Foraging व्यवहार के लिए एक एकल मक्खी परख में<em> ड्रोसोफिला</em
Summary
इस वीडियो लेख में, हम ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर मक्खी वयस्क फल में घ्राण निर्भर खाद्य खोज व्यवहार पर भूख या तृप्ति के प्रभाव को मापने के लिए एक स्वचालित परख का वर्णन.
Abstract
कई जानवरों के लिए, भूख उपयुक्त खाद्य स्रोतों के लिए खोज की सुविधा है एक तरह से घ्राण प्रणाली में परिवर्तन को बढ़ावा देता है. इस वीडियो लेख में, हम ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर मक्खी वयस्क फल में घ्राण निर्भर खाद्य खोज व्यवहार पर भूख या तृप्ति के प्रभाव को मापने के लिए एक स्वचालित परख का वर्णन. फल मक्खियों के लिए अदृश्य है कि लाल बत्ती से प्रकाशित एक हलका सा बॉक्स में, कस्टम डाटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर से जुड़ा हुआ एक कैमरा एक साथ छह मक्खियों की स्थिति पर नजर रखता है. प्रत्येक मक्खी सेंटर में एक भोजन की गंध से युक्त व्यक्ति एरेनास में चलना तक ही सीमित है. परीक्षण एरेनास कार्यों गंध संचय को रोकने के लिए है कि एक झरझरा मंजिल पर आराम. गंध के स्रोत, विभिन्न शारीरिक राज्यों तहत घ्राण संवेदनशीलता को दर्शाता है कि एक मीट्रिक लगाने के लिए विलंबता, सॉफ्टवेयर विश्लेषण द्वारा निर्धारित किया जाता है. यहाँ, हम इस व्यवहार प्रतिमान चलाने का महत्वपूर्ण यांत्रिकी चर्चा और मक्खी Loadi के बारे में विशिष्ट मुद्दों को कवरएनजी, गंध संदूषण, परख तापमान, डेटा की गुणवत्ता, और सांख्यिकीय विश्लेषण.
Introduction
खाद्य खोज और भोजन की खपत 1: भूख की अमेरिका भूख बढ़ाने वाला व्यवहार के दो प्रकार को बढ़ावा देने. इस सरल व्यवहार परख 2,3 foraging साथ जुड़े chemotactic व्यवहार के अध्ययन के लिए उपयोगी है. विशेष रूप से, यह एक खाना गंध लक्ष्य लगाने के लिए उड़ान भरने की स्थिति, चलने की गति और विलंबता पटरियों. भोजन खोजने के विलंबता अपने आंतरिक भूख बढ़ाने वाला राज्य में परिवर्तन के बहाव मक्खी की गंध पहचान प्रणाली की संवेदनशीलता में बदलाव को मापने के लिए के रूप में मैट्रिक में कार्य करता है. इस परख की एक पुस्तिका संस्करण पहले से GABA बी रिसेप्टर संकेतन 3 मक्खियों वयस्क में गंध स्थानीयकरण व्यवहार के लिए महत्वपूर्ण है दिखाने के लिए इस्तेमाल किया गया था. परख की वर्तमान स्वचालित संस्करण neuropeptide एफ (sNPF) संकेतन ड्रोसोफिला में घ्राण मानचित्र को नया स्वरूप दे और प्रभावों व्यवहार 2 भूख बढ़ाने वाला कैसे कम के अध्ययन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई थी.
परीक्षण एक काले, तापमान और आर्द्रता नियंत्रित कमरे में किया जाता है. डिजिटलस्पष्ट ऐक्रेलिक परीक्षण प्लेटों के ऊपर सेट वीडियो कैमरों 660 एनएम एलईडी रोशनी से backlit मक्खियों ट्रैक. कैमरे से जानकारी अगले परीक्षण क्षेत्र के लिए तैनात एक कंप्यूटर से वास्तविक समय में कार्रवाई की है. हम परीक्षण अवधि के दौरान उड़ान पदों के निर्देशांक रिकॉर्ड और बचाने के लिए डाटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर का उपयोग करें.
इस प्रतिमान में, विषय सेंटर में एक खाद्य गंध होता है कि एक क्षेत्र में जारी है, गंध वस्तु मक्खी में खाद्य खोज व्यवहार को प्रेरित करता है कि क्षेत्र के भीतर एक खाद्य गंध ढाल बनाता है. ऐसा ही एक गंध खोज प्रोटोकॉल एकल ड्रोसोफिला लार्वा 7 में chemosensation के अध्ययन की ओर लागू किया गया है. इस तरह के चार क्षेत्र olfactometer 4,5 या टी भूलभुलैया के रूप में 6 अन्य व्यवहार assays गंध घृणा या आकर्षण व्यवहार का मूल्यांकन करते हैं, इस प्रतिमान सबसे अच्छा घ्राण संवेदनशीलता और chemotaxis व्यवहार का मूल्यांकन करने के लिए अनुकूल है.
कई महत्वपूर्ण लाभ यह Assa के साथवाई. डेटा संग्रह और विश्लेषण ज्यादातर स्वचालित रहे हैं क्योंकि सबसे पहले, यह, बड़े डेटा सेट के तेजी से अधिग्रहण परमिट. दूसरा, इस परख आइसोलेट्स और इस प्रकार उनके व्यवहार को प्रभावित कर सकते हैं कि सामाजिक घ्राण cues को नष्ट करने, एकल मक्खियों के व्यवहार के उपाय. तीसरा, प्रोटोकॉल और सरल प्रयोगात्मक डिजाइन की सादगी परख कुशल और दूसरों को सिखाने के लिए आसान बनाते हैं.
इसके अलावा, इस परख आगे ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर 8 के लिए उपलब्ध व्यापक आनुवंशिक टूलकिट के साथ संयोजन से खाद्य खोज व्यवहार अंतर्निहित तंत्रिका सर्किट की जांच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. मौन या उत्तेजित न्यूरॉन्स ऐसे GAL4-यूएएस प्रणाली के साथ ही यूएएस shibire TS1, यूएएस टिटनेस विष, और यूएएस TRPA1 (बी) के रूप में उपकरणों के साथ प्राप्त किया जा सकता है कि transgenes की लक्षित अभिव्यक्ति 9-12 transgenes.
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल में, हम खाद्य खोज व्यवहार परख के लिए एक कदम दर कदम प्रक्रिया का वर्णन. भोजन संबंधी odors के अलावा, यह भी अन्य गंध वस्तुओं का पता लगाने के लिए उड़ान भरने की क्षमता के अध्ययन के लिए अनुकूलित किया ज?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (R01DK092640) और राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (0920668) से JWW के लिए अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Apple Cider Vinegar | Spectrum | commercially available | |
| Agarose, Type VII | Sigma-Aldrich | A0701 | low gelling temperature agarose |
| Acrylic Testing Plate | custom | Plate contains 6 arenas. Each arena is 60 mm in diameter 6 mm in height. See testing plate diagrams for specific measurements. | |
| LabVIEW V.8.5 | National Instruments | 776670-09 | platform for programs: PositioningTool.vi, FlyTracking–Six Zones.vi NOTE: "elapsed time.vi", "time into file.vi", and "two object detect.vi" are included subroutines that must be available in order for the main data acquisition program "FlyTracking–Six zones.vi" to run. |
| LabVIEW Vision 8.5 | |||
| LabVIEW Vision Acquisition Software 8.5 | |||
| LabVIEW Vision Builder AI 3.5 | |||
| Igor Pro V.6 | Wavemetric, Inc. | platform for macro: Data Analysis for Fly Tracking–Six Zones | |
| Basler scA1390-17fm | National Instruments | 779980-01 | Digital Camera NOTE: driver for camera available at Baslerweb.com |
| 8 mm lens | National Instruments | 780024-01 | Lens for Basler Digital Camera |
| Ground Glass Diffuser Plate | Edmund Optics | custom | Diffuses light, 25 cm x 30 cm |
| US Std. No. 100 | Fischer Scientific | 04-881X | Sieve with nominal opening of 150 μm |
| Lighting Option 1 | |||
| LED backlight 660 nm (20 cm x 20 cm) | Spectra West | BL47192 | a simpler but more expensive lighting option. |
| Power Supply for LED Backlight | Spectra West | ||
| Lighting Option 2 | |||
| 660 nm LEDs | Superbrightleds | RL5R1330 | Wavelength 660 nm (approximately 7 x 7 LED array for a 14.7 inch x 9.75 inch panel) |
| Linear DC Power Supply | GW Instek | GPS-1830D | Power supply for LED Panel |
| Solderless Breadboard | Digikey | 922354-ND | Breadboard for LEDs |
References
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