인간의<em> 전의 VIVO</em> 죽상 경화 모델 병변 생물학을 연구하는
Summary
죽상 경화증은 만성 염증 과정입니다. 이 원고는 신선한 경동맥 또는 관상 동맥 플라크를 조사하기 위해 생체 모델을 사용하기 쉽게 보여줍니다. 생체 모델은 다양한 방법으로 분석 할 수있는 인간의 동맥 경화 병변 결과에 염증 환경에 잠재적 인 물질을 조사 할 수 있습니다.
Abstract
죽상 경화증은 혈관의 만성 염증성 질환이다. 죽상 동맥 경화 병변의 염증 화합물을 연구하는 다양한 방법이 있습니다. 마우스 모델은 죽종의 염증 과정을 연구하는 중요한 도구입니다 만,이 모델은 쥐와 인간의 면역 시스템 사이의 표현형과 기능의 차이에서 고통. 시험관 내 세포 실험을 구체적으로의 물질에 의한 세포 유형에 의존하는 변화를 평가하는 데 사용됩니다 또한, 그러나 문화 의존적 변형 및 동맥 경화 병변의 염증성 화합물의 컨텍스트에서 특정 분자의 영향을 분석하는 무능력 결과의 영향을 제한한다. 또한, 인간의 혈액에 대한 관심이 분자의 수준을 측정하는 추가 임상 관련성을 조사하는 데 도움이 있지만, 이것은 조직과 로컬이 아닌 염증을 나타냅니다. 따라서, 우리는 여기에 인간의 동맥 경화 병변 생물학을 연구하는 플라크 문화 모델을 설명생체. 즉, 신선한 플라크는 내막 절제술 또는 관상 동맥 우회술을받은 환자에서 얻을 수 있습니다 및 사용까지 얼음에 RPMI 매체에 저장됩니다. 표본은 같은 사이토 카인 케모카인 단독으로 또는 시간의 정의 기간 동안 조합으로 그 물질에 추가하여 RPMI 매체를 포함, 48 – 웰 플레이트에 무작위로 배포 한 다음 작은 조각으로 절단됩니다. 배양 후, 플라크 조각 충격, mRNA의 분리를 위해 얼 수있다 면역 조직 화학 염색을 위해 파라핀 또는 OCT에서 내장 또는 분쇄 및 서부 모래 바닥에 용해. 또한, 세포는 유동 세포 계측법 분석 플라크로부터 분리 될 수있다. 또, 상청액은 ELISA에 의해 단백질 측정을 위해 수집 될 수있다. 결론적으로, 제시된 생체 모델은 더 새로운 질병의 메커니즘과 치료 표적의 식별 될 수 있습니다 염증성 병변 생물학을 연구 할 수있는 가능성을 엽니 다.
Introduction
만성 염증성 질환과 같은 동맥 경화증은 선진국 1-2에서 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 죽상 동맥 경화증, 특히 급성 관상 동맥 증후군의 합병증으로는 죽상 혈전증과 혈관 폐색 3의 원인이 취약한 병변의 파열에 연결되어있다. 선천성 및 적응성 면역은 죽종 2,4-5의 모든 단계에서 참여하는 것 같습니다. 상당한 진전이 심근 경색의 치료, 동맥 경화의 예방 효과 및 심혈관 사건에서했다하더라도 여전히 해결되지 않은 있습니다. 따라서, 병변 생물학을 공부하는 것은 죽상 경화증의 병태 생리에 대한 우리의 지식을 증가시키기위한 필수적이며, 새로운 치료 표적 및 새로운 치료법의 개발을 식별 할 수 있도록.
많은 경우에, 뮤린 모델은 특정 질병의 병태 생리를 조사하는 데 사용된다. 그러나, 마우스 모델을 사용하여 죽종을 공부하는 것은 ACCO입니다몇 가지 제한 사항에 의해 mpanied : (1) 일반적으로 동맥 경화 마우스는 높은 콜레스테롤 다이어트를받을 수 있습니다. 이러한 모델에서 콜레스테롤 수치가 상승 된 콜레스테롤의 혈중 농도 6 환자의 결과와 비교 될 수 없다. (2) 쥐와 인간의 면역 시스템 사이에 상당한 차이가 있습니다; 인간 T 세포에서 인간 Foxp3를 발현 반드시 규제 7 표현형을 부여하지 않는 반면 Foxp3를 따라서는 뮤린 규제 T 세포의 특정 마커이다. 또한, 인간에 정의 된 Th1/Th2 패러다임은 뮤린 T 세포에 완전히 양도 아니다. (3) 비교 예 F4/80 클래식 (M1)의 마커로 뮤린 단핵구 및 대 식세포를 식별하는 데 사용되는 마커의 수는 대안 (M2)의 활성화 패턴을 인간 골수 세포 8에 존재하지 않는다. (4) 쥐와 인간의 말초 혈 단핵 세포의 유전자 발현은 9 상당히 다른 것으로 밝혀졌다.
따라서, 우리의 이해를 높이기 위해인간의 죽상 동맥 경화증의 만성 염증성 과정, 우리는 인간의 조직, 혈액, 세포와 협력 모델을 사용하도록해야합니다. 여기서 우리는 인간의 염증성 병변 생물학의 개념에 잠재적 인 새로운 물질의 조사를 허용 인간의 플라크 조직 문화의 모델을 설명합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 우리가 동맥 경화 병변의 생물학에 잠재적으로 관련 물질의 영향을 조사하기 위해 생체 플라크 문화 모델을 제시한다. 이러한 생체 외 방법의 주요 이점은 염증 세포 및 그 세포의 상호 작용뿐만 아니라 염증성 경로와 인간의 죽상 경화 병변 내의 캐스케이드에 명시된 물질의 영향을 평가하는 기능이다. 여러 가지 가능한 방법 (예를 들어, RT-PCR, 웨스턴 블롯, 면역 조직…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 우수한 기술 지원을 나딘 Wambsganss 감사합니다. 이 작품은 독일 연구 재단 (DFG) ER의 682/2-1와 C. Erbel에 심장의 독일 사회에서 연구 장학금뿐만 아니라 L. 조 독일어 학회 하이델베르크에서 연구 장학금에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI medium | Gibco | 21875-091 | n/a |
| FCS | Gibco | 10270-106 | n/a |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P-4458 | n/a |
| 15 ml tube | Sarstedt | 62,554,502 | n/a |
| culture dish (60mm) | Orange Scientific | 5550200 | n/a |
| LPS | Sigma | L4516 | n/a |
| Cell Culture Plates 48-well | Greiner | 677102 | n/a |
| Scalpel – single use | Feather | FEA200130011 | n/a |
| TissueLyser | Precellys 24 Dual | Cat. No. EQ03119.200.RD010.0 | n/a |
| RNeasy (Mini) Kit | Qiagen | Cat. No. 74104 | n/a |
| Boehringer cDNA kit | Roche Diagnostics | Cat. No. 11483188001 | n/a |
| Nanodrop Spectrophotometer | Thermo Fisher Scientific | n/a | |
References
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