The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol, developed for the honey bee (Apis mellifera), provides an ecologically-relevant and easily quantifiable means for studying several different mechanisms of learning in many insect species.
Insekter ændre deres svar på stimuli gennem erfaring for at knytte disse stimuli med begivenheder er vigtige for overlevelse (f.eks, mad, hjælpere, trusler). Der er flere adfærdsmæssige mekanismer, hvorigennem et insekt lærer fremtrædende foreninger og relaterer dem til disse begivenheder. Det er vigtigt at forstå denne adfærdsmæssige plasticitet til programmer, der sigter mod at hjælpe insekter, der er til gavn for landbruget. Denne forståelse kan også bruges til at opdage løsninger på biomedicinske og landbrugsmæssige problemer skabt af insekter, der fungerer som sygdomsvektorer og skadedyr. Snabel Extension Response (PER) konditionering protokol blev udviklet til honningbier (Apis mellifera) mere end 50 år siden for at studere, hvordan de opfatter og lære om blomstermotiver lugte, der signalerer nektar og pollen ressourcer En koloni behov for at overleve. PER procedure giver en robust og let at ansætte rammer for at studere flere forskellige økologisk relevant mechamer af adfærdsmæssige plasticitet. Det er let at tilpasse til brug sammen med flere andre insektarter og andre adfærdsmæssige reflekser. Disse protokoller kan let anvendes i forbindelse med forskellige midler til overvågning af neurale aktivitet i CNS via elektrofysiologiske eller bioimaging eller til at manipulere målrettede neuromodulatory veje. Det er en robust analyse til hurtigt at indikere subletale effekter på adfærd forårsaget af miljømæssige stressfaktorer, toksiner eller pesticider.
Vi viser, hvordan PER protokol er let at gennemføre ved hjælp af to procedurer. Den ene er velegnet som et laboratorium øvelse for studerende eller for hurtige analyser af effekten af en eksperimentel behandling. Den anden giver en mere grundig kontrol af variable, hvilket er vigtigt for studier af adfærdsmæssige condition. Vi viser, hvordan flere foranstaltninger for adfærdsmæssig reaktion spænder fra binære ja / nej til mere kontinuerlig variabel ligesom ventetid og varigheden af snabel forlængerrør kan anvendes til at teste Hypothesesek. Og vi diskutere nogle faldgruber, som forskere ofte støder på, når de bruger proceduren for første gang.
Mange insekter lærer om økologisk relevante stimuli, og de derefter ændre deres adfærdsmæssige reaktioner på disse stimuli med henblik på at tilpasse sig nye forudsigende relationer i deres miljø. Flere forskellige mekanismer kan ligge til grund for denne adfærdsmæssige plasticitet (f.eks nonassociative, associativ / Pavlov, og operant / instrumental 1). Disse typer af plasticitet forskellige i, hvordan de stimuli, eller adfærd er forbundet med vigtige begivenheder, såsom forekomsten af mad, en kammerat, eller fare. Forståelsen af disse former for plasticitet er meget vigtigt for grundlæggende forskning i, hvordan nervesystemet ændrer at indkode nye erindringer 2. Det er også vigtigt for at forstå de adaptive adfærd af insekter, der er vigtige vektorer for sygdomme (f.eks tsetse og myg) og insekter, der er landbrugsmæssigt vigtigt, enten i den vegetabilske produktion (honningbier) eller som skadedyr.
Studere adfærdsmæssige plasticitet i nogen animal kræver et niveau af eksperimentel kontrol over en række variabler, der ikke kan opnås inden 1. Det kræver udvikling af en robust konditionering protokol, som kan anvendes under mere kontrollerede forhold, men som stadig er relevante for opførsel under naturlige forhold. Honningbien (Apis mellifera) er en fremragende model for, hvordan man kan udvikle en protokol til at udføre kontrollerede analyser af adfærdsmæssige plasticitet 3,4. Snabel Extension Response (PER) i honningbier er en naturlig adfærdsmæssig refleks, hvor honningbien udvider sine snabel reaktion på antennal stimulering med en sukkeropløsning. Under normal fourageringsadfærd, PER opstår, når honningbien finder nektar i en blomst. Heldigvis vil honningbier let udviser denne enkle og let kvantificerbare adfærd i laboratoriet. Dette gør det muligt at studere, i en kontrolleret indstilling, de mekanismer, der påvirker dette økologisk relevant adfærd 5. PER CAn også anvendes inden for en konditionering protokol til at undersøge stimulus perception og indlæring og hukommelse under forskellige behandlingsbetingelser, som er designet til at afsløre de adfærdsmæssige og neurale mekanismer, der ligger til grund for plasticitet 6.
Siden de første undersøgelser foretaget Kuwabara 7 har Per condition været meget anvendt til at afsløre nonassociative, associativ og operant mekanismer, der ligger til grund for adfærdsmæssige plasticitet i honningbier 8. Disse mekanismer er identiske med dem afsløret i studier af frit flyvende honningbier 9. I modsætning til studier af frit flyvende honningbier kan PER conditioning protokoller kobles med elektrofysiologi 10,11 eller live-cell fluorescensimagografi 12-14 af hjernen. Desuden PER protokoller mulighed for eksperimentel manipulation af nervebanerne via farmakologiske eller molekylærgenetiske behandlinger for at afprøve hypoteser om roller specifikke dele af nettet, såsom NEURomodulators 15,16. PER protokoller har også givet en vigtig måde at evaluere de subletale virkninger af miljømæssige forhold samt toksiner om sundhed og fouragering effektiviteten af honningbier 17.
Denne procedure beskriver to lugt levering metoder parallelt. Metode 1 er en version af lugt og ubetinget stimulus (saccharose) levering, der giver en billig og teknisk enkel metode til at præsentere lugt og saccharose belønning. Denne metode er god til grundlæggende uddannelse og hvornår automatisering er ikke mulig. Det er en glimrende måde at introducere denne teknik til et klasseværelse eller undervisning laboratorium. Under condition til forsøg med mere vanskelige opgaver, og koblede fysiologiske vurderinger af lugt perception, læring, eller hukommelse, er det meget vigtigt præcist og præcist regulere debut, varighed levering timingen af stimuli. For den mest pålidelige stimulus levering, skal du bruge et middel til at automatisere lugt levering ennd en præcis metode til belønning levering. Metode 2 beskæftiger automatiseret lugt levering og mere præcis saccharose levering. Det er teknisk mere avanceret og kræver mere for den indledende opsætning end metode 1, men det øger sammenhængen i timingen og mængden af stimuli, der bruges til konditionering og bør så vidt muligt anvendes.
Denne protokol præsenterede to pålidelige metoder til konditionering ved hjælp af PR procedure. Det er to af flere metoder, der med succes er blevet anvendt 27 21. Vi beskæftiger Metode 2 for alle eksperimentelle undersøgelser med anvendelse af PER som det er konsekvent pålidelige, også på tværs af forskellige eksperimentatorer.
Den samme grundlæggende procedure er blevet tilpasset til mange forskellige slags undersøgelser med honningbier, herunder anvendelse af forskellige conditioning stimuli og forskellige adfærdsmæssige reflekser. Det har også været forbundet med undersøgelser af det genetiske grundlag for forskelle i læring 28,29, de fysiologiske korrelater til olfaktoriske perception og hukommelse i hjernen 13,14,30, og modulerende og molekylærgenetiske grundlag for adfærd 15,16,31 . På grund af den avancerede viden af den økologiske relevans af olfaktoriske læring til honningbier, der startede med de første undersøgelser af Karl von Frisch over 100 år siden <sup> 31, kan resultaterne fra PER let knyttet til overlevelse behov for en koloni. Senest er det blevet tilpasset til en landbrugs undersøgelse for at afdække subletale adfærdsmæssige effekter af pesticider og miljømæssige toksiner 17.
Den grundlæggende procedure er stærk, at den kan anvendes til at undersøge problemer i andre arter. To møl arter, Manduca sexta og Spodoptera littoralis, er blevet anvendt i Per studier for at undersøge neurale grundlag for identifikation lugt og hver arters olfaktoriske indlæringskapacitet 32,33. PER forsøg med bananfluer har givet mange indsigt i de molekylære signalleringskaskader involveret i chemosensation og læring 34. Og Per er for nylig blevet anvendt til at undersøge tilvænning i loppen (Rhodnius prolixus) 35, en vigtig sygdom vektor.
I almindelighed fremgangsmåden er robust over for ændringer i metode; anvendelse af different metoder vil sandsynligvis producere den samme relative forskel mellem behandlingsgrupper. På trods af den forholdsvis enkel procedure, kan flere problemer til tider forhindre honningbier fra at lære lugt-saccharose forening. Følgende emner er mulige ændringer af protokollen og nogle af de mere almindelige problemer, der kan opstå under PER condition.
Overvejelser om antallet og typen af forsøg i Conditioning protokollen
Enhver læring protokol vil kræve eksponering af bier til en række forsøg i købet fase. Dette antal afhænger i høj grad vanskelig opgave. Honningbier kan lære en enkel opgave efter en enkelt retssag, men de har brug for mindst en tre forsøg til at fremkalde langtidshukommelse dannelse. Som forventet, vil honningbier kræver betydeligt flere forsøg i tilstrækkelig grad lære en vanskelig opgave. Generelt er der et maksimalt antal forsøg ud som bierne ikke længere i betydelig grad forbedrerir ydeevne. Denne maksimale afhænger af den specifikke opgave, de lugt typer og koncentrationer og saccharosekoncentrationen.
Når du bruger mere end én type af forsøg med forskellige lugte, præsentere de forskellige forsøg typer i en pseudotilfældig sekvens for at holde bier fra at huske en simpel sekvens af lugt præsentationer i stedet for at lære forskellene mellem lugte 36. I disse pseudotilfældige sekvenser, skal der være et lige antal forsøg for hver af de lugt typer. Også, idet sandsynligheden for et forsøg med en lugt typen forud og efterfulgt af samme lugt, eller nogen af de andre lugte, skal være ens for alle lugte. For to lugte – A og B – bruge følgende rækkefølge: ABBABAAB. Over otte forsøg hver lugt præsenteres fire gange. Sammenkæde identiske sekvenser for at nå det ønskede antal forsøg for hver lugt.
Uanset den eksperimentelle design, der er et par parametre, der skal forblivekonstant for at optimere læring. Overlappet mellem CS og USA er afgørende for en effektiv condition. Den inter-retssagen interval (figur 1, tabel 1) skal være konstant og optimeres fordi uregelmæssighed eller en for kort eller for lang inter-retssagen interval signifikant kan påvirke effektiviteten af konditionering protokol 1.
Overvejelser om betydningen og Design af Behavioral Testing Trials
Svarene er optaget under "erhvervelse fase« af et eksperiment, da CS og USA præsenteres samlet, kan være nyttige. Men pas på, at lugten præsentation forhold kan variere fra den ene type forsøg til en anden. Under forstærkede undersøgelser er lugt fulgt af saccharose fremlægges i forbindelse med en visuel stimulus (bevægelse af anordningen til at levere den saccharose dråbe), der kan påvirke biens svar. Og bierne har kun tre sekunders for at vise en respons (til fire sekunder af lugt stimulering minus én sek overlapning med saccharose præsentation, figur 1). Hvis forsøget medfører bierne lære at skelne to lugte (f.eks, forstærket og uarmeret), den uarmeret lugt præsenteres på alternative forsøg forekommer uden den visuelle stimulus af belønning præsentation og bierne har de fulde fire sekunder for at reagere. Derfor er svarene på de to lugte er ikke fuldt sammenlignelige i forbindelse med købet. Med konditionering protokol, ikke udelukkende stole på erhvervelse kurver 1. For bedre at fastslå, hvad bier har lært, indføre en række uarmerede testforsøg, hvor ingen lugt er forstærket, der sikrer, at testning af alle stimuli foregår under identiske betingelser.
Afhængigt af den specifikke formålet med forsøget, kan testning bestå af enkelte test forsøg med aircondition lugt eller en serie af forsøg med den betingede odeller eller en kombination af de betingede og nye lugte. En enkelt test forsøg med aircondition lugt giver en enkel analyse af, om biernes huske den betingede lugt. Svaret på den første test forsøg, kan dog afspejle biernes motivation niveau samt deres tilbagekaldelse af den betingede lugt. En serie af test forsøg, som en række af udryddelse forsøg med den betingede lugt eller en serie af enkelt test af konditioneret og en eller flere nye lugte, kan også bruges til at vurdere hukommelsen. Rækken af udryddelse forsøg kan vurdere, hvor stærkt biernes huske den betingede foreningen. Jo stærkere tilbagekaldelsen større antal forsøg er nødvendige for at slukke betinget reaktion. En række af enkelte tests af betingede og nye lugte kan også vurdere specificiteten biernes hukommelse af den betingede lugt.
Det er også nødvendigt at konditionere og teste både kontrol og behandlede grupper på samme tidspunkter. Sammenligneligheding udførelsen af bier snart efter konditionering til bier bestemt for længere perioder er problematisk på grund af eksponering for saccharose USA ved at fodre bierne til mæthed. For eksempel kunne et fald i ydeevne efter lange intervaller skyldes hukommelse forfald, eller det kan skyldes ændringer i motiverende tilstand og / eller læring induceret ved uarmerede eksponering mod USA, hvilket gør resultaterne tvetydig. Derfor bør udførelsen af en behandlingsgruppe altid bedømmes i forhold til en kontrolgruppe konditioneret og testet ved de samme tidspunkter.
Lugt Koncentration og Integritet
Der er flere måder, hvorpå koncentrationen og integritet lugt (CS) kan være kompromitteret. Den mest udbredte problem med lugt levering er udtømningen af lugt patroner fra overforbrug (figur 2). Udskiftning af patronerne 10-12 anvendelser (hver 2 eller 3 forsøg med grupper af 5 honningbier) for at undgå denne faldgrube. Det er også afgørende at anvendefriske patroner til testforsøg, da brugte patroner kan være forskelligt forarmet, og dermed til stede ulige lugt stimuli. Et andet fælles problem er lugt forurening patron ved at benytte patron til mere end en lugt uden helt at rense det. Et snavset eller forurenet luft flow kan også utilsigtet indføre ekstra olfaktoriske stimulus (aktivt kul filtre kan forhindre forurening baggrund). Dette er især problematisk, når kobling PER condition med målinger af fysiologiske reaktioner på lugt. Utætte lugt patroner fremlægge et problem, da honningbier er udsat for lugt før retssagen begynder, hvilket reducerer prominens af lugten stimulus. Løstsiddende på lufttilførslen for lugt levering kan resultere i lidt eller ingen lugt levering, når ventilen åbnes, kunstigt at reducere biernes reaktion på den påtænkte lugt.
Sucroseopløsning og ubetinget stimulus (Reward)
Den enmount, koncentration og integritet rørsukkeropløsningen bruges som USA er afgørende for succesen af eksperimentet. Conditioning er en funktion af mængden og koncentrationen af saccharose-vand-opløsning, der anvendes som USA 37. Mikrometer sprøjter, der anvendes i Metode 2 giver mulighed for meget præcis (ned til 0,2 ul) kontrol med leveringen USA, og vi anbefaler at bruge dem for begge metoder er beskrevet. Anvendelse af tandstikkere (metode 1), er tilstrækkelig til omstændigheder, hvor de dyre sprøjter ikke kan bruges, såsom i uddannelse store grupper af studerende, arbejde i marken, eller med lavere budgetter. Omhyggelig implementering af metode 1 er fint, så længe timing vedligeholdes med regelmæssig udskiftning af tandstikkere for at undgå ophobning af saccharose (og koncentrationen leveret). Men ved hjælp af tandstikkere er det mere vanskeligt præcist at kontrollere og vurdere mængden og omfanget af USA leverede, hvilket er vigtigt for konditionering undersøgelser 1. Koncentrationen af saccharose er nødvendig for atgive en tilstrækkelig belønning for at holde bierne motiveret til at lære den betingede Foreningen kan afhænge af opgavens vanskelighed og biernes indre tilstand eller tid af året. De mere vanskelige opgaver kræver en højere sucroseopløsning for bier «med held lære opgaven. Mug kan oprustning i saccharoseopløsninger selv ved 5 ° C, hvilket vil kompromittere integriteten af løsningen, der påvirker biernes sundhed og opfattelse af belønning under eksperimentet. Det er bedst at erstatte opløsningen hver par dage.
Præcision, timing og Sammenhæng af CS og amerikanske Levering
Det mest kritiske spørgsmål om korrekt gennemførelse af en per procedure, eller for den sags skyld enhver konditionering procedure involverer præcision, timing og konsekvens i CS og levering USA (figur 1). Efterforskere, der er nye til proceduren ofte er upræcise om levering af en eller begge stimuli. ISIsder ikke mulighed for overlapning CS og US resultere i dårlig condition ydeevne. PLC'en automatiserer et signal for eksperimentatoren at levere saccharose 3 sek efter indtræden af lugt levering. Efterforskere bør holde sakkarose / vanddråbe tæt på bi for hurtig levering efter signalet. Disse procedurer hjælpe indblande en konsekvent ISI. Placering af et stopur ved konditionering arena giver mulighed for nem tid placering af forsøget samt overvågning biernes tid i arenaen både før og efter levering af stimuli. På den måde ITI er kan være relativt ensartet og hele proceduren kan køres i et kontrolleret tempo. ITI er der er for korte, for eksempel mindre end 1 min, eller for lange, kan føre til dårlig konditionering resultater 1.
Seasonal, miljømæssige og kontekstuel Virkninger på Honey Bee ydeevne
Honningbier præstationer kan være væsentligt påvirket af sine omgivelserbåde før og under condition. Ofte vil udsvingene i temperatur og mad tilgængelighed, der kommer med de skiftende årstider ændre biernes motivation til at lære. Når blomsterne er i flor, til bierne motivation lære den betingede forening i laboratoriet falder 38. Når kolonien er stresset – fra ekstreme temperaturer, fødevaremangel, eller hvis sygdommen stress – biernes vil vise en reduktion i deres læring ydeevne indeni. Honningbier holdes i en flyvning rum kan lære godt for et stykke tid, men der også stress af sygdom og aldring forringe deres læring resultater over tid. Den kontekst under konditioneringen kan også mindske biernes præstationer. Eventuelle fremmede lugte, bevægelse og andre stimuli kan distrahere bi fra de eksperimentelle stimuli. For at undgå dette problem, vedligeholde en rimeligt ensartet, forenklet visuel kontekst.
Genotype og Erfaringen Påvirker PER ydeevne
<p class = "jove_content"> Honey Bee arbejdere kan variere betydeligt i ydeevne på konditionering procedure på grund af opgaven specialisering, genotype, eller andre miljømæssige faktorer 20. Derfor er det vigtigt at standardisere, så meget som muligt, de typer af dyr anvendt i et eksperiment for at reducere inter-individuel variation. I en koloni ledet af en open-parret dronning, hvilket betyder, at hun parret med mange forskellige droner, vil arbejderne forskellige i faderlig genotype. Genetisk baggrund kan føre til dramatiske forskelle i sensorisk lydhørhed 39 og læring ydeevne 29. Brug kolonier ledet af dronninger instrumentelt insemineres med sæd fra en enkelt droner 28 reducerer denne inter-individuel variation.De ovenfor beskrevne protokoller, omfatter en metode til indsamling af honningbi arbejdstagere fra reden indgangen. Men disse honningbier afviger fra hinanden med hensyn til alder eller adfærdsmæssige opgave. De kan være unge (inexperienCED) eller ældre (mere erfarne) finsnittere. De kan være unge honningbier med deres første orientering flyvninger. Eller de kan være guard bier. For at reducere variation markere bier med en hurtigtørrende emalje maling eller mærkning tags enten som de fremstå som voksne (for at kontrollere for alder), og / eller når de begynder fouragering (til at kontrollere for erfaring). Så et par dage senere, indsamle de markerede bier condition. Arbejdstagere, der er involveret i sygepleje adfærd kan indsamles fra de rammer, inden for bikuben. Sygeplejersker kan identificeres positivt, når de indsætter deres hoveder ind i et kuld celle til foder og pleje for larve indeni.
Brug af Virgin Queens eller Drones for Per Conditioning
Udover arbejdstager honningbier kan jomfruelige honningbi dronninger og droner let Klimaanlæg i en PER procedure for undersøgelser med henblik på at udvikle genetiske linjer af honningbier, der adskiller sig i at lære ydeevne 28. Virgin dronninger bør indsamles hurtigt efter they komme fra pupation og placeres direkte i fastholdende seler uden bedøvelse. Unge, umodne droner indsamlet fra yngel kam inde i kolonien er generelt ikke motiverede for at lære. Efter at de er begyndt parring flyvninger, droner let lære PER opgaver 28. De bør indsamles så de vender tilbage fra en parring flyvning og vedligeholdes natten over i et lille bur i en koloni anvendes til opdræt af dronninger. Forsøg ikke at udnytte dem dagen før konditionering; de ikke overleve godt i seler natten over. Et par timer før konditionering dronerne kan indsamles fra burene og anbringes i fastholdende seler uden bedøvelse.
Konklusioner
Denne PER procedure i vejen for metoder, udgør et udgangspunkt for at designe PER eksperimenter. De fleste PR protokoller vil kræve, at den procedure, der er skitseret ændres på en eller anden måde at gennemføre de specifikke mål for eksperimentet og indkvartere flere behandlingsgrupper. Det er let at gennemføre. Men korrekt gennemførelse kræver opmærksomhed på detaljer og praksis. Når mestrer det kan være en stærk procedure til at tilføje som et forsknings-værktøj til flere grundlæggende og anvendt forskning programmer med forskellige insektarter.
The authors have nothing to disclose.
Denne forskning blev støttet af midler fra NIH NCRR (R01 RR014166 til BHS), NIH NIDCD (R01 DC011422 BHS co-PI), det amerikanske Department of Agriculture (J Trumble PI; BH Smith co-PI) og Arizona State University. Midler til værkstedet for at træne de studerende (data i figur 4) blev leveret af Science Foundation i Chile.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S9378-1KG | |
Odorant compounds (for example): | For additional examples of odorants, see any of the papers on olfactory processing from the Smith lab | ||
1-hexanol | Sigma-Aldrich | 471402-100ML | |
2-octanone | Sigma-Aldrich | W280208-800G-K | |
heptanol | Sigma-Aldrich | 51778-5ML | |
gerianol | Sigma-Aldrich | 163333-25G | |
nonanal | Sigma-Aldrich | 131210-100ML | |
Hexane | Sigma-Aldrich | 296090-1L | |
Heavy Mineral Oil | Sigma-Aldrich | 330760-1L | Make sure it’s odorless |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 459836-1L | |
Scintillation vials | Sigma-Aldrich | Z190535-1PAK | Use a small drill bit to bore a small hole in the cap of the vials |
Bee harness | Custom-made from 0.9 cm diameter plastic soda straws or hard plastic/metal tubing | ||
Duct tape | |||
Kimwipes | Sigma-Aldrich | Z188956-1PAK | |
Wash bottles | Sigma-Aldrich | Z560847-3EA | For the 70% ethanol |
Small fan in mountable housing | |||
Dryer tubing | |||
FOR METHOD 1 ONLY | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
20 ml disposable plastic syringes | Cole-Parmer | WU-07945-18 | |
15 mm filter paper circles | Sigma-Aldrich | Z274844-1PAK | |
Pushpins | |||
Toothpicks | |||
FOR METHOD 2 ONLY | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Gilmont Micrometer syringe, 0.2 mL | Cole-Parmer | EW-07840-00 | |
Gilmont micrometer syringe tip | Cole-Parmer | EW-07841-00 | |
26G 3/8” Leur hub hypodermic needles | Fisher Scientific | 14-826-10 | |
1cc tuberculin syringes (plastic/glass) | Sigma-Aldrich | Z181641-1EA OR Z192090-200EA | glass tuberculin syringes are available, but plastic syringes are much less expensive and will work well for a limited number of uses |
Small rubber/silicone restrictors | Cole-Parmer | EW-95702-02 | Made from 4.8 mm outer diameter silicone tubing or the rubber tips of the 1 cc syringe plungers |
Parafilm | Sigma-Aldrich | P7793-1EA | |
75 X 100 mm filter paper | Sigma-Aldrich | Z695106-500EA | |
Direct Logic 05 Programmable Logic Controller | Koyo Electronics Industries Co, Ltd | http://www.koyoele.co.jp/ OR english/support/dlc.html#plc | |
1 mm, 4mm & 6 mm inner diameter PVC or silicone tubing | Cole-Parmer | Various | Cole-Parmer has a wide selection of suitable tubing |
Polypropylene connectors & leur fittings | Cole-Parmer | Various | Cole-Parmer has a wide selection of connectors and fittings for many tube sizes |
65-mm Correlated Flowmeter | Cole-Parmer | EW-03216-08 | Aluminum with Glass float; For Liquids and Gases, With Valve |
OR | |||
Tetra Whisper 300 (Tetratek DW96-2) Aquarium Air Pump | Aquacave | AE-TETRA-300 | www.aquacave.com |
LIF series Solenoid Valves for .042 " ID Tubing, Configuration "E" | The Lee Company | LFAA1200118H | Neoprene, 430 SS, 302 SS, 280mWatts http://www.theleeco.com/LEEWEB2.NSF |
PC-Board 12VDC 70dB Piezo Buzzer | RadioShack | 273-074 | www.radioshack.com |