Flere lette skader protokoller har blitt beskrevet å skade fotoreseptorer og dermed indusere en retinal regenerering respons i voksen sebrafisk. Denne protokollen beskriver en forbedret fremgangsmåte som kan brukes i pigmenterte dyr, og som skader det store flertallet av stang-og kjegle fotoreseptorer tvers av hele netthinnen.
Lysindusert retinal degenerasjon (LIRD) er ofte brukt i både gnagere og sebrafisk til skade stang og kjegle fotoreseptorer. I voksen sebrafisk, utløser fotoreseptor degenerasjon Müller gliaceller å re-gå inn i cellen syklus og produsere transient-forsterke stamfedre. Disse stamfedre fortsette å spre seg som de vandrer til det skadede området, hvor de til slutt gi opphav til nye fotoreseptorer. For tiden er det to svært utbredte LIRD paradigmer, som hver resulterer i varierende grad av fotoreseptoren tap og tilsvarende forskjeller i regenerering respons. Som mer genetiske og farmakologiske verktøy er tilgjengelige for å teste rollen av individuelle gener av interesse under regenereringen, er det behov for å utvikle et robust LIRD paradigme. Her beskriver vi en LIRD protokoll som resulterer i omfattende og konsekvent tap av både stang og kjegle fotoreseptorer der vi har kombinert bruk av to tidligere etablerte LIRD teknikker. Videre, Kan denne protokollen bli utvidet til bruk i pigmenterte dyr, noe som eliminerer behovet for å opprettholde transgene linjer av interesse på albino bakgrunnen for LIRD studier.
Lysindusert retinal degenerasjon (LIRD) er ofte brukt i både gnagere og sebrafisk til skade stang og kjegle fotoreseptorer. I voksen sebrafisk, utløser fotoreseptor degenerasjon Müller gliaceller å re-gå inn i cellen syklus og produsere transient-forsterke stamfedre. Disse stamfedre fortsette å spre seg som de vandrer til det skadede området, hvor de til slutt gi opphav til nye fotoreseptorer. For tiden er det to svært utbredte LIRD paradigmer, som hver resulterer i varierende grad av fotoreseptoren tap og tilsvarende forskjeller i regenerering respons. Som mer genetiske og farmakologiske verktøy er tilgjengelige for å teste rollen av individuelle gener av interesse under regenereringen, er det behov for å utvikle et robust LIRD paradigme. Her beskriver vi en LIRD protokoll som resulterer i omfattende og konsekvent tap av både stang og kjegle fotoreseptorer der vi har kombinert bruk av to tidligere etablerte LIRD teknikker. Videre, Kan denne protokollen bli utvidet til bruk i pigmenterte dyr, noe som eliminerer behovet for å opprettholde transgene linjer av interesse på albino bakgrunnen for LIRD studier.
Her viser vi at å kombinere en kort UV-eksponering med en kontinuerlig sterkt lys eksponering fører til utbredt fotoreseptoren tap og en robust regenerering respons. Sammenlignet med de enkelte LIRD metoder, er denne kombinerte metode også den mest effektive protokollen til å føre til skade både staver og tapper i begge halvdeler av netthinnen. Viktigere, er denne behandlingen effektiv i pigmenterte dyr samt albino dyr.
Selv om vi dokumentere at de samlede protokollen gir mer …
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne ønsker å takke Xixia Luo for utmerket fisk dyrehold og teknisk støtte. Dette arbeidet ble finansiert av National Institutes of Health tilskudd R21EY019401 (RT) og P30EY04068 (RT), og oppstart midler til RT, inkludert et ubegrenset tilskudd fra forskning for å hindre blindhet til Wayne State University, Department of Ophthalmology. JT ble støttet av en Thomas C. Rumble Fellowship levert av Wayne State University Graduate School.
UV light source | Leica | EL600 |
Glass Petri dish (150 x 20 mm) | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS3160152BO |
250 ml glass beaker | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS1000250 |
4 L glass beaker | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS10004L |
Aluminum foil | Fisher | 01-213-105 |
250 W halogen lamps | Workforce | 265-669 |
1.8 L clear acrylic tanks | Aquaneering | ZT180T |
1.8 L clear acrylic tank lids | Aquaneering | ZT180LCL |
Fan | Honeywell | HT-900 |
Aerator | Tetra | 77853-900 |
Thermometer | Cole-Parmer | YO-08008-58 |
Bent forceps (5/45) | World Precision Instruments | 504155 |