परिधीय तंत्रिका चोट के बाद कार्यात्मक वसूली का मूल्यांकन करने के लिए घ्राण ensheathing कोशिकाओं के प्रत्यारोपण
Summary
घ्राण ensheathing कोशिकाओं (OECs) प्राथमिक घ्राण न्यूरॉन्स के विकास की अनुमति है जो तंत्रिका शिखा कोशिकाओं रहे हैं. इस विशिष्ट संपत्ति सेलुलर प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हम यहाँ एक laryngeal तंत्रिका चोट मॉडल में OECs के उपयोग पर आधारित सेलुलर प्रत्यारोपण का एक मॉडल प्रस्तुत करते हैं.
Abstract
घ्राण ensheathing कोशिकाओं (OECs) प्राथमिक घ्राण न्यूरॉन्स के विकास और regrowth की अनुमति जो तंत्रिका शिखा कोशिकाओं रहे हैं. दरअसल, प्राथमिक घ्राण प्रणाली भी वयस्क पशुओं में नए न्यूरॉन्स को जन्म देने की क्षमता की विशेषता है. यह विशेष रूप से क्षमता neurogenesis के लिए एक अनुकूल microenvironment बना जो OECs की उपस्थिति के कारण आंशिक रूप से है. OECs की इस संपत्ति रीढ़ की हड्डी में चोट के मॉडल के रूप में सेलुलर प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल किया गया है. परिधीय तंत्रिका तंत्र केंद्रीय तंत्रिका तंत्र से तंत्रिका चोट के बाद पुनर्जीवित करने के लिए अधिक से अधिक क्षमता है, हालांकि पूरी वर्गों laryngeal तंत्रिका transection के चेहरे के बाद विशेष रूप से axonal regrowth के दौरान misrouting प्रेरित. विशेष रूप से, आवर्तक laryngeal तंत्रिका (RLN) की पूर्ण सेक्शनिंग मुखर रस्सियों के synkinesis में जिसके परिणामस्वरूप न्यायपालिका axonal regrowth लाती है. इस विशिष्ट मॉडल में, हम OECs प्रत्यारोपण कुशलतापूर्वक axonal regrowth बढ़ जाती है कि पता चला है.
ve_content "> OECs घ्राण म्यूकोसा (OM-OECs) और घ्राण बल्ब (ओ OECs) दोनों में मौजूद कई subpopulations का गठन किया जाता है. हम यहाँ एक में OECs के इन विभिन्न subpopulations के उपयोग पर आधारित सेलुलर प्रत्यारोपण की एक मॉडल पेश RLN चोट मॉडल. इस प्रतिमान का उपयोग करना, ओ OECs और ओम-OECs के प्राथमिक संस्कृतियों RLN की धारा और सम्मिलन के बाद Matrigel में प्रत्यारोपित किया गया. दो महीने सर्जरी के बाद, हम videolaryngoscopy पर आधारित पूरक विश्लेषण द्वारा प्रतिरोपित जानवरों का मूल्यांकन, विद्युतपेशीलेखन (EMG) , और ऊतकीय पढ़ाई. पहले, videolaryngoscopy विशेष में पेशी cocontractions घटना. फिर, EMG का प्रदर्शन समृद्धि और मांसपेशियों की गतिविधियों के तुल्यकालन का विश्लेषण करती है. अंत में, toluidine नीले रंग धुंधला पर आधारित ऊतकीय पढ़ाई संख्या और प्रोफाइल की मात्रा का ठहराव की अनुमति दी, हमें स्वरयंत्रज कार्यों का मूल्यांकन करने की अनुमति दी मेलिनकृत फाइबर की.सब एक साथ, हम, संस्कृति, आईडीई अलग करने के लिए कैसे यहाँ का वर्णनओम और ओबी से ntify और प्रत्यारोपण OECs RLN धारा सम्मिलन और कैसे axonal regrowth और laryngeal कार्यों पर इन प्रतिरोपित कोशिकाओं की दक्षता का मूल्यांकन और विश्लेषण करने के बाद.
Introduction
घ्राण म्यूकोसा (ओम) केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में परिधीय तंत्रिका तंत्र और घ्राण बल्ब (ओ) में, प्राथमिक घ्राण प्रणाली दो अलग भागों से बना है. प्राथमिक घ्राण प्रणाली स्तनपायी प्रजातियों में जीवन भर स्वयं को नवीनीकृत करने के लिए प्राथमिक घ्राण न्यूरॉन्स (PON) की क्षमता की विशेषता है. इस क्षमता के कारण ओम में तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं की उपस्थिति को संभव बनाया है. ओम से ओबी को PON विकास और regrowth घ्राण ensheathing कोशिकाओं बुलाया विशेष glial कोशिकाओं (OECs) से मदद की है. OECs 1 ओबी को ओम से PON की neurogenesis के लिए एक अनुकूल microenvironment बना जो तंत्रिका शिखा कोशिकाओं रहे हैं. इस प्रकार, OECs कोशिकाओं 2,3 के विभिन्न subpopulations गठन ओम में और ओबी में पाया जा सकता है. OECs के विभिन्न गुणों कई तंत्रिका तंत्र घाव लद 4 में सेलुलर प्रत्यारोपण के लिए उन्हें इस्तेमाल करने के लिए नेतृत्व वैज्ञानिकों है. दरअसल, OECs उत्पादन वृद्धि कारकों, जनसंपर्क, glial डरा कमomote axonal regrowth, और स्वतंत्र रूप से astrocytes 5,6 साथ मिलाना कर सकते हैं. हालांकि, इन अध्ययनों के विशाल बहुमत के लिए रीढ़ की हड्डी की चोट (एससीआई) के आधार पर कर रहे हैं, उनमें से कुछ परिधीय तंत्रिका चोट (PNI) 7,8 के बाद OECs का इस्तेमाल किया है.
परिधीय तंत्रिका तंत्र तंत्रिका चोट के बाद पुनर्जीवित करने के लिए एक महान क्षमता है हालांकि, पूरा वर्गों न्यायपालिका axonal regrowth प्रेरित. दरअसल, (RLN) चेहरे या आवर्तक laryngeal नसों की पूरी लेनदेनों के बाद misrouted axons synkinesis बुलाया पेशी cocontractions कारण. इसलिए यह axonal regrowth यों के लिए ही नहीं बल्कि मांसपेशियों में संकुचन की दक्षता का मूल्यांकन करने के PNI के एक मॉडल का प्रस्ताव करने के लिए प्राथमिक महत्व का है. साहित्य में वर्णित सबसे आम मॉडल चेहरे तंत्रिका घाव 9,10 पर आधारित है. इस मॉडल में, कार्यात्मक मूल्यांकन गलमुच्छा आंदोलनों 10 की वसूली पर आधारित हैं. हालांकि यह mov की दक्षता प्रदर्शित करने के लिए जटिल हैements और मांसपेशियों cocontractions घटना भेदभाव करने के लिए. हम यहाँ एक RLN घाव पर आधारित एक मॉडल का प्रस्ताव. इस मॉडल axonal regrowth और मुखर रस्सियों के आंदोलनों लेकिन यह भी सेलुलर प्रत्यारोपण 11,12 के बाद इन आंदोलनों की दक्षता और कार्यक्षमता न केवल के मूल्यांकन की अनुमति देता है. इस प्रोटोकॉल एक RLN अनुभाग / सम्मिलन मॉडल में ओम और ओबी से संस्कृति और प्रत्यारोपण OECs कदम प्रक्रिया द्वारा एक कदम प्रदान करता है और शल्य चिकित्सा के बाद पशुओं का मूल्यांकन करने के लिए.
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ प्रस्तुत तकनीक OECs परिधीय तंत्रिका चोट मॉडल में सेलुलर प्रत्यारोपण अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी मॉडल बनाते हैं. सेल संस्कृति प्रोटोकॉल अपेक्षाकृत सरल है और आसानी से किया जा सकता है. दूसरी ओर, शल्य ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों पांडुलिपि संपादन के लिए उनकी वित्तीय सहायता के लिए और डॉ. फैनी Barnabé-Heider को Adir (अधिवास Aux Insuffisants Respiratoires à सहयोगी) और Fondation डे ल Avenir स्वीकार करना चाहते हैं.
Materials
| DMEM/F12 | Invitrogen | E3521T |
| FBS | Invitrogen | E3387M |
| Penicilin/streptomycin | Invitrogen | 1152-8876 |
| HBSS | Invitrogen | M3467Y |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | M3513P |
| Cacodylate | Merck | 1.03256.0100 |
| DDSA | BIOVALLEY | 00563-450 |
| MNA | BIOVALLEY | 00886-450 |
| BDMA | BIOVALLEY | 00141-100 |
| POLYBED 812 | BIOVALLEY | 08791-500 |
| PE anti-mouse | BD Bioscience | 550589 |
| Matrigel GFR | BD Bioscience | 356231 |
| Collagenase A | Roche | 10103586001 |
| Mouse anti P75 | Chemicon | MAB 365 |
| 11.0 Wire | Ethicon | FG 2881 |
| Toluidine Blue | RAL DIAGNOSTICS | 361590-0025 |
| Centrifuge | Sigma | Sigma 2-16PK |
| Incubator | Thermo scientific | |
| Laminar flow hood | Faster | BH-EN 2003 S |
| Flow cytometer | BD Bioscience | FACSCalibur |
| Microscope | Zeiss | |
| Videolaryngoscope | Karl Storz Endoskope | Telecam SL NLSC 20212120 |
| Acquisition system | ADInstruments | Powerlab system |
| Pyramitome Ultramicrotomy System | Leica | Ultracut S |
| Image analysis system | Explora Nova | Mercator |
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