Le cerveau est un site unique avec des qualités qui ne sont pas bien représentés par des analyses in vitro ou extra-utérines. Des modèles de souris orthotopique avec l'emplacement et les caractéristiques de croissance et reproductibles peuvent être créés de manière fiable avec des injections intracrâniennes en utilisant un instrument stéréotaxique de fixation et d'une pompe à seringue à basse pression.
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Article de méthode
Création anatomique précise et reproductible intracrânienne xénogreffes de tumeurs cérébrales humaines
Dans cet article
Résumé
Résumé
Des modèles de tumeur orthotopique sont actuellement la meilleure façon d'étudier les caractéristiques d'un type de tumeur, avec ou sans intervention, dans le cadre d'un animal vivant - en particulier dans les sites avec des qualités physiologiques et architecturaux uniques tels que le cerveau in vitro et des modèles ectopiques peuvent pas. tenir compte des caractéristiques telles que le système vasculaire, barrière hémato-encéphalique, le métabolisme, l'administration de médicaments et de toxicité, et une foule d'autres facteurs pertinents. Modèles orthotopiques ont leurs limites aussi, mais avec les cellules tumorales appropriées technique d'intérêt peuvent être greffées dans le tissu avec précision qui imite le plus étroitement des conditions dans le cerveau humain. En employant des méthodes qui fournissent des volumes mesurés précisément à définir avec précision les lieux à un taux constant et la pression, des modèles murins de tumeurs cérébrales humaines avec des taux de croissance prévisibles peuvent être créés de façon reproductible et sont appropriés pour une analyse fiable des diverses interventions. Le protocole décrit ici met l'accent sur la techniques détails de la conception et de la préparation d'une injection intracrânienne, d'effectuer la chirurgie, et d'assurer la croissance tumorale efficace et reproductible et offre des points de départ pour une variété de conditions qui peuvent être personnalisés pour une gamme de modèles de tumeurs cérébrales différentes.
Introduction
Des études in vitro de cellules tumorales du cerveau sont précieux pour disséquer les mécanismes moléculaires croissance, la survie, la migration et l'invasion des cellules cancéreuses d'entraînement; expériences sur des cellules en culture peuvent définir des voies de signalisation, de proposer des cibles thérapeutiques potentielles, et de caractériser la réponse cellulaire à un traitement médicamenteux. Mais systèmes in vitro sont beaucoup trop simpliste pour prédire la réponse organismal aux produits pharmaceutiques; ils n'ont pas les réactions physiologiques, les réponses immunitaires, microenvironnement cellulaire, et l'hétérogé....
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Protocole
Toutes les procédures décrites ont été examinés et approuvés par notre comité de protection des animaux et l'utilisation institutionnelle.
1 plan de l'Expérience
- Choisir les cellules à injecter. Les cellules provenant de différentes sources sont des candidats pour l'injection: les lignes de culture de cellules adhérentes, les clones génétiquement modifiées, les cellules de neurosphères, de cultures primaires ou de tumeurs ventilées. Le type de modèle désiré définir l'emplacement le plus approprié de l'injection.
- Déterminer le nombre de cellules pour injection. Le nombre de cellules nécessaires pour ....
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Résultats
Xénogreffes intracrâniennes fiables peuvent être créés avec cette technique décrite. Identifier les structures critiques du crâne de la souris (figure 1) va permettre la reconnaissance de la bregma et guider le chercheur à un endroit précis de l'injection et reproductible. Dans ces études, la lignée parentale U251, cellules U251 transfectées avec la luciférase (U251-Luc), ou U87 immortalisé des cellules de culture de tissus GBM humains ont été suspendues en 4 à 6 pi de SF-DMEM et injecté 2,5 mm latéral .......
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Discussion
Des modèles de souris orthotopique de cancer du cerveau humain peut être un excellent outil pour évaluer l'efficacité des thérapies cliniques, mais des précautions doivent être prises pour optimiser le placement des cellules dans les tissus du cerveau. Des études ont montré que le volume des aliquotes excessives, la technique d'injection sous-optimale et des débits d'injection précipités peuvent conduire à une perméabilité et l'apparition de cellules tumorales dans des endroits indésirables (ventricules,.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à divulguer.
Remerciements
Dr Keating est financé par CA100335 de subvention DOD et est Boursier de la Fondation de la Saint-Baldrick.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Equipment | |||
| Instrument stéréotaxique pour petits animaux avec console d’affichage numérique | Kopf | Model 940 | |
| Mouse Gas Anesthesia Head Holder | Kopf | Model 923-B | |
| Mouse Ear Bars | Kopf | Medel 922 | |
| Illuminateur à fibre optique | Fisher | 12-562-36 | |
| UltraMicroPump III | WPI | UMP3 | |
| Microprocesseur Micro4 | WPI | UMC4 | |
| Perceuse rotative à main à vitesse variable | Dremel | Model 300 | |
| Mèche dentaire, 1,0 mm | 514554 | pulvérisation | |
| Adaptateur pour mèche dentaire : pince de serrage 3/32 pouce | Dremel | 481 | |
| Coussin | pour souris | ||
| vaporisation d’isoflurane | pour souris | ||
| Tubes et connecteurs | pour connecter le vaporisateur d’isoflurane avec cadre | ||
| Instruments | |||
| Precision 25 &mu ; l microseringue | Hamilton ; | 7636-01 | Modèle 702, sans aiguille |
| Aiguilles de microseringue, 26s G | Hamilton ; | 7804-04 | RN, pointe de 25 mm style 2 |
| Ciseaux à pointe fine (droits, tranchants/tranchants) | |||
| Ciseaux standard de taille moyenne Pince | |||
| dentelée standard | |||
| Hémostatiques dentelés (2) | |||
| Pince | |||
| Fournitures | |||
| Sutures 5-0 vicryl P-3 13 mm (Ethicon) | MWI | J463G | |
| Lames chirurgicales #10, inox (Feather) | Fisher | 296#10 | |
| Isoflurane (Fluriso) ; | VetOne ; | NDC 13985-528-60 | Article #502017. Anesthésique par inhalation de liquide. La loi fédérale restreint l’utilisation de ce médicament par ou sur l’ordre d’un vétérinaire agréé. |
| Carprofène (Rimadyl injectable 50 mg/ml) | Pfizer | NDC 61106-8507-01 | dilué dans une solution saline |
| Pommade ophtalmique (larmes artificielles) | Rugby | NDC 0536-6550-91 | |
| Antibiotique topique (AK-Poly-Bac) | Akorn | NDC 17478-238-35 | |
| Povidone iode antiseptique topique, 10 % (Bétadine) | Bétadine | NDC 67618-150-04 | |
| Peroxyde d’hydrogène, 30 % | Pêcheur | H325-100 | pour la visualisation des repères du crâne |
| Saline stérile | VetOne ; ; | NDC 13985-807-25 | pour les solutions de dilution, le nettoyage des tissus |
| Cire d’os | WPI | Article #501771 | |
| Champs stériles | McKesson | 25-517 | |
| Gants chirurgicaux stériles | McKesson | (sur mesure) | |
| Compresses de gaze stériles, 2 x 2 | Fisherbrand ; | ||
| Compresses de gaze stériles, 4 x 4 | Fisherbrand ; | 22-415-469 | |
| Tampons de préparation à l’alcool (moyen) | PDI | B603 | |
| Applicateurs stériles à embout de coton | Fisherbrand ; | 23-400-114 | |
| Tube stérile à bouchon à vis de 0,5 ml avec bouchons pour cellules | USA Scientific | 1405-4700 | pour cellules |
| Pipettes stériles à distribution Fisher | BD 357575 | pour solutions de nettoyage d’aiguilles | |
| BD Seringues à insuline avec aiguilles ; | Fisher | 329461 | pour analgésique |
| 70 % Éthanol | pour le nettoyage | ||
| DiH2O | pour le nettoyage | ||
| Tubes Microfuge pour solutions | nettoyage pour solutions de nettoyage d’aiguilles | ||
| Feutre (dédié) | pour le marquage du crâne | ||
Références
- Heyer, J., Kwong, L. N., Lowe, S. W., Chin, L. Non-germline genetically engineered mouse models for translational cancer research. Nature reviews. Cancer. 10, 470-480 (2010).
- Yamada, S., et al.
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Réimpressions et autorisations
