Aerosolized lipopolysaccharide का प्रयोग उत्पन्न पल्मोनरी Neutrophilia के लिए एक विधि
Summary
हम गंभीर फेफड़ों की चोट मॉडल के लिए, nebulization के द्वारा aerosolized lipopolysaccharide के लिए चुनौती से neutrophilic फेफड़े की सूजन उत्प्रेरण के लिए एक विधि का वर्णन। इसके अलावा, फेफड़ों के अलगाव, सांस की नली इंटुबैषेण और ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना लिए बुनियादी शल्य चिकित्सा तकनीक भी वर्णित हैं।
Abstract
गंभीर फेफड़ों की चोट (अली) सीमित उपचार के विकल्प और उच्च मृत्यु दर के साथ वायुकोशीय neutrophilia द्वारा विशेषता एक गंभीर बीमारी है। अली की प्रयोगात्मक मॉडल रोग रोगजनन के बारे में हमारी समझ को बढ़ाने में महत्वपूर्ण हैं। ग्राम सकारात्मक बैक्टीरिया से निकाली गई lipopolysaccharide (LPS) neutrophilic वायुमार्ग में सूजन और चूहों के फेफड़ों पैरेन्काइमा लाती है। ऐसे LPS के रूप में यौगिकों के कुशल फेफड़े के वितरण, हालांकि, प्राप्त करने के लिए मुश्किल है। यहाँ वर्णित दृष्टिकोण में, चूहों में फेफड़े के वितरण aerosolized Pseudomonas aeruginosa LPS के लिए चुनौती से हासिल की है। भंग LPS के संपीड़ित हवा से जुड़ा एक छिटकानेवाला द्वारा aerosolized गया था। चूहे एयरोसोल बंद किया गया था के बाद 2 मिनट कंडीशनिंग, जिसके बाद 10 मिनट के लिए एक Plexiglas बॉक्स में LPS एयरोसोल की एक सतत प्रवाह से अवगत कराया गया। Formalin छिड़काव द्वारा पीछा सांस की नली इंटुबैषेण और बाद ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना, अगले बाँझ पी के लक्षण वर्णन के लिए अनुमति देता है, जो प्रदर्शन किया थाulmonary सूजन। Aerosolized LPS ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना में और histological आकलन से पता लगाया वायुकोशीय neutrophilia द्वारा विशेषता फेफड़े की सूजन, उत्पन्न करता है। इस तकनीक को कुछ उपकरणों के साथ एक छोटी सी कीमत पर स्थापित है, और न्यूनतम प्रशिक्षण और विशेषज्ञता की आवश्यकता हो सकती है। जोखिम प्रणाली इस प्रकार नियमित रूप से फेफड़ों विकृति के बारे में हमारी समझ को बढ़ाने की क्षमता के साथ, किसी भी प्रयोगशाला में प्रदर्शन किया जा सकता है।
Introduction
Lipopolysaccharide (LPS) ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया 1 के एक कोशिका दीवार घटक है। LPS के लिए चैलेंज गंभीर फेफड़ों की चोट, तीव्र neutrophilic सूजन और शोफ 2 द्वारा विशेषता सिंड्रोम की एक अच्छी तरह से प्रलेखित मॉडल है। इसके अलावा, फेफड़े neutrophilia भी सीओपीडी exacerbations 4 मॉडल के लिए इस्तेमाल किया गया है क्रोनिक ऑब्सट्रक्टिव पल्मोनरी डिजीज (सीओपीडी) 3, और मानव में LPS चुनौती की एक बानगी है। इस प्रकार, LPS के लोगों तक पहुंचाने की प्रयोगात्मक मॉडल चिकित्सकीय मानव विकृति को समझने के लिए प्रासंगिक और मूल्यवान उपकरण हैं।
यहाँ वर्णित aerosolized LPS के फेफड़े के वितरण का उद्देश्य प्रणालीगत भागीदारी के बिना आयोजन और श्वसन वायुमार्ग में एक neutrophilic भड़काऊ प्रतिक्रिया उत्पन्न करने के लिए है। LPS चुनौती से निपटने के कई तकनीकों पहले से वर्णित किया गया है। LPS का इंट्रा-शिरापरक इंजेक्शन प्रशासन का सबसे अधिक इस्तेमाल किया मार्ग है। इस तकनीक को आसानी से पहुँचा जा सकता है हालांकि, टीवह प्राथमिक क्षति फेफड़ों को न्युट्रोफिल प्रवास निम्नलिखित फेफड़े उपकला के माध्यमिक विनाश के साथ, अन्तःचूचुक करने के लिए है। इंट्रा-शिरापरक प्रशासन भी पशु मॉडल में नैदानिक तस्वीर को मुश्किल हो सकती है, जो प्रणालीगत सूजन 2, लाती है। प्रणालीगत सूजन इंट्रा-सांस की नली प्रशासन के साथ नहीं मनाया विपरीत है। इस तकनीक, हालांकि, श्रम गहन है और एनेस्थेटिक्स के साथ-साथ काफी प्रशिक्षण 5, 6 की आवश्यकता है। इसके अलावा, प्रशासन का इस मार्ग से फेफड़े के बयान साँस लेने में सात पर निर्भर है। इस प्रकार, फेफड़े के बयान एयरवेज में इंट्रा सांस की नली प्रशासन और चर बयान देखा जा सकता है के लिए आवश्यक संज्ञाहरण की गहराई से प्रभावित है। इसके विपरीत, aerosolized LPS के साथ फेफड़े के वितरण न्यूनतम प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है, और आसानी से थोड़ा के साथ जानवरों की एक बड़ी संख्या या व्यक्तियों 5, 8 के बीच कोई भिन्नता पर पूरा किया जा सकता है।एक ताजा अध्ययन में एयरोसोल वितरण बयान के संबंध में इंट्रा-सांस की नली मार्ग से बेहतर है कि, और LPS के अधिक प्रासंगिक खुराक इस मॉडल 8 के साथ neutrophilic सूजन प्रेरित कि पुष्टि करता है।
Aerosolized Psuedomonas aeruginosa LPS वायुकोशीय रिक्त स्थान 9, 10 सहित airway के लुमेन और फेफड़ों पैरेन्काइमा, में एक उल्लेखनीय भड़काऊ प्रतिक्रिया उत्पन्न करने के लिए पिछले अध्ययनों कि चुनौती का प्रदर्शन किया है। सूजन न्यूट्रोफिल और फेफड़े के edema की मौजूदगी की एक विशेषता की विशेषता है, और इस तरह गंभीर फेफड़ों की चोट के रोगजनन संबोधित करने और रोग विकृति विज्ञान के लिए योगदान दे तंत्र के आगे ज्ञान हासिल करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
Aerosolized LPS उपकला submucosa में न्यूट्रोफिल द्वारा विशेषता एयरवेज में एक भड़काऊ प्रतिक्रिया, उत्पन्न करता है, का आयोजन एयरवेज, साथ ही वायुकोशीय रिक्त स्थान के आसपास के रिक्त स्थान। यह एक साथ प्लाज्मा रिसाव, गंभी?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम कुशल सहायता के लिए Kerstin Thim (एस्ट्राजेनेका, लंड, स्वीडन), Benita Dahlberg और डॉ ऐन्डर्स Eklund (कारोलिंस्का Institutet, स्टॉकहोम, स्वीडन) और साथ ही डॉ मार्टिन Stampfli (मैकमास्टर विश्वविद्यालय, हैमिल्टन, पर, कनाडा) शुक्रिया अदा करना चाहूँगा और विशेषज्ञ सलाह।
Materials
| Name of the material/equipment | Company | Catalog number | Comments/Description |
| Purified Pseudomonas aeruginosa LPS | Sigma-Aldrich | Harmful. Recomended purification. LPS purified from other bactria may be used. | |
| Pari LC sprint star nebulizer | PARI Respiratory Equipment Inc. | 023G1250 | |
| TSI mass flowmeter 4040 | TSI | 4040 | Alternative product from supplier may be used. |
| Saint-Gobain 15.9 mm Tygon tube | Sigma-Aldrich | Z685704 | Recomended brand. |
| Plexiglas boxes with removable lids | Custom built | N/A | 150 x 163 x 205 mm (a 2 mm hole on the side). |
| 3M Half Facepiece Reusable Respirator | 3M | 7503 | Recomended brand. |
| 3M Advanced Particulate Filters (P100) | 3M | 2291 | Recomended brand. |
| Sissors | VWR | 233-1104 | Preferred scissors may be used. |
| Forceps | VWR | 232-1313 | Preferred forceps may be used. |
| Intramedic PE50 polyethylene tube | BD | 427411 | Recomended brand. |
| Ethicon 2-0 Perma-hand silk tread | VWR | 95056-992 | Recomended brand. |
| 26 ½ gage needle | Alternative suppliers exist. | ||
| 1 mL BD slip-tip syringe, non-sterile | BD | 301025 | Alternative suppliers exist. |
| 60 mL BD Luer-Lok syringe, non-sterile, polypropolene | BD | 301035 | Alternative suppliers exist. |
| Fluka Hematoxylin-Eosin | Sigma-Aldrich | 3972 | Alternative suppliers exist. |
| Türk's solution | Merck Millipore | 109277 | |
| Table top centrifuge | Alternative manufacturers exist. | ||
| Cytospin 4 cytocentrifuge | Thermo Scientific | A78300003 | Alternative centrifuge can be used. |
| HEMA-3 stat pack | Fisher Scientific | 23-123-869 | Alternative staining kits exists. |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | Alternative suppliers exist. |
References
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