Schwannomas vestibulares (VSS) são tumores não-malignos de células de Schwann (SC), origem associados com mutações no gene supressor de tumores de NF2. Apresentamos um protocolo reprodutível e eficiente para humano primário VS cultura celular que permite a manipulação experimental celular e molecular e análise e recapitula a heterogeneidade da doença humana.
Schwannomas vestibulares (VSS) representam Schwann célula (SC) tumores do nervo vestibular, comprometendo 10% de todas as neoplasias intracranianas. VSes ocorrer na neurofibromatose tipo 2 (NF2), formas ou esporádica ou familiar, tanto associados inativando defeitos no supressor de tumor NF2 gene. Tratamento para VSS é geralmente a ressecção cirúrgica ou radiocirurgia, porém a morbidade desses procedimentos tem conduzido investigações sobre tratamentos menos invasivos. Historicamente, a falta de acesso a amostras de tecido fresco e ao fato de que as células schwannoma não são imortalizadas têm dificultado significativamente o uso de culturas primárias para a investigação de schwannoma tumorigênese. Para superar o fornecimento restrito de culturas primárias, a linha celular imortalizada HEI193 VS foi gerado através de transdução com o HPV E6 e E7 de oncogenes. Este transdução oncogénica introduzido alterações moleculares e fenotípicas significativas para as células, o que limita a sua utilização como um modelo para es humanostumores chwannoma. Nós, portanto, ilustrar um protocolo simplificado, reprodutível para a cultura do ser humano primário VS células. Esta técnica permite facilmente dominado investigações moleculares e celulares que recapitulam com mais precisão a complexidade da doença VS.
Schwannomas vestibulares (VSS) representam Schwann célula (SC) tumores do nervo vestibular, comprometendo 10% de todas as neoplasias intracranianas 1-3. VSes ocorrer na neurofibromatose tipo 2 (NF2), formas ou esporádica ou familiar, tanto associados inativando defeitos no supressor de tumor NF2 gene. Tratamento para VSS é geralmente a ressecção cirúrgica ou radiocirurgia, no entanto, a morbidade de tais procedimentos incluem surdez, neuropatias faciais, vazamento de fluido espinhal, desequilíbrio, e rebrota tumor 1. Além disso nem todos os pacientes são aceitáveis candidatos à cirurgia ou radioterapia. Tal morbidade significativa, bem como a falta de terapias alternativas tem impulsionado a investigação sobre a biologia molecular única de VSes na esperança de desenvolver novos tratamentos 3,4.
Cultura celular permite a análise rápida, fácil, e em profundidade do comportamento molecular e celular e de triagem do potencial terapêutico comlibras. Historicamente, a falta de acesso a amostras de tecido fresco e ao fato de que as células schwannoma não são imortalizadas têm dificultado significativamente o uso de culturas primárias para a investigação de schwannoma tumorigênese. Para superar o fornecimento restrito de culturas primárias, a linha celular imortalizada HEI193 VS foi gerado através de transdução com o HPV E6 e E7 oncogenes 5. Este transdução oncogénica introduzido alterações moleculares e fenotípicas significativas para as células, o que limita a sua utilização como um modelo para tumores schwannoma humanos. Culturas SC derivados de linhas de camundongos transgênicos que não possuem um gene NF2 funcional representam uma outra alternativa para investigar tumorigenesis SC NF2-dependente in vitro. Estas culturas no entanto deixar de recapitular a heterogeneidade dos VSes humano ou conta para o comportamento específico humano. A maioria das técnicas anteriores de cultura VS necessário tempos de processamento relativamente longas e complicadas técnicas de cultura seletivos 6-8.Aqui apresentamos um protocolo simples e reprodutível para a primária VS cultura de células com processamento completo em menos de 3 horas, com 95% de pureza das células tumorais, como determinado por imunocoloração.
História das culturas in vitro Schwannoma
Esforços para estabelecer em culturas in vitro schwannoma começou apenas algumas décadas após o neuroma acústico inicial ressecção cirúrgica aberta ocorreu em 1894 12. As primeiras culturas foram gravadas por Kredel na década de 1920, que tentou em vão crescer tumor picada pelo "método da gota pendurado" 12 . Mais tarde, os drs. Murray e Stout publicou sua experi?…
The authors have nothing to disclose.
Apoio: NIDCD R01DC009801, P30DC010362, 5T32DC000040-17
Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution | Sigma | P4957 | Cell Culture Surface Treatment |
Laminin Mouse Protein | Gibco | 23017-015 / L2020 | Cell Culture Surface Treatment |
0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-) | Sigma | C2674 | Dissociation Reagent |
0.25% Trypsin | Gibco | 25200-056 | Dissociation Reagent |
TPS 100mm Round Culture Dish | Midwest Scientific | TP93100 | |
Permanox 4 well slide | Fisher Scientific | 1256521 | |
Permanox 8 well slide | Fisher Scientific | 1256522 | |
Suction Filter Flask | Midwest Scientific | TP99500 | |
15ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91015 | |
50ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91050 | |
2mL Round Bottom Tube | USA Scientific | 1620-2700 | |
Small Scissor | FST | 14058-11 | |
Small Forceps | FST | 11251-20 | |
Scalpel Handle | FST | 10004-13 | |
#11 Scalpel Blade | Roboz | RS-9801-11 | |
Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish | Fisher Scientific | 50-820-904 | |
P1000 Pipetteman | Bioexpress | P3963-1000 | |
Serological Pipetteman | Bioexpress | R3073-2P | |
Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips | Midwest Scientific | TD1250R | |
Insulated Ice Cooler | |||
Culture Hood | Baker | ||
Centrifuge | Eppendorf -5810R | ||
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+) | Gibco | 24020-117 | Schwannoma Culture and Media Components |
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+) | Gibco | 14170-112 | Schwannoma Culture and Media Components |
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red | Gibco | 11965-092 | Schwannoma Culture and Media Components |
N2 Supplement | Gibco | 17502-048 | Schwannoma Culture and Media Components |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | Schwannoma Culture and Media Components |
Penicillin – Streptomycin | Gibco | 15140-163 | Schwannoma Culture and Media Components |
Bovine Insulin (1mg/ml 200x) | Sigma | I6634 | Schwannoma Culture and Media Components |