Plasticité neuronale est une caractéristique de plus en plus reconnue, mais mal compris de la gastro-intestinal (GI). Ici, dans l'exemple de troubles pancréatiques humaines, nous présentons un dosage in vitro de la plasticité synaptique pour l'étude de la plasticité neuronale dans le tractus gastro-intestinal à la fois au niveau morphologique et fonctionnelle.
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Article de méthode
Simulation pancréatique neuroplasticité:
Dans cet article
Résumé
Résumé
Neuroplasticité est une caractéristique inhérente du système et gastro-intestinal (GI) innervation nerveux entérique dans des conditions pathologiques. Cependant, le rôle physiopathologique de la neuroplasticité dans les troubles gastro-intestinaux reste inconnue. Modèles expérimentaux nouveaux qui permettent la simulation et la modulation de GI neuroplasticité peuvent permettre une meilleure appréciation de la contribution de la neuroplasticité en particulier les maladies gastro-intestinales telles que le cancer du pancréas (CaP) et pancréatite chronique (PC). Ici, nous présentons un protocole pour la simulation de la neuroplasticité du pancréas dans des conditions in vitro utilisant des nouveau-nés dorsale de rat ganglions de la racine (DRG) et plexus myentérique (MP) neurones. Cette double approche permet non seulement neurone suivi de deux neuroplasticité organe intrinsèque et extrinsèque, mais représente également un outil précieux pour évaluer la morphologie des neurones et des cellules gliales et l'électrophysiologie. De plus, il permet la modulation fonctionnelle des matières microenvironnement fournis pour l'étude de leur impact sur la neuroplasticité. Une fois établi, le dosage de la neuroplasticité porte présente le potentiel d'être applicable à l'étude de la plasticité synaptique dans un organe digestif.
Introduction
Altérations de la gastro-intestinale (GI) morphologie de nerf et de la densité ont attiré l'attention des gastro-entérologues et les médecins depuis longtemps, mais leur pertinence pour la physiopathologie de maladies gastro-intestinales reste inconnue 1-3. En effet, plusieurs troubles digestifs très courantes telles que la gastrite, oesophagite par reflux, la colite, la diverticulite, l'appendicite et sont associés à une augmentation de densité d'innervation dans les zones de tissu enflammés 1. Cependant, aucune véritable attention a jusqu'ici été accordée aux mécanismes et la signification de la neuroplasticité dans le tractus ....
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Protocole
Tous les animaux des procédures expérimentales dans le protocole suivent les directives de protection des animaux de la Technische Universität München, Allemagne.
1. Médias / Préparation Extrait
- homogénéisation tissulaire
La qualité de l'homogénéisation du tissu est essentielle à la détection ultérieure d'altérations neuroplastiques dans les neurones en culture. Ici, il est recommandé un homogénéisateur qui permet la dissociation des tissus sans augmentation importante de la température du tissu.- Transférer 5 mm x 5 mm x 5 mm cubes de tissu pancréatique directement à partir de -80 ° C à l'azote liqui....
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Résultats
Neuroplasticité morphologique
Dans l'intervalle indiqué par âge de rats nouveau-nés (P2-12) et les densités de semis, les neurones MP et DRG construisent déjà des réseaux neuronaux denses après 48 heures (figure 2A). Comparaison de la densité des neurites entre les neurones cultivés en PCa, CP, et des extraits NP révèle une plus grande densité des neurites des neurones DRG en PCa ou extraits de CP dans des extraits de NP (Figure 2A) 5.
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Discussion
Le présent protocole est destiné à illustrer la méthodologie derrière le dosage de la neuroplasticité du pancréas in vitro qui a été récemment développée par notre groupe pour étudier les mécanismes de la plasticité synaptique dans CaP et CP 5. Le protocole implique une procédure de trois jours qui peut facilement être appliqué une fois l'artiste a acquis une expérience suffisante dans l'isolement et la culture de neurones DRG et MP. En outre, il représente un outil précieux pour l'étude .......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont aucun intérêt concurrentes et aucune divulgation financière.
Remerciements
Tous les auteurs ont contribué à la création et la validation de l'essai présenté et le projet du manuscrit.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Bromhydrate de poly-D-lysine | Sigma-Aldrich | P1149 | |
| Ornithine/laminine | Sigma-Aldrich | P2533/L4544 | |
| 13 mm Lamelles | Merck | Pour une utilisation dans des plaques à 24 puits | |
| Dismembranator S | Sartorius | ||
| Anticorps anti-bêta-III-tubuline | Millipore | MAB1637 | 1:200 |
| Anticorps anti-GFAP | DAKO | M0761 | Concentration 1:400 |
| Tampon RIPA + inhibiteur | Tout fournisseur | ||
| Milieu neurobasal | Gibco/Life Sciences | 21103-049 | |
| B-27 Supplément | Gibco/Life Sciences | 17504044 | La qualité de B-27 est connue pour dépendre du numéro de lot |
| Gentamicin/Metronidazol | N’importe quel fournisseur | ||
| Minimal essential medium | Gibco/Life Sciences | 31095-029 | |
| Hank' s Solution saline équilibrée (HBSS) | Gibco/Life Sciences | 24020133 Améliore l’activité | la collagénase lorsqu’elle contient de la |
| collagénase Ca/Mg de type II | Biochimique Worthington | CLS-2 | Obtenir des lots avec une activité d’au moins 200 U/ |
| mg Trypsine-EDTA 0,25 % | Gibco/Life Sciences | 25200056 | |
| 4 % Paraformaldéhyde | Tout fournisseur | ||
| analySIS docu logiciel | Olympus |
Références
- Demir, I. E., Schafer, K. H., Tieftrunk, E., Friess, H., Ceyhan, G. O. Neural plasticity in the gastrointestinal tract: chronic inflammation, neurotrophic signals, and hypersensitivity. Acta Neuropathol. 125, 491-509 (2013).
- Vasina, V., et al.
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Réimpressions et autorisations
