のロテノン誘発性のパーキンソン病モデルにおける自発と驚愕誘発性歩行を特徴づけるための方法<em>ショウジョウバエ</em
Summary
パーキンソン病は、運動欠陥を引き起こす中枢神経系におけるドーパミン作動性ニューロンの変性に起因する神経変性疾患である。ロテノンモデルショウジョウバエのパーキンソン病。本論文では、ロテノンによって引き起こされる自発的かつ驚愕誘発性の両方歩行の欠陥を特徴づける2つのアッセイの概要を説明します。
Abstract
パーキンソン病は、主に黒質に、中枢神経系におけるドーパミン作動性ニューロンの変性に起因する神経変性疾患である。疾患は、ヒトにおける剛性、振戦および痴呆として存在モータの欠陥を引き起こす。ロテノンは、ミトコンドリアにおける電子伝達系の機能を阻害することによって、酸化的損傷を引き起こす殺虫剤である。また、 ショウジョウバエにおけるパーキンソン病をモデル化するために使用される。ハエは、びっくりしている時に上向きに登るためにそれらを強いる固有の負の走地性の応答を持っている。それは、ロテノンは、彼らが下向きにタップされた後に登るハエの能力を混乱の早期死亡率と運動の欠陥の原因となることが確立されている。しかし、自発的な運動にロテノンの効果は十分に文書化されていません。この研究は、内ロテノン誘導性の欠陥を特徴付けるために二つ敏感な再現性、高スループットアッセイを概説ショウジョウバエの短期的な驚愕誘発性運動と長期自発運動。これらのアッセイは、好都合に移動欠陥および治療 薬の有効性の他のショウジョウバエモデルを特徴付けるために適合させることができる。
Introduction
ロコモーションの不備は、パーキンソン病の主な症状であり、主に黒質1のドーパミン作動性ニューロンの劣化によって引き起こされる。ロテノンは、 ショウジョウバエ 2-6のパーキンソン運動障害をモデル化するために広く研究されているケトン殺虫剤である。ロテノンは、最終的に細胞死7を引き起こす酸化的リン酸化経路を遮断することによって酸化的損傷を引き起こす。ドーパミン作動性ニューロンは、主にモータが2,7を基に化学物質の影響を作り、ロテノン毒性になりやすいです。彼らは遺伝的に扱いやすいですのでハエでパーキンソン病症状を誘導することによって、私たちはより良い病気を理解し、その症状6,8-11を解決することができます。 ショウジョウバエは維持し、迅速なライフサイクルを持ちやすい、この効果を研究するための優れたモデルを提供します。
いくつかの研究は、ロテノン、短期驚愕誘発性の原因となることが示されているショウジョウバエ毎期ハエにおける歩行欠陥がロテノン補充食品で維持されている、彼らは驚愕2-6の後に遅い負走地性の応答を示しています。対照トライアル限り迅速にバイアル装置において上向きに登るため彼らの失敗は驚愕誘発性運動欠陥を示すものである。
長期的にロテノンの効果は、自発的な動きがよくショウジョウバエの活動モニター（のDAM）が正常ショウジョウバエ概日リズムの動きを監視するために使用されている。記載12,13を研究されていない。ハエは、DAMにロードされる個別のチューブ内に配置される。この装置は、ハエが赤外線ビームを遮断回数をカウントする赤外線センサを備えている。これらのカウントは、邪魔されずに移動および活性12,13の尺度として用いることができる。 DAMでハエを確定すると、長期的な運動に対するロテノンの影響を特徴づけることができる。この研究は、MEASへの方法について説明しますより良いロテノン仲介モーターの欠陥の影響を理解するためにURE短期の驚愕誘発性運動と長期自発運動。彼らはこれらの運動欠陥を逆転し得る他の化合物の研究のために可能にするので、パーキンソン病を模倣運動欠乏症の特性が重要である。
Protocol
Representative Results
Discussion
本研究では、パーキンソン病のロテノン誘発性ショウジョウバエモデルにおける長期的な自発運動および短期驚愕誘発性運動の両方を測定するための2つの手順を説明します。 Oneはまた、パーキンソン病などをモデル化することが知られている他の薬理学的薬剤、パラコート14、パーキンソン病などの遺伝的モデルが、α-シヌクレイン変異体15、</s…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、バックグラウンドミュージックを提供するために、ビデオ処理とエリック·トーマス、音楽科、コルビー大学と技術支援のために、Qiuli王、言語リソースセンター、コルビー·カレッジに感謝したいと思います。このプロジェクトは、研究資源、INBRE（P20RR016463-12）ナショナル·センターからの助成、一般的な医科学研究所（P20のGM103423-12）、健康科学課グラント、コルビー·カレッジ（STA）の国民研究所によってサポートされていました。 JLとLWM夏奨学生基金、コルビー大学からの補助金によってサポートされていました。
Materials
| Standard narrow vials | Genesee Scientific | 32-120 | |
| Rotenone | Sigma | R8875 | Store in freezer, make fresh for each experiment |
| Dimethyl Sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418 | Solvent for rotenone |
| Instant Drosophila medium | Carolina Biological | Formula 4-24 | |
| Drosophila activity monitor (DAM) | Trikinetics | DAM2 | trikinetics.com |
| DAM tubes | Trikinetics | Tubes 5X65 mm | |
| Recipe for Rotenone +food (125 mM dose) | Make 62.5 mM rotenone stock solution in DMSO by dissolving 25 mg rotenone in 1 ml DMSO | ||
| For 125 mM dose, add 10 mM rotenone stock in DMSO to 5 ml water. |
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