Gavage adultos de pez cebra

Summary

El creciente uso de pez cebra como modelo animal requiere el desarrollo de métodos eficaces para la entrega de cantidades conocidas de compuestos y soluciones. El procedimiento de alimentación forzada se describe a continuación permite la administración oral de volúmenes precisos de la solución de forma fiable, segura y eficiente para adultos de pez cebra.

Abstract

El pez cebra se ha convertido en un importante modelo in vivo en la investigación biomédica. Métodos eficaces deben desarrollarse y utilizarse para suministrar compuestos o agentes en soluciones para la investigación científica. Los métodos actuales para la administración de compuestos por vía oral a adultos de pez cebra son inexactos debido a la variabilidad en el consumo voluntario por los peces. Un procedimiento de alimentación forzada fue desarrollado para suministrar cantidades precisas de agentes infecciosos al pez cebra para el estudio en la investigación biomédica. Pez cebra adulto de más de 6 meses de edad fueron anestesiados con 150 mg / l de buffer MS-222 y alimentadas por sonda con 5 l de solución mediante tubos flexibles implantación del catéter conectado a una corte 22G punta de la aguja. El tubo flexible se redujo en la cavidad oral del pez cebra hasta que la punta de la tubería de extenderse más allá de las branquias (aproximadamente 1 cm). A continuación, la solución se inyecta lentamente en el tracto intestinal. Este método fue eficaz 88% del tiempo, con la recuperación de los peces sin incidentes. Esteprocedimiento también es eficaz como una persona puede alimentación por sonda 20-30 peces en una hora. Este método se puede utilizar para administrar con precisión agentes para estudios de enfermedades infecciosas, o estudios de otros compuestos en adultos de pez cebra.

Introduction

Los métodos actuales para la administración por vía oral de compuestos pez cebra incluyen compuestos administración superior con recubrimiento en piensos, mezclados en las dietas de gelatina, ¹ bioencapsulado en salmuera camarones ^2, mezclados con lípidos en dietas encapsuladas ^3, cera perlas rociado ⁴ ya través de las dietas a base de gluten. ⁵ Limitaciones de estos métodos de administración oral incluyen altas tasas de lixiviación y el consumo incompleto o impredecible compuesto por cada ejemplar. Estas variables son problemáticos debido a que en estudios de enfermedades infecciosas, sabiendo que la dosis infecciosa administrados a los peces puede ser crítico para el éxito del estudio. Además, el trabajo previo ha demostrado que ciertos compuestos administrados en baños de agua causan lesión tóxica al pez cebra branquias antes de que los efectos intestinales que pueden ser objeto de estudio se producen. ⁶

Alimentación forzada es un método estándar utilizado en otras especies de animales de laboratorio para administrar cantidades precisas de un producto con akconcentración nown de estudio en la investigación biomédica y farmacéutica. Sólo recientemente los métodos para gavage pez cebra ha descrito en la literatura. Una técnica se describe un método de dos persona que utiliza una vaina de catéter 24-G unida a una pipeta de 2-20 para entregar 5 l de solución. ⁷ El método descrito tenía una tasa de mortalidad del 8,7% y 39% en la primera y segunda ensayo, respectivamente, la mayor parte de la mortalidad se atribuyó a las hembras grávidas. La segunda técnica de alimentación forzada describe jeringas por sonda de punta roma se utilizan para administrar 5 l de solución a medakas (latipes latipes). ⁸ La información sobre la mortalidad no fue proporcionada y el proceso exacto de la realización de la sonda no se describió. De acuerdo con el Consejo Canadiense de Cuidado de Animales y el pez cebra de laboratorio, hasta el 1% del peso corporal de los peces puede ser administrado a través de una sonda. ^9,10 Nuestro objetivo fue desarrollar un método reproducible, segura y eficaz de entregar los volúmenes precisos de comlibra por vía oral a adultos de pez cebra de ambos sexos y en todas las etapas de la reproducción. Este procedimiento sería aplicable para cualquier estudio en el que se requiere la administración oral precisa de un compuesto.

Protocol

1. Preparación de la solución anestésica Preparar una solución de 150 mg / L de MS-222 en agua sistema, ya sea a partir de una solución madre o de la forma en polvo. Verificar el pH con un medidor de pH. Tampón con bicarbonato de sodio, según sea necesario hasta que el pH es de entre 7-7,5. Prepare un tanque de agua del sistema libre de MS-222 para los peces para recuperar pulg El tiempo de recuperación es generalmente menos de 1 min. 2. P…

Representative Results

Ambos sexos de los peces, incluyendo hembras grávidas fueron alimentadas por sonda con éxito (Figura 1). Un procedimiento exitoso tarda menos de un minuto con el líquido no visto que sale de las branquias o la boca. El tubo entra fácilmente, sin violencia, sin sangre visto después de la retirada del catéter. El procedimiento es rápido, requiere aproximadamente 10 min a la alimentación forzada de 3 a 4 peces, con un promedio de 30-45 seg por pez. El pez cebra no debe …

Discussion

Significado

Esta técnica es una mejora y proporciona varias ventajas con respecto a las dos técnicas descritas anteriormente para gavage adultos de pez cebra. En primer lugar, el uso de una esponja para contener los peces permite a una persona para llevar a cabo el procedimiento, en lugar de una técnica descrita anteriormente requiere dos personas. ⁷ En segundo lugar, la tubería implantación del catéter es más flexible que los catéteres IV, que puede ayudar a minimizar el tra…

Materials

			Equipment
A sponge
1-cc luer lock syringe	Becton Dickinson & Co
22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut)	Braintree Scientific, Inc.
1 22-G needle (cut, if needed)	Becton Dickinson & Co
pH meter	Hanna probe
1 scalpel blade
			[header]
			Reagent/Material
MS-222 (Finquel)	Argent Laboratories