A colonoscopia flexível em camundongos para avaliar a gravidade da colite e colorretal Tumores Usando um sistema validado endoscópica Scoring
Summary
Ao longo dos últimos anos, novas endoscópios geração surgiram como importantes auxiliares de pesquisa de diagnóstico para a avaliação de colite murina e tumores colorectais. Apresentamos aqui um protocolo detalhado para a avaliação endoscópica de inflamação e tumores colo-rectal em ratos, bem como um novo sistema de pontuação que utiliza identificadores decimais para documentar a gravidade endoscópico de colite e tumores colorectais.
Abstract
O uso da endoscopia moderna para fins de pesquisa facilitou enormemente a nossa compreensão de patologias gastrointestinais. Em particular, a endoscopia experimental tem sido muito útil para estudos que requerem avaliações repetidas em um único animal de laboratório, tais como os mecanismos de avaliação de doença inflamatória intestinal crônica ea progressão do câncer colorretal. No entanto, os métodos utilizados em todos os estudos são altamente variáveis. Pelo menos três sistemas de pontuação endoscópicos foram publicadas para a colite murina e publicado protocolos para a avaliação dos tumores colorretais não conseguem resolver a presença de inflamação do cólon concomitante. Este estudo desenvolve e valida um sistema de pontuação endoscópica reprodutível que integra a avaliação de inflamação e tumores simultaneamente. Este novo sistema de pontuação tem três componentes principais: 1) avaliação da extensão e da gravidade da inflamação colorectal (baseado em achados perianal, a transparência do wall, sangramento das mucosas e lesões focais), 2) a gravação quantitativa de lesões tumorais (mapa de grade e gráfico de barras), e 3) a classificação numérica de casos clínicos por sua relevância patológica e de investigação com base em unidades decimais com categorias atribuídas de lesões observadas e complicações endoscópicas (identificadores decimais). Foram preparadas O vídeo eo manuscrito aqui apresentada, seguindo protocolos IACUC-aprovados, para permitir que os investigadores para marcar os seus próprios camundongos experimentais usando uma metodologia endoscópica bem validada e altamente reprodutível, com a opção de sistema para diferenciar distal de colite endoscópica proximal (D-PECS ).
Introduction
Endoscopia de murino foi realizada como uma ferramenta de pesquisa útil para mais de uma década 1-3. Até o momento, a maioria dos estudos que empregam endoscopia murino têm utilizado endoscópios rígidos, embora alguns também têm usado a sigmoidoscopia flexível. Endoscopia Murino proporciona resultados imediatos e uma estimativa mais objetiva da extensão da normalidade intestinal, a gravidade da inflamação e progressão do tumor em comparação com medidas indiretas, tais como perda de peso, diarréia e histologia (que é abaixo do ideal quando as lesões são irregulares), enquanto oferecendo insights sobre a saúde geral do cólon. Mais notavelmente, a endoscopia permite uma avaliação repetida de modelos animais de laboratório ao longo do tempo, em oposição ao exame histológico tradicional que exige que o animal ser sacrificado e de dois pontos a ser colhido para análise 1. Apesar destas vantagens, a utilização de tecnologia endoscópica murino não foi generalizada e é limitada pela falta de protocolos padronizados de implementatiem e pontuação de achados patológicos. Devidamente implementado, endoscopia murino é uma grande promessa para facilitar ainda mais a nossa compreensão e caracterização de modelos animais de vários estados de doença gastrointestinais crônicas, incluindo doenças inflamatórias intestinais, colite, e tumores colorretais.
A utilidade da tecnologia endoscópica murino dobradiças em cima de sua reprodutibilidade e objetividade, o que requer a existência de procedimentos de análise padronizados e um sistema de pontuação consistente, não redundante e confiável para patologias intestinais. Pelo menos três sistemas de pontuação descritivo para a avaliação endoscópica de colite 4-6, bem como para os tumores do cólon em ratinhos 4,7,8 foram publicados. No entanto, estas abordagens relatados e sistemas de pontuação não são facilmente comparáveis entre os estudos. Em muitos casos, não existe uma definição clara dos critérios utilizados para a classificação das lesões, e quando os critérios são dados, eles variam muito. Além disso,não existem sistemas de pontuação relataram que integram a avaliação de ambos colite e tumores, duas das patologias do cólon mais comuns que podem ocorrer simultaneamente e têm efeitos interativos sobre o resultado, em uma única ferramenta de medição. Por fim, os sistemas de pontuação endoscópicos que existem para a colite têm frequentemente categorias inflamatórios com discriminação limitada (ie. Opções estreitas de pontuação em escalas de inteiros curtos, muitas vezes 1-4) para representar adequadamente os cenários progressão da doença e permitem o uso de análise estatística paramétrica.
Neste trabalho, descreve-se o uso de um endoscópio flexível para avaliar a gravidade da colite murina e tumores do cólon e descrever um protocolo padronizado para empregar esta tecnologia na avaliação anatômica da região perianal, reto e cólon distal. Nós ilustramos solução de problemas eficaz durante a endoscopia para minimizar traumas e artefatos de imagem, e descrevemos um sistema de pontuação reprodutívelcom base nos parâmetros clínicos publicados validados. O sistema de pontuação integra avaliação tanto a inflamação intestinal e tumores utilizando um elevado nível de discriminação com 12 possíveis graus de inflamação, o mapeamento do tumor e as opções de traço, e um novo sistema de unidade decimal (isto é, os identificadores decimais) para destacar resultados com valor de diagnóstico específico ( ou seja, o desenvolvimento de tumores, complicações durante a endoscopia, etc.) A utilização de identificadores decimais permite monitoramento rápido de conjuntos de dados relevantes para uma análise mais aprofundada a jusante. Finalmente, realizamos testes de confiabilidade e do sistema de pontuação validade em vários modelos murinos de colite e câncer associado-colite (dextran sulfato de sódio (DSS), colite induzida, infecção Clostridium difficile, e azoximetano / câncer do cólon induzida por DSS).
Protocol
Representative Results
Discussion
Há várias considerações sobre modificação e solução de problemas da técnica endoscópica em camundongos. Aspectos críticos do procedimento que precisa ser dominado durante o uso da endoscopia flexível incluem o ajuste do volume de ar necessário para evitar a distensão abdominal e comprometimento respiratório do rato, e os aspectos técnicos menores de controle de exibição com a coordenação dos controles de angulação e torque . Controle de torque é importante para minimizar o risco de perfuração in…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Um agradecimento especial a Sarah Kossak, Mitchell Guanzon, Sung Yeun Yang e Li Guo Jia, pela colaboração durante a avaliação endoscópica de seus animais experimentais.
Materials
| Isoflurane, USP | Webster Veterinary | ||
| Surgical lubricant | Savage laboratories | surgilube, 0281-0205-45 | |
| Phosphate Buffered Saline | Thermo Scientific | SH30256 | |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Methylene Blue 1% Aqueous Solution | Fisher Science Education | S96393 | |
| Flexible digital ureteroscope | Olympus America | URF-V | |
| Video system center | Olympus America | VISERA Pro OTV-S7 Pro | |
| Xenon light source | Olympus America | VISERA Pro CLV-S40 Pro | |
| Video recorder | MediCapture, Inc. | MediCap USB200 | |
| Flexible biopsy cup forceps | Olympus America | FBC-3115 | |
| Anesthesia machine | Euthanex Corporation | EZ-7000 Classic System |
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