La micro-injection stéréotaxique de vecteurs viraux exprimant la recombinase Cre pour étudier le rôle des gènes cibles de cocaïne préférence de place conditionnée

Résumé

Cet article décrit comment micro-injection de vecteurs viraux dans le cerveau de la souris, puis tester dans un endroit paradigme de préférence conditionné qui comprend une phase d'acquisition, l'extinction et la réintégration.

Résumé

Microinjection viraux adéno-associé vecteurs recombinants (rAAV) exprimant la recombinase Cre dans les régions du cerveau de souris distinctes sélectivement les gènes de finale de l'intérêt permettent une régulation temporelle et régionale spécifique de délétion du gène, par rapport aux méthodes existantes. Alors que la suppression conditionnelle peut également être obtenue par des souris d'accouplement qui expriment la recombinase Cre sous le contrôle de promoteurs de gènes spécifiques avec des souris porteuses d'un gène floxé, la micro-injection stéréotaxique permet de cibler des zones discrètes du cerveau à des moments déterminés expérimentateur d'intérêt. Dans le cadre de la cocaïne préférence de place conditionnée, et d'autres paradigmes comportementaux de la cocaïne comme l'auto-administration ou de sensibilisation psychomoteur qui peuvent impliquer phases de réintégration retrait, l'extinction et / ou, cette technique est particulièrement utile pour explorer la contribution unique de gènes cibles de ces distinct phases de modèles comportementaux de la plasticité induite par la cocaïne. Plus précisément,cette technique permet l'ablation sélective des gènes cibles lors des phases distinctes d'un comportement à tester leur contribution au comportement dans le temps. En fin de compte, cette compréhension permet de thérapies plus ciblées qui sont mieux à même de s'attaquer aux facteurs de risque les plus puissants qui se présentent au cours de chaque phase du comportement addictif.

Introduction

La cocaïne est un psychostimulant très renfort. Après une exposition répétée, plusieurs adaptations moléculaires et cellulaires se produisent en récompense pertinente circuits du cerveau qui sont censés entraîner compulsif comportement cherchant le médicament, ce qui incite les taux élevés de rechute qui posent un sérieux problème clinique ^1. La cocaïne exerce ces effets comportementaux durables en régulant l'expression des gènes. Pour étudier les adaptations qui découlent de l'utilisation chronique de la cocaïne, des modèles de rongeurs précliniques ont été utilisés. Un tel modèle est la préférence lieu (RPC) paradigme conditionné. Ce modèle impli....

Protocole

Toutes les procédures sont menées en conformité avec le Weill Cornell Medical College Institutional Animal Care et les règles du Comité d'utilisation.

1. Préparation et installation de livraison stéréotaxique de vecteurs viraux

1. Si un instrument, écouvillon stérile, ou porter des gants stériles main est contaminée en entrant en contact avec une surface non stérile, jeter ou re-stériliser l'instrument en utilisant un stérilisateur à billes chaud, jeter l'écouvillon ou changer pour de nouveaux gants stériles.
2. Placez une cage de la souris avec la literie sur un bloc de chaleur pour réchauffer pour la récupérat....

Résultats

RPC

Après l'exécution RPC sur des souris microinjectés, il faut vérifier que la cohorte de contrôle-injecté (rAAV-GFP) chez la souris ont normalement acquis préférence pour la chambre drogue apparié (Figure 1A, 1B). Les souris sont considérés comme ayant acquis préférence pour une chambre particulière lorsque préférence de cocaïne (temps passé dans la chambre de la cocaïne-appareillé moins de temps passé dans la chambre saline-apparié) est significativement plus élevée par .......

Discussion

Régional et l'ablation d'un gène spécifique temporellement par micro-injection stéréotaxique de vecteurs viraux associés avec le RPC qui comporte des phases de remise en extinction et de permettre de retrouver les contributions spécifiques des gènes à trois phases distinctes de comportement addictif-like. Alors KO conditionnel qui est réalisé en utilisant le système Cre-loxP traditionnelle prévoit spatio-temporellement ablation génique limité, micro-injection stéréotaxique Cre-recombinase dans des zones discrète.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
	Med Associates, Inc., St. Albans, VT, États-Unis Med-CPP-MS
Système d’alignement stéréotaxique pour souris	David Kopf Instruments, Tujunga, CA, États-Unis	modèle 900
Seringues Hamilton	Hamilton Company, Reno, Nevada,	États-Unis 7634-01
rAAV2-Cre-GFP	Vector BioLabs, Philadelphie, PA, États-Unis	7016
rAAV2-GFP	Vector BioLabs, Philadelphie, Pennsylvanie, États-Unis	7004