일차원 국한 미세 환경에서 세포의 자발적인 이동을 연구하는 정량적 방법이 설명된다. 이 방법은 미세 채널을 활용하고 번의 실험에서 서로 다른 조건 하에서 세포의 다수의 이동을 연구하기 위해 이용 될 수있다.
여기에 설명 된 방법은 하나의 차원에 감금에서 세포 이동의 연구를 할 수 있습니다. 그것은 물리적 제약에 의해 세포에 편광 표현형을 부과 미세 채널의 사용에 기초한다. 앞으로 또는 뒤로 이동 : 내부 채널되면, 세포는 두 가지 가능성이있다. 방향성이 제한되어있는이 지연 마이그레이션 세포의 자동 추적 및 세포의 움직임을 설명하기 위해 정량적 파라미터의 추출을 용이하게한다. 이러한 매개 변수는 이동 중에 휴대 속도, 방향 변경 및 일시 정지 (가) 있습니다. 마이크로 채널은 형광 마커의 사용과 호환이 가능하며 높은 해상도의 세포 이동하는 동안 세포 내 소기관과 구조의 현지화를 연구하는 것이 적합하다. 마지막으로, 채널의 표면은 채널 또는 haptotaxis의 연구의 접착 특성의 조절을 허용하는 다른 기판으로 작용 될 수있다. 요약하면, 시스템 H설명 감수는 독립적 인 실험의 정규화 및 재현성을 용이 기하학과 환경의 생화학 적 성질 양쪽이 제어 된 상태에서 대 세포 수의 마이그레이션을 분석하기위한 것이다.
마이그레이션 개발, 면역 반응 및 조직 재생 등의 다세포 생물의 많은 생리적 과정에 대한 중요한 복잡한 세포 기능입니다. 또, 종양의 침윤과 전이 같은 특정한 병리학 적 상황은 세포 운동성 하나에 의존한다. 이러한 이유로, 세포의 이동은 기본 및 번역 두 연구의 맥락에서 연구의 주요 분야가되고있다. 생체 내 대부분의 조직이 풍부한 세포 외 기질 (extracellular matrix)과 높은 세포 밀도를 특징으로하고 있습니다. 세포의 이동, 따라서 생리적 인 조건 하에서, 복잡한 제한 환경에서 발생합니다. 고전적으로, 가장으로 인해 역사적인 이유와 기술적 한계와 가능성, 세포의 이동은 제한 등의 조직에서 발견되는 환경의 여러 속성을 복제하지 않는 평면 2D 시스템에서 연구되고있다. 또한, 2 차원 운동에 필수적인 세포 부착과 같은 요인은 최근 necessa하지에 보여 주었다되었습니다RILY 2D와 다른 환경에서 세포의 운동을 지배하는 메커니즘이 2 별개 것을 제안, 생체 내에서 또는 젤 내부의 마이그레이션이 필요합니다. 몇몇 시스템은 세포 외 매트릭스 조성물 (3)의 특성을 recapitulating 목표 조직, 가장 유명한 존재 콜라겐 겔의 복잡한 특성을 모방하기 위해 개발되었다. 여기에서 우리는 제한된 환경에서 한 차원에서 연구 세포 이동을 할 수있는 간단한 상호 보완적인 방법으로 마이크로을 제안한다.
이 시스템에서 세포가 자발적으로 입력 할 수로 마이크로를 따라 이동한다. 이동성 세포는 대부분 그들의 극성을 강화 관형 형상을 채용하는, 채널의 형상을 취득. 채널에있는 세포의 선형 이동은 자동 세포 추적 및 실험으로부터 정량적 파라미터의 추출을 허용한다. 기술적 인 관점에서 볼 때이 시스템은 간단하고 유연합니다. 코팅 된채널 벽의 g는 채널의 크기 및 형상이 적용될 수있다, 조작 될 수 있고, 다수의 셀은 하나의 실험에서 분석 될 수있다. 이 시스템은 또한 스케일 업 할 수있다 세포 운동성에 관련된 분자의 중거리 화면 분석을 수행. 여기에 설명 된 프로토콜은 셀룰러 모델로서 수지상 세포 (DC)를 이용하여 표준화되었다. 그들은 4. 시험관, DC가 자발적으로 제한된 환경에서 마이그레이션하는 것으로 나타났다 특정 면역 반응의 개시 및 유지 보수에 참여하고, 따라서 마이크로 5,6에서 세포 운동성을 연구하는 좋은 모델이기 때문에이 세포는 면역 체계의 핵심이다 . 중요한 것은,이 시스템은 T 림프구, 호중구, 또는 종양 세포 7-9과 같은 다른 세포 운동성 분류 마이그레이션을 분석하기 위해 확장 될 수있다.
여기에서 우리는 하나의 실험에서 세포의 많은 수의 철새 특성을 연구하기위한 방법으로 마이크로 구성 장치에 대해 설명합니다. 이 실험 시스템은 내생 철새 세포 조직에서 발견되는 좁은 환경의 제약을 모방. 그러나, 하나의 차원에서 이주를 강요함으로써, 자동 세포 추적 및 measurables의 추출 (그림 5)을 용이하게한다. 우리는 또한 우리의 장치는 형광 현미경과 호환되며, 따라서 세…
The authors have nothing to disclose.
저자는 크게 문화원 퀴리 (CNRS UMR144)에서 PICT IBiSA 플랫폼을 인정합니다. 이 작품은에서 교부금에 의해 투자되었다 : AM.LD에 유럽 연구위원회 (Strapacemi 243103), 협회 국립 라 공들인 (ANR-09-PIRI-0027-PCVI), InnaBiosanté 재단 (Micemico가) MP40으로하고 오전을 붓는다. AM.LD.에 LD 및 ERC Strapacemi 젊은 수사관 부여
PolyDimethylSiloxane (PDMS) | GE Silicones | RTV615 | Package of 90% silicone base and 10% curing agent |
Core sample cutter | Ted Pella Int. | Harris Uni-Core | Diameter 2,5 mm |
Glass-bottom dish | WPI | Fluorodish FD 35-100 | |
Ultrasonic cleaner | Branson Ultrasonics | Branson 200 | |
Plasma cleaner | Harrick Plasma | PDC 32 G | For small samples (35 dishes). A bigger version is also available |
Fibronectin from bovine plasma | Sigma Aldrich | F0895 | |
PolyLysine grafted PEG (Pll-g-PEG) | Susos | PLL(20)-g[3.5]-PEG(5) | |
Hoechst 33342 | Sigma Aldrich | B2261 | |
Y27632 | TOCRIS | 1254 |