Determinação de ácidos graxos tolerável e Concentrações toxina da cólera Usando Humanos células epiteliais intestinais e BALB / c mouse macrófagos

Summary

Partimos para determinar as concentrações toleráveis ​​de três ácidos graxos (ácidos oléico, linoléico e linolênico) e toxina da cólera que não significativamente e adversamente afetar a sobrevivência da célula por solubilização dos ácidos graxos e da toxina e usá-los em ensaios de sobrevivência celular.

Abstract

O papel positivo dos ácidos graxos na prevenção e combate de doenças não-humanos e humanos têm sido e continuam a ser amplamente documentado. Essas funções incluem influências sobre doenças infecciosas e não infecciosas, incluindo a prevenção da inflamação, bem como a imunidade da mucosa para doenças infecciosas. A cólera é uma doença intestinal aguda causada pela bactéria Vibrio cholerae. Ela ocorre em países em desenvolvimento e se não tratada, pode resultar em morte. Embora existam vacinas para a cólera, eles nem sempre são eficazes e são necessários outros métodos preventivos. Partimos para determinar as concentrações toleráveis ​​de três ácidos graxos (ácidos oléico, linoléico e linolênico) e toxina da cólera usando o mouse BALB / C macrófagos e células epiteliais intestinais humanas, respectivamente. Nós solubilizado os ácidos gordos superiores e os ensaios de proliferação de células utilizadas para determinar as gamas de concentração e concentrações específicas dos ácidos gordos que não estãot prejudiciais para a viabilidade da célula epitelial intestinal humana. Nós solubilizado a toxina da cólera e utilizado num ensaio para determinar as gamas de concentração e concentrações específicas de que a toxina da cólera não é estatisticamente diminuir a viabilidade celular em ratinhos BALB / C macrófagos.

Encontrámos as concentrações óptimas de ácidos gordos para estar entre 1-5 ng / mL, e que, para a toxina da cólera de ser <30 ng por tratamento. Estes dados podem ajudar estudos futuros que visem encontrar um papel mucosa protetora para os ácidos graxos na prevenção ou alívio de infecções de cólera.

Introduction

Os benefícios de saúde de ácidos graxos, como o oléico, linoléico e linolênico têm sido e continuam a ser documentado. Por exemplo, o ácido oleico ajuda a facilitar a penetração dos fármacos lipofílicos no ^1,2 corpo, a doença cardíaca coronária reduz em 24% quando substituídos por ácidos gordos saturados ^3, e é utilizada para o tratamento de doenças metabólicas como a adrenoleucodistrofia ⁴ que é um X-ligados distúrbio genético do metabolismo dos ácidos gordos. . Enquanto um precursor necessário para o ácido araquidónico em mamíferos, o ácido linoleico (ao contrário do ácido oleico) não é sintetizada pelo corpo e devem ser obtidos através de fontes externas, tais como o consumo de semente de linho ⁵ Estudos mostram vários efeitos benéficos à saúde de ácido linoleico, tais como: propriedades anti-envelhecimento para a pele; ^seis propriedades anti-inflamatórias; ⁷ reduziu a proliferação de células de carcinoma colorretal e próstata; ⁸ ea capacidade para combater a obesidade e promoção o^9. linolênico f saúde cardiovascular desempenha um papel na redução da inflamação periodontal, tromboxano ¹⁰ e modulando a biossíntese da prostaciclina e ^11.

Arpita ¹² estudaram a influência dos ácidos graxos biliares e colesterol em V. expressão de fatores de virulência e motilidade cholerae 's. Yamasaki ¹³ indicaram que o extrato de metanol a partir de pimentas vermelhas, e outros compostos extraídos naturalmente, pode, potencialmente, diminuir a produção de toxina da cólera. É concebível a considerar a utilização de produtos alimentares que são ricos em ácidos gordos superiores (tais como sementes de linho) na prevenção e alívio de doenças infecciosas tais como a cólera através do fornecimento de imunidade da mucosa. Foi realizado investigações para solubilizar os ácidos gordos e para determinar, usando testes de proliferação de células, a concentração máxima de ácidos gordos que as células epiteliais intestinais humanas pode tolerar sem efeitos prejudiciais sobre a ceviabilidade ll. Colocámos a hipótese de que os ácidos oleico, linoleico e linolénico, proporcionar um efeito benéfico sobre a viabilidade das células em concentrações mais baixas, mas que, em concentrações mais elevadas que são tóxicos para as células. Também solubilizado a toxina da cólera e determinada a concentração máxima de toxina da cólera que BALB / C de rato macrófagos pode tolerar sem uma diminuição significativa da viabilidade celular. Nossa hipótese é um efeito tóxico da toxina da cólera na viabilidade celular, mesmo em nível muito baixo. O método de solubilização de uma toxina da cólera e utilizá-la para determinar a quantidade máxima da toxina que as células podem tolerar sem uma diminuição significativa na capacidade de sobrevivência proporciona uma vantagem para estudos futuros. Por exemplo, uma combinação das metodologias acima podem ser utilizadas para determinar se os ácidos gordos de fornecer células com a imunidade da mucosa contra a infecção de cólera. Para o melhor de nosso conhecimento, esta metodologia racional e não foi explorado.

Nós discuss como os nossos dados preliminares podem ser utilizados em investigações posteriores para determinar se o oleico, linoleico e linolénico fornecer células com a imunidade da mucosa contra a infecção de cólera.

Protocol

1. Cultura de Tecidos Use Mus musculus macrófagos (BALB / c) para as determinações da toxina da cólera. Inicialmente cultura todos M. células musculus seguindo as instruções do fornecedor. Propaga BALB / c células ratos em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco com L-glutamina completado com 10% de soro fetal bovino, e antibióticos / antimicóticos ou meio RPMI 1640 de base de 1% completado com 10% de soro fetal bovino, 5% de L-glutamina, e 1 % de reagente de antib…

Representative Results

Determinação da concentração ótima de Ácidos Graxos A concentração óptima de ácidos gordos é definida como a concentração máxima em que o crescimento celular é comparável ou superior à das células de controlo, com relativamente baixa variabilidade nos resultados. Para determinar a concentração óptima de oleico, células de ácidos linoleico e linolénico, foram inicialmente tratadas com várias concentrações de cada ácido gordo em grandes incrementos e depois com pequeno…

Discussion

Sugestão de concentração de ácidos graxos e toxina da cólera

Embora o mecanismo exato de como ácidos graxos aumentar a imunidade da mucosa é desconhecida, vários estudos têm tentado investigar os seus efeitos benéficos. Este estudo tem como objectivo proporcionar o método para determinar a concentração máxima de ácidos gordos que as células podem tolerar bem como a concentração máxima de toxina da cólera que as células podem tolerar sem uma influência significativa sobre a…

Materials

			Cells/Reagent
Mus musculus macrophages	ATCC	ATCC RAW 264.7
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium	ATCC	30-2002
L-glutamine	ATCC	30-2115
Fetal bovine serum	Bio-west	S0250
Antibiotic/antimycotic	Hyclone	SV3007901
Human intestinal epithelial cells	ATCC	ATTC CCL-241
HybriCare media	ATCC	46-X
Oleic Acid	Sigma-Aldrich	O1008
Linoleic Acid	Sigma-Aldrich	L-1376
Linolenic Acid	Sigma-Aldrich	L-2376
Cholera toxin	Sigma-Aldrich	C8052
			Equipment
BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates	BD Biosciences	351172
Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software	Dynex	91000101