Skraldemanden har potentiale til at translokere smitsomme overførbar spongiform encephalopati prioner i deres afføring til sygdomsfrie områder. Vi detalje metoder, der anvendes til at afgøre, om muse-tilpassede scrapie prioner forblive infektiøse efter passage selvom fordøjelseskanalen af amerikanske krager (Corvus brachyrhynchos), en fælles forbruger af døde dyr.
Smitsomme prion (PrP Res) materiale er sandsynligvis årsagen til dødelige, neurodegenerative overførbar spongiform encephalopati (TSE) sygdomme 1. Overførsel af TSE-sygdomme, såsom kronisk wasting disease (CWD), formodes at være fra dyr til dyr 2,3 samt fra miljømæssige kilder 4-6. Skraldemanden og kødædere har potentiale til at translokere PrP Res materiale gennem forbrug og udskillelse af CWD-forurenet ådsler. Nyligt arbejde har dokumenteret passage af PrP Res materiale gennem fordøjelsessystemet af amerikanske krager (Corvus brachyrhynchos), en fælles nordamerikansk ådselsæder 7.
Vi beskriver procedurer, der anvendes til at dokumentere passage af PrP Res materiale gennem amerikanske krager. Crows blev tvangsfodret med RML-stammen muse-tilpasset scrapie og deres afføring blev indsamlet 4 timer efter sondeernæring. Crow afføring blev derefter samlet og injiceret intraperitonealt iC57BL / 6 mus. Mus blev overvåget dagligt, indtil de udtrykte kliniske tegn på mus scrapie, og derefter blev aflivet. Asymptomatiske mus blev overvåget indtil 365 dage efter podning. Western blot-analyse blev udført for at bekræfte sygdomsstatus. Resultaterne viste, at prioner forblive infektiøse efter rejser gennem fordøjelsessystemet af krager og er til stede i fæces, der forårsager sygdom i test-mus.
Overførbare spongiforme encephalopatier (TSE) er dødelige smitsomme neurodegenerative sygdomme, der påvirker dyrelivet, husdyr og mennesker. Den smitstof TSE-sygdomme synes at være fejlfoldede eller patogene isoformer (PrP Res) af prionproteiner 1. Animal TSE sygdomme omfatter chronic wasting disease (CWD) i mule deer (Odocoileus hemionus), hvid-tailed hjorte (Odocoileus virginianus), elg (Cervus elaphus) og elg (Alces alces), scrapie hos får og geder, BSE ( BSE) i indenlandske kvæg, overførbar minkencephalopati i mink, feline spongiform encephalopati hos katte, eksotiske hovdyr spongiform encephalopati i eksotisk zoo ruminates af familien Bovidae og spongiform encephalopati i ikke-humane primater 8. Den enkelt menneske TSE sygdom, variant Creutzfeldt-Jakobs sygdom, er sjælden og menes at være erhvervet ved at indtage PrP Res-contaminated mad 9. Ligeledes kan BSE smitte mennesker, hvis forurenet oksekød forbruges 10. Af alle de TSE-sygdomme, scrapie og CWD er de eneste to med selvopretholdende epidemier og kilder til infektion antages at være fra dyr til dyr 2,3,11 såvel som fra miljømæssige kilder 4-6. Forskning tyder på, at de fleste TSE-sygdomme kræver bemærkelsesværdige længere inkubationstid fra naturlige hændelser eksponering af PrP Res materiale manifestation af kliniske tegn 2-4,6,8 og tilsyneladende artsbarrierer minimere, men ikke udelukke muligheden for, interspecies transmission 12-14 .
Identifikation mekanismer for spredning af smitsomme prion (PrP Res) materiale er ekstremt vigtigt for at besvare spørgsmål om, hvordan TSE sygdomme bevæge sig hen over landskabet. Eksperimentelle undersøgelser har antydet, at insekter 15,16, fjerkræ og svin 17, og amerikanske krager (Corvus Brachyrhynchos) 7,18 er passive bærere eller dispergatorer af PrP Res materiale. Passage af PrP Res materiale gennem fordøjelsessystemet krager er for nylig blevet dokumenteret, viser den rolle, de kan spille i spredning af TSE-sygdomme 7. Disse resultater gør det plausibelt, at krager, en ådselsæder, kan støde på, forbruge og transportere infektiøst materiale via afføring deposition til sygdomsfrie områder.
De procedurer, vi demonstrerer her blev brugt til at dokumentere passage af PrP Res materiale gennem fordøjelsessystemet af krager og vil i høj grad lette anvendelsen af disse metoder til andre ådselsæder og kødædende arter-specifikke modeller i relaterede fremtidig forskning. I denne undersøgelse konventionelle metoder blev anvendt til at undersøge en utraditionel måde for menneskehandel PrP Res materiale, som vil kunne bidrage til udbredelsen og den samlede byrde af PrP Res materiale.
Vi demonstrerer en procedure til at dokumentere passage af PrP Res materiale gennem fordøjelsessystemet af krager. Vi brugte konventionelle metoder til at afgøre, om krager har evnen til at translokere PrP Res materiale sygdomsfrie geografiske områder. Andre har vurderet modstand PrP Res til drøvtyggere 19-21 og gnavere 22,23 fordøjelsesvæsker, som begge har undladt at fjerne det. Fremtidig anvendelse af disse teknikker bør anvendes på andre rovdyr 24,<…
The authors have nothing to disclose.
Vi vil gerne takke S. Werner for at levere de krager, der anvendes i denne undersøgelse, og USDA, APHIS, WS, NWRC dyrepleje personale til pasning af dyr og overvågning. Nævn eller brug af et produkt er ikke ensbetydende med USDA godkendelse. Finansieringen af denne undersøgelse blev leveret af USDA, APHIS, Veterinary Services.
RML Chandler strain mouse-adapted scrapie | Rocky Mountain Laboratories | ||
RC57BL/6 mice | Hilltop Lab Animals | ||
American crows | wild captured | ||
Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | |
Phosphate buffered Saline | Invitrogen | 70011-044 | |
Sonicator | Misonix | ||
Proteinase-K solution | Roche | 3115887001 | |
Loading buffer | Invitrogen | NP0007 and 0009 | |
Bis-tris SDS PAGE 12% gel | Invitrogen | NP0342 | |
Immobilon PVDF membrane | Millipore | 1SEQ00010 | |
Tween 20 | Sigma Aldrich | P2287 | |
Bullet blender homogenizer | Braintree Scientific | BBX24B | |
2.3 mm Zirconia/silica beads | BioSpec Products | 11079125Z | |
Bar224 anti-PrP monoclonal antibody | Cayman Chemical | 10009035 | |
Superblock | Thermo Scientific | 37517 | |
chemiluminescent substrate | Millipore | WBKLS0500 | |
G-box gel documentation system | Syngene |