Un protocole d&#39;infecter<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Avec<em&gt; Salmonella typhimurium</em

Résumé

C. elegans a émergé comme un nouveau modèle génétique pour étudier les interactions hôte-pathogène. Ici, nous décrivons un protocole pour infecter C. elegans avec Salmonella typhimurium couplé avec la technique d'interférence double-brin ARNi pour étudier le rôle des gènes de l'hôte dans la défense contre l'infection à Salmonella.

Résumé

Dans la dernière décennie, C. elegans est devenu un organisme invertébré pour étudier les interactions entre hôtes et pathogènes, y compris la défense de l'hôte contre les bactéries gram-négatif bactérie Salmonella typhimurium. Salmonella établit une infection persistante dans l'intestin de C. elegans et entraîne la mort précoce des animaux infectés. Un certain nombre de mécanismes de l'immunité ont été identifiés en C. elegans pour se défendre contre les infections à Salmonella. Autophagy, une voie de dégradation lysosomale évolutif conservé, a été montré pour limiter la réplication de Salmonella dans C. elegans et chez les mammifères. Ici, un protocole est décrit à infecter C. elegans avec Salmonella typhimurium, dans laquelle les vers sont exposés à Salmonella pendant une durée limitée, semblable à une infection à Salmonella chez l'homme. infection à Salmonella raccourcit considérablement la durée de vie de C. elegans </ Em>. Utilisation du gène de l'autophagie essentiel bec-1, par exemple, nous avons combiné cette méthode d'infection à C. elegans ARNi alimentation approche et montré ce protocole peut être utilisé pour examiner la fonction de C. gènes de l'hôte elegans dans la défense contre l'infection à Salmonella. Depuis C. elegans génome des bibliothèques entières de RNAi sont disponibles, ce protocole permet à l'écran complètement pour C. gènes elegans qui protègent contre les salmonelles et d'autres agents pathogènes intestinaux utilisant des bibliothèques de l'ARNi du génome entier.

Introduction

Le nématode du sol vivant librement Caenorhabditis elegans est un organisme simple et génétiquement traitable modèle utilisé pour étudier plusieurs questions biologiques. C. elegans existe dominante comme hermaphrodites auto-fertilisation. Les mâles sont spontanément générées par des non-disjonction du chromosome X durant la gamétogenèse ^1,2. En présence d'une alimentation abondante, C. elegans développer en continu à travers quatre stades larvaires à l'âge adulte. La température influe aussi C. développement elegans; On observe un développement plus rapide à des températures plus élevées. En laboratoire....

Protocole

1. XLD (xylose-lysine-désoxycholate) des plaques de gélose

gélose XLD est un milieu de croissance sélective de Salmonella, qui apparaît comme des colonies noires sur des plaques de gélose XLD. Toutefois, s'il n'y a pas des préoccupations de contamination, une plaque régulière LB peut être substitué.

1. Peser 5,5 g XLD agar et remettre en suspension dans 5 ml d'eau déminéralisée.
2. Bien mélanger jusqu'à ce que tous agar est humide. Ajouter 95 ml d'eau déminéralisée jusqu'à ce que tous les grumeaux et le milieu est complètement remises en suspension.
3. Faire bouillir le milieu pour di....

Résultats

A 20 ° C, la durée de vie médiane de type sauvage vers N2 est de 17 jours (figure 2A et Tableau 2). L'infection à Salmonella diminue de manière significative la durée de vie médiane de vers N2 à 10,5 jours (p = 0,0002, log-rank test) (figure 2A ).

Si un C. gène elegans joue un rôle important dans la défense contre l'infection à Salmonella, il est prévu que son inhibition peut conférer la s.......

Discussion

C. elegans est un simple organisme modèle génétique qui mange des bactéries comme source d'éléments nutritifs. Ainsi, il est aisé de substituer sa nourriture bactérienne normale avec un agent pathogène intestinal pour enquêter sur les interactions entre C. elegans et l'agent pathogène choisi. Ici, un protocole est décrit à combiner infection à Salmonella et C. elegans ARNi alimentation de traitement pour examiner le rôle des gènes de l'hôte dans la défense contre l'inf.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
LB Bouillon	Fisher	BP9723-500
Gélose XLD	EMD Produits chimiques	1.05287.0500
Bacto Agar	Fisher	DF0140-01-0
Peptone	Fisher	BP1420-500
Chlorure de sodium	Fisher	S671-500
Chlorure de calcium	Fisher	C69-500
Sulfate de magnésium	Fisher	M65-500
IPTG	Gold Biotechnology	12481C50
Cholestérol	Sigma	C8667-25G
Ampicilline	Fisher	BP1760-25
Salmonella typhimurium	ATCC	ATCC14028 Boîte de
Pétri 95 x 15 mm	Fisher	FB0875714G
Boîte de Pétri 60 x 15 mm  ;	Fisher	08-757-13A
Falcon Pipette sérologique	Fisher	13-668-2
Falcon Express Pipet-Aid	Fisher	13-675-42
MaxQ6000 incubateur à secousses  ;	Incubateur Thermo Scientific	SHKE6000-7
	Percival	I-36DL