Вестибулярная Шванномы (VSS) не являются злокачественные опухоли Шванн клеток (СК) происхождения, связанные с мутациями в гене опухолевого супрессора NF2. Мы сообщаем о воспроизводимой, эффективный протокол для первичных человеческих VS культуре клеток, которая позволяет молекулярной и клеточной экспериментальной манипуляции и анализа и повторяет гетерогенную природу болезни человека.
Вестибулярные шванном (VSS) представляют Шванн клетки (СК) опухолей вестибулярного нерва, ущерба 10% всех внутричерепных новообразований. VSs произойти в любом спорадических или семейных (нейрофиброматоз типа 2, NF2) формах, как связанных с инактивирующих дефектов в супрессоров опухолей NF2 ген. Лечение VSS, как правило, хирургическая резекция или радиохирургия, однако заболеваемость таких процедур привела расследования менее инвазивных процедур. Исторически сложилось так, отсутствие доступа к образцов свежих тканей и тем, что шваннома клетки не увековечена значительно затрудняло использование первичных культур для исследования шваннома опухолей. Чтобы преодолеть ограниченный запас первичных культурах, увековечены клеточная линия HEI193 В.С. был сгенерирован трансдукции ВПЧ Е6 и Е7 онкогенов. Это онкогенного трансдукции внесены существенные молекулярные и фенотипические изменения в клетках, которые ограничивают их использование в качестве модели для человека сchwannoma опухоли. Поэтому мы иллюстрируют упрощенную, воспроизводимое протокол для культуры первичных человеческих VS клеток. Это легко освоен метод позволяет для молекулярных и клеточных исследований, которые более точно воспроизводят сложность заболевания VS.
Вестибулярные шванном (VSS) представляют Шванн клетки (СК) опухолей вестибулярного нерва, ущерба 10% всех внутричерепных новообразований 1-3. VSs произойти в любом спорадических или семейных (нейрофиброматоз типа 2, NF2) формах, как связанных с инактивирующих дефектов в супрессоров опухолей NF2 ген. Лечение VSS, как правило, хирургическая резекция или радиохирургия, однако заболеваемость таких процедур включает глухота, лица невропатии, утечка спинномозговой жидкости, дисбаланс и опухоли отрастания 1. Кроме того не все пациенты являются приемлемыми хирургические или радиационные кандидатов. Столь значительный заболеваемости, а также отсутствие альтернативных методов лечения загнал расследование уникальной молекулярной биологии VSS в надежде разработке новых методов лечения 3,4.
Клеточные культуры позволяет быстро, легкому, и углубленного анализа молекулярной и клеточной поведения и скрининга потенциального терапевтического комфунтов. Исторически сложилось так, отсутствие доступа к образцов свежих тканей и тем, что шваннома клетки не увековечена значительно затрудняло использование первичных культур для исследования шваннома опухолей. Чтобы преодолеть ограниченный запас первичных культурах, увековечены клеточная линия HEI193 В.С. был сгенерирован трансдукции ВПЧ Е6 и Е7 онкогенов 5. Это онкогенного трансдукции внесены существенные молекулярные и фенотипические изменения в клетках, которые ограничивают их использование в качестве модели для опухолей шваннома человека. SC культуры, полученные из трансгенных линий мышей, которые не имеют функциональный ген NF2 представляют другую альтернативу для расследования УХЛ2-зависимую SC туморогенез в пробирке. Эти культуры, однако не в состоянии повторять гетерогенную природу человека VSS или счета для конкретного поведения человека. Большинство предыдущих методы VS культуры требуется относительно длинные сроки обработки и сложных методов селективного культуры 6-8.Здесь мы представляем простой, воспроизводимый протокол для первичной VS культуре клеток с полной переработки в рамках 3 часов, с 95%-ной чистоты опухолевых клеток, как определяется иммунной окраски.
История в пробирке шваннома культур
Усилия по созданию в пробирке культур шваннома начал всего несколько десятилетий после первоначального невриномы слухового нерва открытая хирургическая резекция произошло в 1894 12. Первые записанные культур?…
The authors have nothing to disclose.
Поддержка: NIDCD R01DC009801, P30DC010362, 5T32DC000040-17
Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution | Sigma | P4957 | Cell Culture Surface Treatment |
Laminin Mouse Protein | Gibco | 23017-015 / L2020 | Cell Culture Surface Treatment |
0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-) | Sigma | C2674 | Dissociation Reagent |
0.25% Trypsin | Gibco | 25200-056 | Dissociation Reagent |
TPS 100mm Round Culture Dish | Midwest Scientific | TP93100 | |
Permanox 4 well slide | Fisher Scientific | 1256521 | |
Permanox 8 well slide | Fisher Scientific | 1256522 | |
Suction Filter Flask | Midwest Scientific | TP99500 | |
15ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91015 | |
50ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91050 | |
2mL Round Bottom Tube | USA Scientific | 1620-2700 | |
Small Scissor | FST | 14058-11 | |
Small Forceps | FST | 11251-20 | |
Scalpel Handle | FST | 10004-13 | |
#11 Scalpel Blade | Roboz | RS-9801-11 | |
Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish | Fisher Scientific | 50-820-904 | |
P1000 Pipetteman | Bioexpress | P3963-1000 | |
Serological Pipetteman | Bioexpress | R3073-2P | |
Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips | Midwest Scientific | TD1250R | |
Insulated Ice Cooler | |||
Culture Hood | Baker | ||
Centrifuge | Eppendorf -5810R | ||
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+) | Gibco | 24020-117 | Schwannoma Culture and Media Components |
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+) | Gibco | 14170-112 | Schwannoma Culture and Media Components |
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red | Gibco | 11965-092 | Schwannoma Culture and Media Components |
N2 Supplement | Gibco | 17502-048 | Schwannoma Culture and Media Components |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | Schwannoma Culture and Media Components |
Penicillin – Streptomycin | Gibco | 15140-163 | Schwannoma Culture and Media Components |
Bovine Insulin (1mg/ml 200x) | Sigma | I6634 | Schwannoma Culture and Media Components |