The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol, developed for the honey bee (Apis mellifera), provides an ecologically-relevant and easily quantifiable means for studying several different mechanisms of learning in many insect species.
חרקים לשנות את תגובותיהם לגירויים דרך חוויה של שיוך גירויים אלו עם אירועים חשובים להישרדות (למשל, מזון, בני זוג, איומים). קיימים מספר מנגנונים התנהגותיים שדרכו חרק לומד האסוציאציות עיקריות ומתייחס לאירועים אלה. זה חשוב להבין פלסטיות התנהגות זו לתוכניות שנועדו לסיוע לחרקים שאינם מועילים לחקלאות. גם הבנה זו יכולה לשמש לגילוי פתרונות לבעיות ביו והחקלאיים שנוצרו על ידי חרקים המשמשים כוקטורי מחלות ומזיקים. פרוטוקול אוויר החוטם הרחבה תגובה (PER) פותח עבור דבורי דבש (Apis mellifera) לפני יותר מ -50 שנים ללמוד איך הם תופסים וללמוד על ריחות פרחוניים, אשר לאותת משאבי הצוף ואבקת צרכי מושבה להישרדות. הליך PER מספק מסגרת יציבה וקלה למעסיקים ללימוד כמה Mecha רלוונטי מבחינה אקולוגית שונהnisms של פלסטיות התנהגותית. זה להתאמה בקלות לשימוש עם כמה מינים של חרקים אחרים ורפלקסים התנהגות אחרים. פרוטוקולים אלה יכולים להיות מועסקים בקלות בשיתוף עם אמצעים שונים לניטור פעילות עצבית במערכת העצבים המרכזית באמצעות אלקטרופיזיולוגיה או bioimaging, או לטיפול במסלולי neuromodulatory ממוקד. זה assay חזק למהירות גילוי תופעות משנה קטלני על התנהגות נגרמת על ידי גורמי לחץ, רעלים או חומרי הדברה סביבתיים.
אנו מראים כיצד פרוטוקול PER הוא פשוט ליישום באמצעות שני הליכים. אחת מהן הוא מתאים כמעבדה תרגיל לסטודנטים או למבחנים מהירים של ההשפעה של טיפול ניסיוני. האחרים מספק שליטה מעמיקה יותר של משתנים, וזה חשוב ללימודים של אוויר התנהגותיות. אנו מראים כיצד במספר צעדים לתגובה התנהגותית הנעים בין כן בינארי / לא למשתנה רציפה יותר כמו חביון ומשך הארכת חוטם יכול לשמש כדי לבדוק hypotheseים. ו, אנו דנים בחלק ממלכודות שחוקרים בדרך כלל נתקלים כאשר הם משתמשים בהליך בפעם הראשונה.
חרקים רבים ללמוד על גירויים רלוונטיים מבחינה אקולוגית, והם לאחר מכן לשנות תגובות התנהגותיות שלהם לגירויים אלה על מנת להתאים ליחסים חזוי חדשים בסביבה שלהם. מספר מנגנונים שונים יכולים בבסיס פלסטיות התנהגות זו (למשל, nonassociative, אסוציאטיבי / הפבלובית, ואופרנטית / אינסטרומנטלית 1). של פלסטיות סוגים אלה נבדלים באופן שבו הגירויים או ההתנהגויות קשורות לאירועים חשובים, כגון ההתרחשות של אוכל, בן זוג, או סכנה. הבנת צורות של פלסטיות אלה חשוב מאוד למחקר בסיסי לאופן שבו מערכת העצבים משנה לקידוד זכרונות חדשים 2. כמו כן, חשוב להבנת התנהגויות ההסתגלות של חרקים שהם וקטורים חשובים של מחלה (לדוגמא, tsetse ויתושים) וחרקים שחשובים חקלאי, בין אם בייצור יבול (דבורי דבש) או כמזיקים.
לומד פלסטיות התנהגותית בכל עניםאל דורש רמת שליטה ניסיונית על מספר המשתנים שאינו בר השגה בתחום 1. זה דורש הפיתוח של פרוטוקול אוויר חזק שיכול להיות מועסק בתנאים מבוקרים יותר, עדיין שהם עדיין רלוונטיים להתנהגות בתנאים טבעיים. דבורת הדבש (Apis mellifera) היא מודל מצוין לכיצד לפתח פרוטוקול לביצוע ניתוחים מבוקרים של 3,4 פלסטיות התנהגותית. החוטם הרחבה התגובה (PER) בדבורים דבש היא רפלקס התנהגות טבעי שבו דבורת הדבש מרחיבה חוטם שלה בתגובה לגירוי מחושים עם תמיסת סוכר. במהלך התנהגות שיחור מזון רגילה, PER מתרחש כאשר דבורת הדבש מוצאת צוף בפרח. למרבה המזל, דבורי דבש יהיו בקלות להפגין התנהגות פשוטה ובקלות לכימות זה במעבדה. זה מאפשר ללמוד, בסביבה מבוקרת, המנגנונים המשפיעים על התנהגות רלוונטית מבחינה אקולוגית זה 5. ca PERn לשמש גם בתוך פרוטוקול אוויר כדי לחקור תפיסת גירוי ולמידה וזיכרון בתנאי טיפול שונים, שנועדו לחשוף את המנגנונים התנהגותיים ועצביים העומדים בבסיס הפלסטיות 6.
מאז המחקרים הראשונים על ידי 7 Kuwabara, PER אוויר כבר בשימוש נרחב כדי לחשוף nonassociative, אסוציאטיבי ומנגנונים אופרנטית העומדים בבסיס פלסטיות התנהגות בדבורים דבש 8. מנגנונים אלה הם זהים לאלו שהתגלו במחקרים של דבורי דבש עפו בחופשיות 9. בניגוד למחקרים של דבורי דבש עפו בחופשיות, יכולים להיות בשילוב פרוטוקולי אוויר PER עם אלקטרופיזיולוגיה 10,11 או דימות פלואורסצנטי לחיות תאי 12-14 במוח. יתר על כן, פרוטוקולי PER מאפשרים מניפולציה ניסויית של מסלולים עצביים באמצעות טיפולים גנטיים תרופתיים או מולקולריים כדי לבחון השערות על התפקידים של רכיבים ספציפיים של הרשת, כגון neuromodulators 15,16. גם פרוטוקולי PER סיפקו דרך חשובה כדי להעריך את השפעות sublethal של תנאים סביבתיים כמו גם רעלים על בריאות ויעילות ליקוט של דבורי דבש 17.
הליך זה מתאר שתי שיטות משלוח ריח במקביל. שיטת 1 היא גרסה של הריח ומשלוח הגירוי הבלתי מותנה (סוכרוז) שמספק שיטה זולה ופשוטה מבחינה טכנית להצגת הריח וגמול סוכרוז. שיטה זו טובה לטירונות וכאשר האוטומציה אינה אפשרית. זוהי דרך מצוינת להציג את הטכניקה הזו למעבדה כיתה או הוראה. במהלך האוויר לניסויים הכוללים משימות קשות יותר והערכות פיסיולוגיות בשילוב של תפיסת ריח, למידה, או זיכרון, שזה מאוד חשוב ומדויק כדי להסדיר את תחילת, עיתוי מסירת משך הגירויים. למסירת הגירוי אמינה ביותר, להשתמש באמצעי מיכון מסירת הריחnd שיטה מדויקת של מסירת הפרס. שיטה 2 מעסיקה אוטומטי משלוח ריח ומשלוח סוכרוז מדויק יותר. זה מבחינה טכנית מתוחכם יותר ודורש יותר להגדרה הראשונית מ שיטת 1, אבל זה מגדיל באופן משמעותי את העקביות של העיתוי והכמות של גירויים המשמשים לאוויר ויש להשתמש בכל הזדמנות אפשרית.
פרוטוקול זה הוצג שתי שיטות אמינות לאוויר באמצעות הליך PER. אלה הם שניים ממספר שיטות שכבר מועסקות 27, 21 בהצלחה. אנו מעסיקים שיטה 2 לכל מחקרים הניסיוניים באמצעות PER כפי שהוא אמין באופן עקבי, אפילו על פני הנסיינים שונים.
אותו ההליך בסיסי הותאם לסוגים רבים ושונים של לימודים עם דבורי דבש, ובכלל זה שימוש בגירויי אוויר שונים ורפלקסים התנהגותיים שונים. זה גם קשור לחקירות של הבסיס הגנטי של הבדלים בלמידת 28,29, הקושרת הפיזיולוגית של תפיסת חוש הריח וזיכרון במוח 13,14,30, והבסיסים הגנטיים modulatory והמולקולרי של התנהגות 15,16,31 . בגלל הידע המתקדם של רלוונטיות האקולוגיות של למידת חוש הריח לדבורי דבש, שהחל עם המחקרים הראשונים על ידי קרל פון פריש לפני למעלה 100 שנים <sup> ביום 31 ב, תוצאות מPER ניתן לקשר בקלות לצרכי הישרדות של מושבה. לאחרונה, זה כבר מותאם למחקר חקלאי כדי לחקור את השפעות התנהגות sublethal של חומרי הדברה ורעלים סביבתיים 17.
ההליך הבסיסי הוא חזק בכך שהוא יכול להיות מיושם על לחקור בעיות במינים אחרים, כמו גם. שני מיני עש, סקסטה Manduca וlittoralis Spodoptera, היו בשימוש במחקרי PER לחקור את הבסיס העצבי של זיהוי ריח ויכולות למידת חוש הריח של כל מיני 32,33. ניסויי PER עם זבובי פירות סיפקו תובנות רבות למפלי איתות המולקולריים המעורבים בchemosensation ולמידת 34. וPER לאחרונה נעשה שימוש כדי ללמוד הרגלה בפשפשים (prolixus Rhodnius) 35, וקטור מחלה חשוב.
באופן כללי, ההליך הוא חזק לשינויים בשיטה; השימוש בדשיטות ifferent צפויות לייצר את אותו הבדל יחסי בין קבוצות טיפול. למרות ההליך פשוט יחסית, כמה בעיות יכולות לעתים למנוע דבורי דבש מלימוד עמותת ריח סוכרוז. הנושאים הבאים הם שינויים אפשריים בפרוטוקול וחלק מהבעיות הנפוצות יותר שעלולה להתעורר במהלך PER אוויר.
שיקולים במספר וסוג של ניסויים בפרוטוקול אוויר
כל פרוטוקול למידה ידרוש חשיפה של הדבורים למספר הניסויים בשלב הרכישה. מספר זה תלוי במידה רבה על הקושי של המשימה. דבורי דבש יכולים ללמוד משימה פשוטה לאחר משפט בודד, אבל הם צריכים לפחות שלושה ניסויים כדי לגרום להיווצרות זיכרון לטווח ארוך. כצפוי, דבורי הדבש ידרשו יותר באופן משמעותי ניסויים כדי ללמוד כראוי משימה קשה. באופן כללי, יש מספר מרבי של ניסויים שמעבר לו הדבורים כבר לא לשפר באופן משמעותי אתביצועי ir. מקסימום, זה תלוי במשימה הספציפית, סוגי הריח והריכוזים, וריכוז סוכרוז.
בעת שימוש בסוג אחד או יותר של משפט עם ריחות שונים, יציג את הסוגים השונים משפט ברצף פסוודו לשמור דבורים מלשנן רצף פשוט של מצגות ריח במקום ללמוד את ההבדלים בין הריחות 36. ברצפי פסוודו אלה, חייבים להיות מספר שווה של ניסויים עבור כל אחד מסוגי הריח. כמו כן, ההסתברות למשפטו של סוג ריח אחד שקדמה ואחריו אותו הריח, או כל אחד מהריחות האחרים, חייב להיות שווה לכל הריחות. לשני ריחות – וB – להשתמש ברצף הבא: ABBABAAB. למעלה משמונה ניסויים כל ריח מוצג ארבע פעמים. לשרשר רצפים זהים להגיע למספר הרצוי של ניסויים עבור כל ריח.
ללא קשר לעיצוב ניסיוני, יש כמה פרמטרים שחייבים להישארקבוע על מנת לייעל את הלמידה. החפיפה בין CS וארה"ב היא קריטית לאוויר יעיל. המרווח בין המשפט (איור 1, טבלת 1) צריך להיות קבוע ולהיות מותאם בגלל אי תקינותו או מרווח בין משפט קצר מדי או ארוך מדי באופן משמעותי יכולה להשפיע על היעילות של פרוטוקול האוויר 1.
שיקולים בחשיבותה ועיצוב של ניסויים בדיקות התנהגותיות
תגובות שנרשמו במהלך 'שלב הרכישה' של ניסוי, כאשר CS וארה"ב מוצגים יחד, יכולות להיות שימושיות. עם זאת, צריך להיזהר שתנאי מצגת ריח יכולים להיות שונים מסוג אחד של משפט למשנהו. במהלך ניסויים חיזקו, הריח ואחריו סוכרוז מוצג בשיתוף עם גירוי חזותי (תנועה של המכשיר להעברת אגל סוכרוז) שיכול להשפיע על התגובה של הדבורה. ויש לי הדבורים רק שלוש שניים כדי להראות תגובה (ארבע שניות של גירוי ריח מינוס החפיפה השנייה אחת עם מצגת סוכרוז; איור 1). אם הניסוי כרוך בדבורים לומדים להבחין בין שני ריחות (לדוגמא, חיזק וunreinforced), ריח unreinforced הציג בניסויים חלופיים מתרחש ללא הגירוי החזותי של מצגת השכר ויש לי הדבורים ארבע שניות מלאים להגיב. לכן, התגובות לשני ריחות לא ניתן להשוות באופן מלא במהלך רכישה. עם כל פרוטוקול אוויר, לא להסתמך אך ורק על עקומות רכישת 1. עדיף לברר מה דבורים למדו, להציג סדרה של ניסויי מבחן unreinforced, שבמהלכו לא ריח מתחזק, אשר מבטיחה כי בדיקה של כל הגירויים מתרחשת בתנאים זהים.
בהתאם לצורך הספציפי של הניסוי, בדיקה יכולה להיות מורכבת מניסויי בדיקה אחת של הריח המותנה או סדרה של ניסויים עם od המותנהאו או שילוב של הריחות הממוזגים ורומן. משפט בדיקה אחת של הריח המותנה מספק assay פשוט של האם הדבורים "זוכרים את ריח מזגן. עם זאת, התגובה לניסוי המבחן הראשון עשויה לשקף רמת המוטיבציה של הדבורים, כמו גם הזיכרון שלהם של הריח המותנה. סדרה של ניסויי מבחן, או סדרה של ניסויי הכחדה של הריח המותנה או סדרה של בדיקות יחידים של מותנה וריחות אחד או יותר רומן, יכולה לשמש גם כדי להעריך זיכרון. הסדרה של ניסויי הכחדה יכולה להעריך באיזו עצמה הדבורים "זוכרים את העמותה המותנה. זוכר חזק המספר הגדול יותר של ניסויים הדרושים כדי לכבות את התגובה המותנה. סדרה של בדיקות יחידים של ריחות מותנים ורומן יכולה גם להעריך את הספציפיות הזיכרון של הדבורים של הריח המותנה.
זה גם הכרחי להתנות ולבדוק את שניהם שליטה וקבוצות שטופלו באותה נקודות זמן. Comparing הביצועים של דבורים קצרים לאחר אוויר לדבורים שנערכו לתקופות זמן ארוכות יותר הוא בעייתי בגלל החשיפה לארה"ב סוכרוז על ידי האכלת הדבורים לשובע. לדוגמא, ירידה בביצועים לאחר מרווחי זמן ארוכים יכולה להיות בגלל ריקבון זיכרון או שזה יכול להיות כתוצאה משינויים במצב מוטיבציה ו / או למידה הנגרמים על ידי חשיפת unreinforced לארה"ב, מה שהופך את התוצאות מעורפלות. לכן, ביצועים של קבוצת טיפול תמיד צריכים להישפט ביחס לקבוצת ביקורת ממוזגת ונבדקה באותו נקודות הזמן.
ריכוז ריח ויושרה
ישנן מספר דרכים שבהן ניתנים לפריצה בריכוז וביושרה של הריח (CS). הבעיה הנפוצה ביותר עם משלוח ריח היא הדלדול של מחסניות ריח משימוש יתר (איור 2). החלפת המחסניות 10-12 שימושים (כל 2 או 3 ניסויים עם קבוצות של 5 דבורי דבש), כדי למנוע מכשול זה. כמו כן, חשוב להשתמשמחסניות טריות לניסויי מבחן, מאז מחסניות משומשות עשויות להיות מדולדלים באופן דיפרנציאלי וגירויים ריח לא שוויוניים וכך הווה. בעיה נוספת נפוצה היא זיהום מחסנית ריח בשל שימוש במחסנית לריח יותר מפעם אחת בלי לנקות אותו לחלוטין. זרימת אוויר מלוכלכת או מזוהם יכולה גם שלא בכוונה להציג את גירוי חוש הריח נוסף (מסנני פחם פעילים יכולים למנוע זיהום ברקע). זה בעייתי במיוחד כאשר צימוד PER אוויר עם מדידות של התגובות הפיזיולוגיות לריח. מחסניות ריח דולפות להוות בעיה שכן דבורי הדבש חשופים ללהריח לפני תחילת המשפט, אשר מפחית את הבולטות של גירוי הריח. רפוי על אספקת האוויר למסירת ריח יכול לגרום למסירת ריח מעט או ללא כאשר השסתום נפתח, באופן מלאכותי צמצום התגובה של הדבורים לריח נועד.
פתרון סוכרוז וStimulus הבלתי מותנה (זכתה)
הר, ריכוז, ויושרה של תמיסת סוכרוז משמש כארה"ב הם חיוניים להצלחה של הניסוי. אוויר הוא פונקציה של הכמות והריכוז של תמיסת סוכרוז מים משמש כארה"ב 37. המזרקים מיקרומטר בשימוש בשיטה 2 מאפשרים שליטה מדויקת מאוד (עד 0.2 μl) של משלוח בארה"ב, ואנו ממליצים להשתמש בהם לשתי השיטות שתוארו. שימוש בקיסמי השיניים (שיטת 1) הוא מספק לנסיבות שבהן לא ניתן להשתמש במזרקים היקרים, כגון, באימון קבוצות גדולות של תלמידים, עבודה בתחום, או עם תקציבים נמוכים יותר. יישום קפדני של שיטת 1 הוא בסדר כל עוד תזמון נשמרים עם החלפה סדירה של קיסמים כדי למנוע הצטברות של סוכרוז (והריכוז נמסר). עם זאת, שימוש בקיסמי שיניים קשה יותר לשלוט באופן מדויק ולהעריך את הכמות וסדר הגודל של ארה"ב נמסר, וזה חשוב ללימודי אוויר 1. הריכוז של סוכרוז צריךלספק תגמול מספיק כדי לשמור על דבורי מוטיבציה ללמוד העמותה המותנה יכול לסמוך על הקושי של המשימה והמצב הפנימי של הדבורים או הזמן של שנה. המשימות קשות יותר דורשות פתרון סוכרוז גבוה יותר עבור דבורים ללמוד את המשימה בהצלחה. הצטברות עובש יכול בפתרונות סוכרוז אפילו בשעה 5 ° C, אשר תפגע ביושרה של הפתרון, המשפיעה על הבריאות והתפיסה של הגמול של הדבורים במהלך הניסוי. עדיף להחליף את הפתרון בכל כמה ימים.
Precision, תזמון, ועקביות של משלוח CS וארה"ב
הנושא הקריטי ביותר על יישום נכון של הליך PER, או לצורך העניין כל הליך אוויר, כרוך דיוק, עיתוי ועקביות של CS ומשלוח בארה"ב (איור 1). חוקרים שאינם חדשים להליך לעתים קרובות אינם מדויקים על משלוח של גירויים אחד או שניהם. ISI שלשייכשל, כדי לאפשר חפיפה CS וארה"ב לגרום לביצועי אוויר גרועים. PLC ממכן אות קולית לניסוי כדי לספק סוכרוז שניות 3 לאחר תחילת אספקת ריח. חוקרים צריכים להחזיק סוכרוז / המים הטיפה קרובה לדבורה למסירה מהירה לאחר האות. נהלים אלה מסייעים לעלות לרכבת ISI עקבית. הצבת שעון עצר על ידי זירת האוויר מאפשרת מיקום זמן נוח של המשפט, כמו גם ניטור בזמן של הדבורים בזירה לפני ואחרי המסירה של גירויים. בדרך זו ITI של יכולה להיות עקבית יחסית וההליך כולו ניתן להריץ בקצב מבוקר. ITI של כי הם קצרים מדי, למשל דקות פחות מ 1, או יותר מדי זמן יכול להוביל לביצועי אוויר גרועים 1.
השפעות עונתיות, סביבתיות, וקשר בדבש דבורת ביצועים
הביצועים של דבורים דבש יכולים להיות מושפעים באופן משמעותי על ידי סביבתושניהם לפני ובמהלך האוויר. לעתים קרובות, התנודות בזמינות טמפרטורה ומזון שמגיעות עם העונות המתחלפות תשנה את המוטיבציה של הדבורים ללמוד. כאשר הפרחים פורחים, המוטיבציה של הדבורים ללמוד העמותה המותנה במעבדה מקטינה 38. כאשר המושבה הדגישה – מטמפרטורות קיצוניות, מחסור במזון, או מתח הקשורים למחלות – הדבורים "יציגו ירידה בביצועי הלמידה שלהם בפנים. דבורי דבש נשמרו בטיסת חדר עשוי ללמוד גם לזמן מה, אבל גם שם הלחץ של מחלה והזדקנות לפגוע בביצועי הלמידה שלהם לאורך זמן. ההקשר במהלך האוויר יכול גם לפגוע בביצועים של הדבורים. כל ריחות זרים, תנועה, וגירויים אחרים יכולים להסיח את דעת הדבורה מהגירויים הניסיוניים. כדי להימנע מבעיה זו, לשמור על עקבי סבירה הקשר חזותי פשוט,.
גנוטיפ והניסיון משפיע על פי ביצועים
<p class = "jove_content"> עובדי דבורת דבש יכולים להיות שונים במידה ניכרת בביצועים בכל הליך אוויר בשל התמחות משימה, גנוטיפ, או גורמים סביבתיים אחרים 20. לכן, חשוב לבצע סטנדרטיזציה, עד כמה שניתן, את הסוגים של בעלי חיים המשמשים בניסוי על מנת לצמצם וריאציה בין פרט. במושבה בראשות מלכה-הזדווגו פתוח, מה שאומר שהיא הזדווגו עם מזל"טים רבים ושונים, העובדים יהיו שונים בגנוטיפ האבהי. רקע גנטי יכול להוביל להבדלים דרמטיים בהיענות חושית 39 ולמידת ביצועים 29. שימוש במושבות בראשות המלכות מופרות אינסטרומנטאלית על ידי זרע ממזל"טים בודדים 28 מפחיתה וריאציה בין אדם זה.הפרוטוקולים שתוארו לעיל, כוללים שיטה לאיסוף עובדי דבורת דבש מהכניסה הקן. עם זאת, דבורי דבש אלה שונים זה מזה בכל קשור לגיל או משימה התנהגותית. הם עשויים להיות צעירים (inexperienCED) או מלקטי מזון מבוגרים (יותר מנוסים). הם עשויים להיות דבורי דבש צעירים מה שהופך את טיסות הנטייה הראשונות שלהם. או שהם עשויים להיות דבורי משמר. כדי להקטין את השונות, סמנו את הדבורים עם צבע אמייל מהיר ייבוש או תגי סימון או כפי שהם עולים כמבוגרים (כדי לשלוט על גיל) ו / או כפי שהם מתחילים ליקוט (כדי לשלוט על ניסיון). ואז, כמה ימים מאוחר יותר, לאסוף את הדבורים הניכר לאוויר. עובדים שעוסקים בסיעוד התנהגות ניתן לאסוף מהמסגרות בתוך הכוורת. אחיות יכולות להיות מזוהות באופן חיובי כאשר הם מכניסים את ראשם לתוך תא קינון כדי להאכיל ולדאוג לזחל פנימה.
שימוש הבתולה קווינס או מזל"טים לPER אוויר
בנוסף לדבורי דבש עובד, מלכות דבורי דבש בתולה ומזל"טים יכולים להיות מותנים בקלות בהליך PER ללימודים במטרה לפתח קווים גנטיים של דבורי דבש שונים בלמידת ביצועים 28. מלכות הבתולה יש לאסוף מייד לאחר הey לצאת מהתגלמות וממוקם ישירות לתוך רתמות הרחקה ללא הרדמה. מזל"טים צעירים, לא בשלה שנאספו מהמסרק להרהר בתוך המושבה הם בדרך כלל לא מוטיבציה ללמוד. אחרי שהם החלו הזדווגות טיסות, מזל"טים בקלות ללמוד משימות PER 28. הם צריכים להיות שנאספו כפי שהם חוזרים מטיסת הזדווגות ומתוחזק לילה בכלוב קטן במושבה המשמשת לגידול מלכות. אל תנסה לרתום אותם ביום שלפני האוויר; הם אינם שורדים היטב בלילה רתמות. כמה שעות לפני האוויר יכולים להיות שנאספו מכלובי מזל"טים והניחו לתוך רתמות ההרחקה ללא הרדמה.
מסקנות
הליך PER זה, בדרך של שיטות, מסתכם לסך של נקודה מוצא לתכנון ניסויי PER. רוב פרוטוקולי PER ידרשו כי ההליך המתואר להיות שונה באופן כלשהו כדי ליישם את היעדים הספציפיים של הניסוי וaccommodatקבוצות טיפול מרובה דואר. זה קל ליישום. עם זאת, יישום נכון דורש תשומת לב לפרטים ותרגול. ברגע שמשתלט עליו זה יכול להיות הליך רב עוצמה כדי להוסיף ככלי מחקר לכמה תוכניות מחקר בסיסיות והיישומים עם מיני חרקים שונים.
The authors have nothing to disclose.
מחקר זה נתמך על ידי מימון מNIH NCRR (R01 RR014166 לBHS), NIH NIDCD (R01 DC011422 BHS שיתוף PI), משרד החקלאות האמריקאי (J טרמבל PI; BH סמית שיתוף PI) והאוניברסיטה של מדינת אריזונה. מימון לסדנה להכשרת תלמידים (נתונים באיור 4) הניתן על ידי הקרן הלאומית למדע של צ'ילה.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S9378-1KG | |
Odorant compounds (for example): | For additional examples of odorants, see any of the papers on olfactory processing from the Smith lab | ||
1-hexanol | Sigma-Aldrich | 471402-100ML | |
2-octanone | Sigma-Aldrich | W280208-800G-K | |
heptanol | Sigma-Aldrich | 51778-5ML | |
gerianol | Sigma-Aldrich | 163333-25G | |
nonanal | Sigma-Aldrich | 131210-100ML | |
Hexane | Sigma-Aldrich | 296090-1L | |
Heavy Mineral Oil | Sigma-Aldrich | 330760-1L | Make sure it’s odorless |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 459836-1L | |
Scintillation vials | Sigma-Aldrich | Z190535-1PAK | Use a small drill bit to bore a small hole in the cap of the vials |
Bee harness | Custom-made from 0.9 cm diameter plastic soda straws or hard plastic/metal tubing | ||
Duct tape | |||
Kimwipes | Sigma-Aldrich | Z188956-1PAK | |
Wash bottles | Sigma-Aldrich | Z560847-3EA | For the 70% ethanol |
Small fan in mountable housing | |||
Dryer tubing | |||
FOR METHOD 1 ONLY | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
20 ml disposable plastic syringes | Cole-Parmer | WU-07945-18 | |
15 mm filter paper circles | Sigma-Aldrich | Z274844-1PAK | |
Pushpins | |||
Toothpicks | |||
FOR METHOD 2 ONLY | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Gilmont Micrometer syringe, 0.2 mL | Cole-Parmer | EW-07840-00 | |
Gilmont micrometer syringe tip | Cole-Parmer | EW-07841-00 | |
26G 3/8” Leur hub hypodermic needles | Fisher Scientific | 14-826-10 | |
1cc tuberculin syringes (plastic/glass) | Sigma-Aldrich | Z181641-1EA OR Z192090-200EA | glass tuberculin syringes are available, but plastic syringes are much less expensive and will work well for a limited number of uses |
Small rubber/silicone restrictors | Cole-Parmer | EW-95702-02 | Made from 4.8 mm outer diameter silicone tubing or the rubber tips of the 1 cc syringe plungers |
Parafilm | Sigma-Aldrich | P7793-1EA | |
75 X 100 mm filter paper | Sigma-Aldrich | Z695106-500EA | |
Direct Logic 05 Programmable Logic Controller | Koyo Electronics Industries Co, Ltd | http://www.koyoele.co.jp/ OR english/support/dlc.html#plc | |
1 mm, 4mm & 6 mm inner diameter PVC or silicone tubing | Cole-Parmer | Various | Cole-Parmer has a wide selection of suitable tubing |
Polypropylene connectors & leur fittings | Cole-Parmer | Various | Cole-Parmer has a wide selection of connectors and fittings for many tube sizes |
65-mm Correlated Flowmeter | Cole-Parmer | EW-03216-08 | Aluminum with Glass float; For Liquids and Gases, With Valve |
OR | |||
Tetra Whisper 300 (Tetratek DW96-2) Aquarium Air Pump | Aquacave | AE-TETRA-300 | www.aquacave.com |
LIF series Solenoid Valves for .042 " ID Tubing, Configuration "E" | The Lee Company | LFAA1200118H | Neoprene, 430 SS, 302 SS, 280mWatts http://www.theleeco.com/LEEWEB2.NSF |
PC-Board 12VDC 70dB Piezo Buzzer | RadioShack | 273-074 | www.radioshack.com |