दबाव Myography का प्रयोग प्रतिरोध mesenteric धमनियों में myogenic रिस्पांस और Vasoactivity का आकलन
Summary
दबाव myography दबाव जब निरंतर कसना है कि विकसित छोटी धमनियों की vasoactivity का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है। इस पांडुलिपि चूहे, vasoactivity और नाड़ी व्यास पर intraluminal दबाव के प्रभाव से छोटे mesenteric धमनियों के अलग खंडों में आकलन करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करता है।
Abstract
छोटे प्रतिरोध धमनियों कसना और वृद्धि या intraluminal दबाव में कमी आई के जवाब में क्रमशः चौड़ा करना; myogenic प्रतिक्रिया के रूप में जाना जाता है इस घटना स्थानीय रक्त प्रवाह की एक प्रमुख नियामक है। समदाब रेखीय परिस्थितियों में छोटे प्रतिरोध धमनियों प्रणालीगत संवहनी प्रतिरोध (आर) के एक प्रमुख निर्धारक है जो myogenic टोन (एमटी), के रूप में जाना कसना निरंतर विकास। इसलिए, छोटे प्रतिरोध धमनियों की पूर्व vivo दबाव तैयारियों के पास शारीरिक राज्यों में microvascular समारोह का अध्ययन करने के लिए प्रमुख साधन है। इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए, एक छोटे से प्रतिरोध धमनी (व्यास ~ 260 माइक्रोन) के एक हौसले से अलग बरकरार खंड दो छोटे गिलास cannulas और दबाव पर मुहिम शुरू की है। इन धमनियों की तैयारियों विवो विशेषताओं और वास्तविक समय में संवहनी स्वर का परमिट मूल्यांकन में सबसे बरकरार रहती है। यहाँ हम चूहों से दबाव छोटे प्रतिरोध mesenteric धमनियों में vasoactivity का आकलन करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं; इन धमनियों का विकासनिरंतर वाहिकासंकीर्णन – अधिक से अधिक व्यास का लगभग 25% – 70 एमएमएचजी पर दबाव है। इन धमनियों की तैयारी के विभिन्न रोगों के पशु मॉडल में microvascular समारोह में परिवर्तन इंट्रा-धमनी दबाव और vasoactivity के बीच संबंधों पर अनुसंधानात्मक यौगिकों के प्रभाव का अध्ययन करने और निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
Introduction
छोटे प्रतिरोध धमनियों आर के प्रमुख निर्धारक हैं और कई बीमारियों 1,2 के pathophysiology में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। इस तरह के मधुमेह 3, गर्भावस्था 4, ischemia-reperfusion 5, मोटापा और उच्च रक्तचाप 6,7 के रूप में स्थितियां अक्सर बदल माइक्रोवैस्कुलर समारोह के साथ जुड़े रहे हैं। संवहनी myography विभिन्न रोगों में microvascular समारोह में परिवर्तन में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं, लेकिन यह भी चिकित्सकीय लक्ष्यों की पहचान में मदद मिलेगी और vasoactive यौगिकों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन कर सकते हैं न केवल। नाड़ी समारोह सममितीय या समदाब रेखीय पोत शर्तों 8 के तहत पृथक छोटी धमनियों का उपयोग कर अध्ययन किया गया है। Isometric myography का विस्तृत विवरण कहीं और 9 प्रदान की जाती है। हालांकि समदाब रेखीय तैयारियों 10-12 बनाम सममितीय से प्राप्त आंकड़ों में मतभेद हैं। दबाव धमनी की तैयारी के पास शारीरिक स्थितियों में microvascular समारोह के अध्ययन की अनुमति देने के बाद से,प्राप्त निष्कर्षों संवहनी बिस्तर 8,13 के vivo व्यवहार के साथ बेहतर सहसंबंधी सकता है।
1902 में Bayliss पहले संवहनी व्यास 14 पर transmural दबाव के प्रभाव का वर्णन किया। उन्होंने कहा कि दबाव में कमी वाहिकाप्रसरण द्वारा पीछा किया गया था कि खरगोश, बिल्लियों और कुत्तों के विभिन्न संवहनी बेड से छोटे प्रतिरोध धमनियों में मनाया, और दबाव में वृद्धि वाहिकासंकीर्णन द्वारा पीछा किया गया था। इस घटना myogenic प्रतिक्रिया के रूप में जाना जाता है। Bayliss और बाद में जांचकर्ताओं समदाब रेखीय परिस्थितियों में छोटे प्रतिरोध धमनियों मीट्रिक टन 15,16 के रूप में जाना निरंतर कसना है कि विकास मनाया। Myogenic प्रतिक्रिया और मीट्रिक टन दोनों दबाव myography (प्रधानमंत्री) तकनीक का उपयोग करके मूल्यांकन किया जा सकता है। प्रधानमंत्री छोटी धमनियों, नसों और अन्य जहाजों की vasoactivity निर्धारित करने के लिए मुख्य रूप से प्रयोग किया जाता है। नाम इंगित करता है – – संवहनी व्यास पर vasoactive यौगिकों के प्रभाव का आकलन करने के लिए इसके अलावा, प्रधानमंत्री intravascular दबाव की मध्यस्थता चर्चा का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता हैसंवहनी व्यास पर anges। पिछले कुछ दशकों में वीडियो माइक्रोस्कोपी और कांच पिपेट, प्रधानमंत्री प्रदर्शन करने के लिए आसान बना दिया है खींच बढ़ाया जो कंप्यूटर सॉफ्टवेयर, में अग्रिम। हालांकि, छोटे रक्त वाहिकाओं के व्यवहार्य बरकरार क्षेत्रों के विच्छेदन कठिन और कभी कभी चुनौती बनी हुई है। यहाँ हम चूहों से अलग छोटे mesenteric प्रतिरोध धमनियों में myogenic प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल की रूपरेखा तैयार।
Protocol
Representative Results
Discussion
महत्वपूर्ण कदम, समस्या निवारण और संशोधनों
एक ठेठ समदाब रेखीय पोत तैयार करने में, धमनी गर्म (37 डिग्री सेल्सियस) पीएसएस के साथ perfused दो गिलास cannulas के बीच 70 एमएमएचजी पर दबाव है। 30-45 मिनट के बाद, धमनियों 20…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
संदीप खुराना एनआईएच (K08DKO81479) द्वारा समर्थित है। विक्रांत Rachakonda (T32DK067872) द्वारा समर्थित है।
Materials
| Chemical | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Acetylcholine | Sigma Aldrich | A6625 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Calcium chloride (CaCl2) | Sigma Aldrich | 223506 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| D-(+)-Glucose | Sigma Aldrich | G5767 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N’,N’-tetra acetic acid (EGTA) | Sigma Aldrich | E3889 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) | Sigma Aldrich | E9884 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| HEPES | Sigma Aldrich | H3784 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Magnesium sulfate (MgSO4) | Sigma Aldrich | M7506 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| MOPS | Sigma Aldrich | M5162 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Phenylephrine | Sigma Aldrich | P6126 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Potassium chloride (KCl) | Sigma Aldrich | P3911 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma Aldrich | P5655 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Sodium bicarbonate (NaHCO3 ) | Sigma Aldrich | S6014 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Sodium chloride (NaCl) | Sigma Aldrich | S7653 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Sodium hydroxide (NaOH) | Sigma Aldrich | S5881 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Sodium nitroprusside | Sigma Aldrich | 13451 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4) | Sigma Aldrich | S9638 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Sodium pyruvate | Sigma Aldrich | P8574 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Table 1. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| Table 2. Composition of Experimetnal solutions | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Equipment | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CCD Monochrome Camera | The imaging Source | DMK 21AU04 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Single inline solution heater | Warner Instruments | 64-0102 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Thermistor | Warner Instruments | 64-0108 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Dual automatic temperature controller | Warner Instruments | TC-344B | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Flaming/Brown micropipette puller | Sutter Instruments | P-97 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Fluorescence System Interface | IonOptix | model FSI-700 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Forceps and scissors | World Precision Instruments | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ion Wizard-Core and Analysis | IonOptix | Ion Wizard 6.0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Laboratory tubing | Silastic | 508-005 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Male Sprague Dawley rat | Harlan Laboratories | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Master flex console drive | Cole-parmer | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Milli-Q Plus Ultrapure Water System | Millipore | ZD5211584 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ophthalmic monofilament nylon suture | Ethicon | 9007G | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Photometry and Dimensioning Microscope | Motic | AE31 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer | Living Systems Instrumentation | PS-200 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Stereomicroscope | Nikon Instruments Inc | SMZ660 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Vessel Chamber | Living Systems Instrumentation | CH-1 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Dissection dish | Living Systems Instrumentation | DD-90-S | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Thin Wall Glass Capillaries | World Precision Instruments | TW120-6 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Microforge | Stoelting | 51550 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Table 3. |
References
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