Dithranol en tant que matrice pour Matrix Assisted Laser Désorption / Ionisation imagerie sur une transformée de Fourier Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer

Résumé

Dithranol (DT; la 1,8-dihydroxy-9 ,10-dihydroanthracen-9-one) a été précédemment rapporté comme une matrice MALDI pour l'imagerie des tissus de petites molécules, des protocoles pour l'utilisation de DT pour l'imagerie MALDI des lipides endogènes sur l' surface des coupes de tissus par ions positifs MALDI-MS sur un ultra-résolution quadripolaire FTICR instrument sont fournies ici.

Résumé

Spectrométrie de masse imagerie (MSI) détermine la localisation et de la distribution spatiale des motifs de composés sur la surface d'une coupe de tissu, en utilisant principalement MALDI (laser assistée par matrice de désorption / ionisation) à base de techniques analytiques. Nouvelles matrices pour petite molécule MSI, ce qui peut améliorer l'analyse de bas poids moléculaire (MW) composés, sont nécessaires. Ces matrices doivent fournir des signaux accrus d'analyte tout en diminuant les signaux de fond MALDI. En outre, l'utilisation d'instruments très haute résolution, telles que la transformée de Fourier à résonance cyclotronique ionique (FTICR) des spectromètres de masse, a la capacité de résoudre des signaux d'analyte à partir des signaux de la matrice, ce qui peut partiellement surmonter de nombreux problèmes associés à l'arrière-plan provenant de la MALDI matrice. La réduction de l'intensité des métastables grappes de matrice par FTICR MS peut également aider à surmonter certains des interférences associées aux pics de la matrice sur d'autres instruments. Haute résolutioninstruments tels que les spectromètres de masse FTICR sont avantageux car ils peuvent produire des modèles de distribution de nombreux composés simultanément tout en offrant la confiance dans les identifications chimiques. Dithranol (DT; 1,8-dihydroxy-9 ,10-dihydroanthracen-9-one) a déjà été rapporté comme une matrice MALDI pour l'imagerie des tissus. Dans ce travail, un protocole pour l'utilisation de MALDI DT pour l'imagerie des lipides endogènes à partir des surfaces des sections de tissus de mammifères, par-ion positif MALDI-MS, sur un hybride quadripolaire à ultra-haute résolution FTICR instrument a été fournie.

Introduction

Spectrométrie de masse imagerie (MSI) est une technique d'analyse pour déterminer la localisation et de distribution la répartition spatiale des composés sur la surface d'une coupe de tissu ^1,2. Laser assistée par matrice de désorption / ionisation (MALDI) MSI pour l'analyse des peptides et des protéines a été utilisé pour plus d'une décennie et il ya eu de grandes améliorations dans les méthodes de préparation des échantillons, la sensibilité de détection, la résolution spatiale, la reproductibilité et le traitement des données ^{de 3,4.} En combinant les informations des sections histologiques colorées et expériences MSI, les méde....

Protocole

Une. sectionnement des tissus

1. Flash geler les spécimens d'émission, une fois récoltés, en utilisant de l'azote liquide, les expédier sur de la glace sèche (si l'expédition est requise), et de les stocker à -80 ° C jusqu'à ce que le sectionnement de tissu. (Si les échantillons commerciaux sont utilisés, veiller à ce que les échantillons sont préparés de cette manière.)
2. Couper les organes à une taille gérable pour s'adapter à la cible MALDI. Coupez les parties non désirées de l'organe. Pour cette étude décrit ici, les lentilles de veau bovins ont été décapsulés en utilisant une procédure décrite précédemment ³⁵ av....

Résultats

Des échantillons de tissus qui sont sectionnés et dégel monté sur les lames de verre recouvertes d'ITO doivent être intacts, sans déchirure visible. Pour de nombreux tissus, dégel des tissus montage direct sur une lame de verre recouverte d'ITO est acceptable. Pour certains tissus spécifiques comme objectif de bovin, vaste déchirure des tissus est souvent observé lorsque dégel montage direct est utilisé (figure 1a). Pré-revêtement de la lame de verre ITO avec de l'éthanol ou de l'a.......

Discussion

Les considérations les plus importants pour la réussite MALDI MSI sont: 1) la préparation des tissus, 2) le choix de la matrice; 3) l'application de la matrice, et 4) l'interprétation et l'analyse des données. Lorsque l'échantillon et la matrice sont préparées de manière appropriée, l'acquisition des données est automatisée MS. L'analyse des données de ce type d'expérience est assez de main-d'œuvre.

Préparation de tissu approprié est crucial pour expériences r.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Foie de rat	Pel-Freez Biologicals	56023-2
Lentille de veau bovin	Pel-Freez Biologicals	57114-2	L’échantillon doit être décapsulé29 avant utilisation
Dithranol (DT)	Sigma-Aldrich	10608	MALDI
Matrix&alpha ;-Cyano-4-hydroxy-cinnamic Acid (CHCA)	Sigma-Aldrich	70990	MALDI Matrix
Acide 2,5-dihydroxybenzoïque (DHB)	Sigma-Aldrich	85707	MALDI Matrice
Réserpine	Sigma-Aldrich	83580
Terfénadine	Sigma-Aldrich	T9652
Acide formique	Sigma-Aldrich	14265
Formiate d’ammonium	Sigma-Aldrich	14266
Hydroxyde d’ammonium	Sigma-Aldrich
Acide trifluoroacétique (TFA)	Sigma-Aldrich	302031
Eau	Sigma-Aldrich	39253
Méthanol	Sigma-Aldrich	34860
Acétonitrile	Sigma-Aldrich	34967
Acétate d’éthyle	Sigma-Aldrich	34972
Isopropanol	Sigma-Aldrich	34965
Chloroforme	Sigma-Aldrich	366927
Acétone	Sigma-Aldrich	34850
Éthanol	Alcools commerciaux 95		%
ES Mélange de réglage	Agilent Technologies	G2431A
Lames de verre à revêtement ITO	Hudson Surface Technology	PSI1207000	Assurez-vous que les échantillons sont placés du côté conducteur d’électricité
Wite-Out Shake-N-Squeeze Correction Pen	Bic	WOSQP11
Pulvérisateur aérographe	Iwata	Eclipse HP-CS
ImagePrep	Bruker	249500-LS
Adaptateur MALDI	Bruker	235380

320145