माउस में कॉर्नियल neovascularization की एक क्षार जला चोट मॉडल
Summary
कॉर्निया के neovascularization (NV) कई दृश्य विकृतियों को मुश्किल कर सकते हैं. एक नियंत्रित, क्षार जला चोट मॉडल का उपयोग, कार्निया NV की एक quantifiable स्तर neovascular विकारों के लिए संभावित उपचारों की कार्निया NV और मूल्यांकन की यंत्रवत अध्ययन के लिए उत्पादन किया जा सकता है.
Abstract
सामान्य परिस्थितियों के अंतर्गत, कॉर्निया avascular है, और यह पारदर्शिता अच्छा दृश्य तीक्ष्णता को बनाए रखने के लिए आवश्यक है. आघात, स्वच्छपटलदर्शी या संक्रामक रोग की वजह से हो सकता है, जो कॉर्निया,, के neovascularization (NV) कॉर्निया के तथाकथित 'वाहिकाजनक विशेषाधिकार' टूट जाती है और यहां तक कि अंधापन हो सकता है कि कई दृश्य विकृतियों का आधार बनाता है. कई उपचार के विकल्प होते हैं, कार्निया neovascular विकृतियों से प्रस्तुत मौलिक चिकित्सा की जरूरत unmet की बनी हुई है. सुरक्षित, प्रभावी और लक्षित चिकित्सा के विकास के क्रम में, कार्निया NV और औषधीय हस्तक्षेप की एक विश्वसनीय मॉडल की आवश्यकता है. यहाँ, हम माउस में एक क्षार जला चोट कार्निया neovascularization मॉडल का वर्णन. इस प्रोटोकॉल कॉर्निया, ब्याज की एक औषधीय परिसर के प्रशासन, और परिणाम के दृश्य के लिए एक नियंत्रित क्षार जला चोट के आवेदन के लिए एक तरीका प्रदान करता है. इस विधि instrumen साबित हो सकता हैताल कार्निया NV और अन्य neovascular विकारों में हस्तक्षेप के लिए तंत्र और अवसरों के अध्ययन के लिए.
Introduction
कॉर्नियल अंधापन सभी मामलों 1 के लगभग 4% के लिए जिम्मेदार अंधापन के चौथे सबसे आम कारण है. कॉर्नियल neovascularization (NV) ददहा स्वचछपटलशोथं (पश्चिम में अंधापन का प्रमुख संक्रामक कारण) और ट्रेकोमा (दुनिया भर में संक्रामक अंधापन का प्रमुख कारण) 2 सहित इन विकृतियों, के कई में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. वर्तमान उपचार स्टेरॉयड, nonsteroidal विरोधी भड़काऊ दवाओं (NSAIDs), विरोधी VEGF चिकित्सा, और एक साथ ही पारंपरिक या लेजर सर्जरी तकनीक 3 CYCLOSPORIN शामिल हैं. हालांकि, कॉर्निया NV आधारित विकृतियों के गंभीर रूप से दुर्बल प्रकृति, शल्य कार्निया NV इलाज करने में सक्षम सुविधाओं, और एक जोरदार प्रदर्शन औषधीय विकल्प की कमी की कमी, वर्तमान उपचारों के बावजूद, बुनियादी चिकित्सा की जरूरत समाप्त करने के लिए हाल ही में एक विशेषज्ञ गोलमेज सम्मेलन का नेतृत्व किया इन विकृतियों से प्रस्तुत 4 unmet की बनी हुई है.
मानव कॉर्निया5 परतों, 3 सेलुलर परतों (उपकला, stromal और endothelium) और 2 इंटरफेस (बोमन झिल्ली और Descemet झिल्ली) के होते हैं. यह आंख के लिए एक यांत्रिक बाधा और अपवर्तक सतह के रूप में कार्य करता है. इसके पारदर्शी स्वभाव उसके घटकों के एक नाजुक संतुलन का नतीजा है और इसके समुचित कार्य 5 का अभिन्न अंग है. आम तौर पर avascular, कॉर्निया सिलिअरी और नेत्र धमनियों से तंग आ चुके हैं जो अपने बाहरी किनारे के साथ चल microvessels से रक्त प्राप्त करता है. एक प्रेरणा उन्हें कॉर्निया के केंद्र की ओर बढ़ती है और इस प्रकार दृष्टि 6 को सीमित करने की अनुमति इन जहाजों के angiogenesis को बढ़ावा देता है जब कॉर्नियल NV होता है. कॉर्नियल angiogenesis कॉर्निया के केंद्र की ओर अंगीय संवहनी आर्केड से रक्त वाहिकाओं और लसीका वाहिकाओं के अंतर्वृद्धि में परिणाम है, जो hemangiogenesis और lymphangiogenesis शामिल हैं. यह कार्निया "वाहिकाजनक विशेषाधिकार", कॉर्निया अस्पष्टता और फाइब्रोसिस में वृद्धि, कॉर्निया ला के विघटन का एक टूटने की ओर जाता हैyers, और शोफ 7. कार्निया NV की सटीक चलाता है पारंपरिक दवाओं, औद्योगिक रसायन, या यहां तक कि रासायनिक युद्ध एजेंटों के कारण संक्रामक रोग के लिए एक प्रतिक्रिया से ऐसे ट्रेकोमा के रूप में एक रासायनिक प्रेरित राज्य को लेकर कई हैं.
इस प्रक्रिया के आणविक तंत्र के रूप में अभी तक पूरी तरह से विशेषता नहीं हैं; हालांकि, कुछ प्रमुख खिलाड़ियों की पहचान की गई है. सामान्य परिस्थितियों के अंतर्गत कॉर्निया (जैसे घुलनशील VEGF-R1 के रूप में) विरोधी angiogenic कारकों 8 की अनावश्यक सरणी द्वारा बनाए रखा एक अनूठी 'वाहिकाजनक विशेषाधिकार' के पास. हालांकि, (जैसे कि एक चोट के रूप में) एक बाहरी उत्तेजना के जवाब में, समर्थक angiogenic कारकों (जैसे VEGF-ए) के एक स्थानीय upregulation हो जाएगा. इस सुझाव कॉर्निया के वाहिकाजनक विशेषाधिकार underlies, और इसलिए कार्निया विकृति और भी अंधापन 9, जिससे hemangiogenesis, lymphangeogenesis, और सूजन की ओर जाता है कि समर्थक और विरोधी angiogenic कारकों का संतुलन.
<पी वर्ग = "jove_content"> इस बेहद कमजोर कर देने वाली विकृति के unmet चिकित्सा की जरूरत को देखते हुए यह कार्निया NV की एक विश्वसनीय पशु मॉडल है क्षेत्र के लिए ब्याज की है. नियंत्रित क्षार जला चोट: यहाँ हम इस तरह के एक मॉडल प्रस्तुत करते हैं. फिल्टर पेपर के छल्ले के प्रयोग पर आधारित विभिन्न आंख चोट मॉडल 1970 के दशक में 10 के बाद से इस्तेमाल किया गया है. 1989 में, हार्वर्ड मेडिकल स्कूल के नेत्र रोग विज्ञानियों के एक समूह सोडियम हाइड्रोक्साइड (NaOH) के साथ परिपत्र फिल्टर पेपर के एक टुकड़े भिगोने और एक विशिष्ट श्रेणी के कम से कॉर्निया के लिए आवेदन के आधार पर खरगोश में एक केंद्रीय कार्निया क्षार जला चोट का एक मानक मॉडल की विशेषता सांद्रता 11. तब से, इस तकनीक माउस 12-14 में इस्तेमाल के लिए अनुकूलित किया गया है. हाल ही में, वांग प्रयोगशाला एक माउस कार्निया क्षार जला चोट मॉडल 15 का उपयोग कार्निया एनवी के रोगजनन में histone deacetylase (HDAC) अवरोध साहा के उपचारात्मक प्रभाव का अध्ययन किया. यहाँ प्रस्तुत माउस कार्निया क्षार जला चोट मॉडल की कार्यप्रणाली बनाया गया थामुख्य रूप से दो अन्य कागजात 14,16 से पहले काम पर.Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल यह इन तीन (अंतर्संबंधित) प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श व्यवस्था है, जिससे hemangiogenesis, lymphangiogenesis, और सूजन की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने के स्तर में यह परिणाम है. इस विधि केंद्री…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम पांडुलिपि की तैयारी में डा. Xinyu ली की मदद के लिए आभारी हैं. पश्चिम Tulane विश्वविद्यालय, UT दक्षिण मेडिकल सेंटर, एनआईएच अनुदान EY021862, दृष्टिहीनता फाउंडेशन को रोकने के लिए अनुसंधान से एक कैरियर विकास पुरस्कार से राष्ट्रपति का अनुसंधान परिषद नई अन्वेषक पुरस्कार, और उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन रिसर्च में एक तेज फोकस पुरस्कार से एक स्टार्टअप निधि द्वारा समर्थित किया गया .
Materials
| 1 mL Syringe | BD | 309659 | |
| 18 Guage Needle | BD | 305918 | |
| 10 mL Syringe | BD | 306575 | |
| 25 Guage Needle | BD | 305916 | |
| Anti-F4/80 (rat anti-mouse) | AbD Serotech | MCA497RT | |
| Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse) | Abcam | ab14917 | |
| Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse) | BD | 553370 | |
| Anti-IgG Alexa488 (goat anti-rat) | Invitrogen | A11006 | |
| Anti-IgG Alexa594 (goat anti-rabbit) | Invitrogen | A11012 | |
| Camera | Tucsen | TCC 5.0 ICE | |
| Coverslips | Fisher | 12-548-B | |
| DMSO | Sigma | D4540-1L | Caution: Mutagenic, Toxic |
| Forceps (Blunt), Iris | WPI | 15915 | |
| Forceps (Sharp), Dumont #4 | WPI | 500340 | |
| KCl | Fisher | P217-500 | |
| Ketamine Solution | MedVet | RXKETAMINE | Controlled substance, proper license required for use. |
| Light Source for Microscope | AmScope | LED-14M-YA | |
| Microscope (Stereo 7X-45X) | AmScope | SM-1B | |
| Mounting Medium, Vectashield | Vector | H-1000 | |
| NaCl | Fisher | S271-10 | |
| NaH2PO4 | Fisher | S397-500 | |
| NaOH | Fisher | S318-1 | Caution: Corrosive |
| Paraformaldehyde | P6148-500G | Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic | |
| Proparacaine Hydrochloride | Sigma | P4554-1G | |
| Scissors (5mm blade), Vanas | WPI | 14003 | |
| Goat Serum | MPBio | 92939249 | |
| Microscope Slides | Fisher | 12-550-15 | |
| Triton X-100 | Sigma | T8787-100ML | |
| Whatman Grade 1 Filter Paper | Whatman | 1001-6508 | |
| Xylazine Solution | MedVet | RXANASED-20 |
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