | 15 den | |
| Glue | UHU | plus endfest300 | |
| Instrument | |||
| Amplifier | WPI, Inc. (UK) | ISO-80 | |
| Interface chambre d’enregistrement | FST (Allemagne) | ||
| Pompes péristaltiques | Gilson (USA) | Minipuls 3 | |
| Régulateur | de température Université d’Edimbourg | www.etcsystem.com | |
| Tissue Chopper | Mcllwain | ||
| Stimulateurs | Grass (USA) | S88X + SIU-V | |
| Analyse du programme | WinLTP | www.winltp.com | |
| Micromanipulateurs | Narishige | MM-3 et MMO-220A | |
| Microscope chirurgical | Leica Microsystem | ||
| Convertisseur A/N | National Instruments | NIPCI-6229 Série |
Références
- Bliss, T. V., Lomo, T. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anaesthetized rabbit following stimulation of the perforant path. J. Physiol. 232 (2), 331-356 (1973).
- Douglas, R. M., Goddard, G. V.
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Réimpressions et autorisations
