Imagerie en temps réel des cellules myéloïdes Dynamique Apc Min / + Intestinale tumeurs par Spinning Disk microscopie confocale

Caroline Bonnans; Marja Lohela; Zena Werb

doi:10.3791/51916

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Article de méthode

Imagerie en temps réel des cellules myéloïdes Dynamique Apc^{Min / +} Intestinale tumeurs par Spinning Disk microscopie confocale

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DOI :

10.3791/51916

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6 octobre 2014

Caroline Bonnans^*¹^,² , Marja Lohela^*² , Zena Werb²

¹Department of Oncology, INSERM U661, Functional Genomic Institute, ²Department of Anatomy, University of California

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

En utilisant des souris rapporteures transgéniques et des marqueurs fluorescents injectables, la microscopie confocale à disque rotatif intravital à long terme permet de visualiser directement le comportement des cellules myéloïdes dans l’adénome intestinal dans le modèle de cancer colorectal Apc^Min/+.

Résumé

Les cellules myéloïdes sont des cellules immunitaires les plus abondants dans les tumeurs et il a été démontré pour favoriser la progression de la tumeur. Techniques d'imagerie intravitale modernes permettent l'observation du comportement cellulaire vivent à l'intérieur de l'organe, mais peut être difficile dans certains types de cancer dû à l'accessibilité d'organes et de la tumeur tels que l'intestin. L'observation directe des tumeurs de l'intestin n'a pas été rapportée précédemment. Une intervention chirurgicale décrite ici permet l'observation directe de la dynamique des cellules myéloïdes dans les tumeurs intestinales chez des souris vivantes en utilisant des souris transgéniques rapporteurs fluorescent et traceurs injectables ou des anticorps. A cet effet, un quatre couleurs, multi-région, micro-lensed disque filature microscope confocal qui permet l'imagerie continue à long terme avec l'acquisition rapide d'images a été utilisé. Apc ^{Min / +} souris qui développent de multiples adénomes de l'intestin grêle sont croisés avec des souris c-fms-EGFP pour visualiser les cellules myéloïdes et des souris ACTB-ECFPà visualiser les cellules épithéliales de l'intestin des cryptes. Les procédures pour le marquage de composantes de tumeurs, tels que les neutrophiles et les vaisseaux sanguins, et la procédure de positionnement de la tumeur pour l'imagerie à travers la surface séreuse sont également décrits. Films time-lapse compilées à partir de plusieurs heures de l'imagerie permettent l'analyse du comportement des cellules myéloïdes in situ dans le microenvironnement intestinal.

Introduction

Des preuves irréfutables démontrent maintenant que le microenvironnement de la tumeur, constitué de populations cellulaires hétérogènes, y compris les fibroblastes, les cellules endothéliales, les cellules immunitaires et inflammatoires, la matrice extracellulaire et les facteurs solubles, joue un rôle crucial dans l'initiation et la progression des tumeurs solides, en contribuant à la quasi-totalité caractéristiques du cancer ^1. En effet, au cours de la progression de la tumeur, il existe des interactions dynamiques constants entre les cellules cancéreuses et les cellules transformées stromales qui évoluent à générer un micro-environnement favorable à....