Мышиные Трансплантация роговицы: Модель по изучению наиболее распространенная форма твердого трансплантации органов

Summary

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Abstract

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Introduction

Трансплантация роговицы является одним из наиболее успешных и распространенных видов трансплантации, выполненных в организме человека. Причины, по которым эта операция выполняется, являются результатом травмы, инфекционные болезни ^1, или других форм неинфекционной заболеваниями роговицы ^2. Фигуры из глаз Банк ассоциации Америки показывают, что более 46 000 были выполнены в 2011 году (см сайт по адресу: restoresight.org/eye_banks/eye_banks.html). Показателем успеха является то, что один год частота отказов для аллогенных пересадке роговицы в диапазоне от 10 до 15% и на 5 лет успеха превышает 70% ^3-8. Как и многие исследования показали, что успех роговицы аллотрансплантатов напрямую связано с тем, что глаз является иммунологически привилегированных сайт. Факторы, ответственные за состояние роговицы в виде иммунной сайте привилегий относятся отсутствие обоих кровеносных и лимфатических сосудов в роговице, относительное отсутствие антиген-представляющих клеток, факторы произведенный роговицы этой suppresS иммунных эффекторных Funtions ^9-15 низкая экспрессия антигенов МНС ^16, и выражение FasL ^17-20.

Тем не менее, несмотря на эти факторы, предрасполагающие эти трансплантаты для успеха, они подвергаются неприятие ^3-7. Следовательно, понимание этих механизмов, которые обеспечивают этот отказ, а также проверки различных методов лечения для предотвращения отторжения имеет решающее значение. С этой целью, мы опишем здесь мышиную модель роговицы трансплантации, который был в эксплуатации более 20 лет, чтобы изучить трансплантации роговицы в контролируемой экспериментальной среде. Поскольку ответы трансплантации включают множество различных факторов, работающих в концерте, который будет конечная определяет, не является ли пересадить ткань или преуспевает, это не возможно, чтобы понять важность этих факторов в любой модели в пробирке. Следовательно, исследования с использованием интактных животных обязаны определить, какие факторы важны для любой успех или failuповторно из пересаженной ткани.

В то время как другие виды животных были использованы для изучения трансплантации роговицы, мышиной модели имеет несколько преимуществ по сравнению с использованием других видов. Во-первых, существование многих видов мышей, которые выражают определенные трансгенов или были ген-направленных на лишены экспрессии специфических иммунологических факторов, функция которых в трансплантации может быть лучше изучены. Кроме того, есть много реактивы (оба рекомбинантные факторы и антитела, которые нейтрализуют факторы), которые являются специфическими для мышей и которые не существуют для многих других видов животных. Из-за существования этих факторов, эта модель широко используется для выявления соответствующих факторов, участвующих в острых роговицы ответов Аллотрансплантация ^{15, 17,18,20 -29.} Кроме того, многие из факторов, участвующих в трансплантации роговицы, также известный, чтобы быть функциональным в трансплантации других тканей.

Protocol

ПРИМЕЧАНИЕ: Все животные, используемые в данной процедуре, рассматриваются в соответствии с Ассоциацией по исследованиям в области зрения и офтальмологии и убытках за использования животных в глазной и видение исследований, а также требований, установленных вниз комитета по надзору ?…

Representative Results

Мышиной модели трансплантации роговицы был использован на протяжении более 20 лет успешно характеризуют механизмы как роговицы отторжения трансплантата 19-23 и роговицы принятия трансплантата 13, 15,16,18, 24-27. Эта модель была использована для создания важность выражения FasL рого?…

Discussion

Мышиной модели роговицы трансплантации описанной здесь позволяет следователю для изучения человеческого роговицы отторжения трансплантата в модели, которая предсказывает, какие факторы лучше всего связан как с отказом ^{15,17,18,20, 26-30} и принятия ^21-25 роговицы аллотрансплантат?…

Materials

Name of Material/ Equipment	Company	Catalog Number	Comments/Description
Zeiss Surgical Microscope	Zeiss	Rebuilt
1 mL Syringe	BD	305122
3 mL Syringe	BD	309657
10 mL Syringe	BD	309602
Vannus Scissors	Stortz	E-3387
11-0 Sutures	Alcon	717939M
Trephine 2.0mm	Katena	K 2-7520
Trephine 1.5 mm	Katena	K 2-7510
Tricaine Hydrochloride 0.5%	Alcon	NDC 0065-0741-12
Healon	Abbott	Healon OVD
Forceps	FST	11251-20
7-0 Sutures	Alcon	8065
2.5% Phenylephrine HCl	Alcon	NDC 61314-342-02
1% Tropicamide	Bausch & Lomb	NDC-24208-585-59
Hamilton Syringe	Hamilton	7654-01
33 gauge needle	Hamilton	90033
Cell Strainer (100 μm nylon)	BD Falcon	352360
Hemocytometer	Cardinal Health	B3175
Trypan Blue	Sigma	T8154