Les injections intraveineuses de souriceaux nouveau-nés

Summary

Les modèles animaux de la maladie pédiatrique peuvent éprouver précoce et la progression de la maladie agressive. Cliniquement l'administration du traitement pertinent de jeunes modèles de souris peut être techniquement difficile. Ce protocole décrit une méthode d'injection intraveineuse non-invasive pour les souris nouveau-nés dans les deux premiers jours après la naissance de la vie.

Abstract

L'injection intraveineuse est une manière cliniquement applicable à délivrer thérapeutique. Pour les rongeurs adultes et les grands animaux, des injections intraveineuses sont techniquement réalisables et routine. Toutefois, certains modèles de souris peuvent avoir l'apparition précoce de la maladie avec une progression rapide qui rend l'administration de thérapies potentielles difficile. La veine temporale (ou faciale) est juste en avant de l'oreille bourgeon chez la souris et est clairement visible pour les deux premiers jours après la naissance de chaque côté de la tête à l'aide d'un microscope à dissection. Au cours de cette fenêtre, la veine temporale peut être injecté avec des volumes allant jusqu'à 50 ul. L'injection est sûr et bien toléré par les deux petits et des barrages. Une procédure typique d'injection est achevé dans les 1-2 min, après quoi le chiot est renvoyée à la cage d'accueil. Le troisième jour après la naissance de la veine est difficile de visualiser et de la procédure d'injection devient techniquement fiables. Cette technique a été utilisée pour la livraison d'un virus adéno-associé (AAV) vectRUP, qui à son tour peut fournir, l'expression du transgène stable presque corps à l'échelle de la vie de l'animal en fonction du sérotype viral choisi.

Introduction

Livraison de médicaments pour le système nerveux central (SNC) dans des modèles murins de la maladie pédiatrique reste un défi. Les souris qui modèle états pathologiques nouveau-nés sont trop petits et des troubles de développement, et donc peut être difficile à injecter directement dans des structures appropriées au sein du CNS. Injection intravasculaire de produits thérapeutiques est une méthode bien toléré le non-invasive de produire des cellules, des médicaments ou des vecteurs viraux pour l'ensemble du corps, y compris le système nerveux central et de la rétine ^{1-5 3,5-9.} Publications antérieures décrivent injection visage de veine temporale en ut....

Protocol

Toutes les procédures décrites dans le protocole ont été approuvés Institut pour l'utilisation des animaux et du Comité de protection (IACUC) de l'Université d'État de l'Ohio.

1. Préparation de l'espace de travail

1. Rassemblez glace humide pour anesthésier les souriceaux, une cage vide pour séparer le barrage de la litière, un microscope de dissection, une source de lumière qui peut être positionné à un angle à l'injection (utilisation d'une source lumineuse à un 90 °   angle au site d'injection obscurcit la veine), une surface propre à placer l'animal pour l'injection, des ....

Results

Lors d'une injection correcte, la veine doit momentanément tourner clair, ou blanchir. Si l'injection de colorant l'ensemble du chiot doit virer au bleu en quelques secondes. Si une injection incorrecte a eu lieu, il ya souvent un bolus sous-cutané concentré dans la tête ou du cou et injectant peut fuir du site d'injection. Injections inappropriées peuvent également entraîner l'apparition d'ecchymoses autour de la gorge. Les chiots qui reçoivent des injections sous-cutanées (par exemple l'injection n'a pas été .......

Discussion

Livraison intravasculaire de produits à la CSN ou dans tout le corps est difficile dans les modèles murins de la maladie néonatale. Le protocole décrit est un moyen rapide, relativement non invasive à administrer par voie intraveineuse à des souris nouveau-né solutions avec les besoins en équipement minimum. Bien que le visage veine temporale peut être vu par l'œil nu, les injections peuvent avoir une plus grande précision à l'aide du microscope et la source lumineuse à fibre optique, en particulier pour un inje.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Seringue à insuline Thinpro	Terumo	SS30M3009	3/10 cc, aiguille 3/8", 30 G, 1 par souris
Colorant bleu Evans	Sigma-Aldrich	E2129	Diluer à 1 % avec 1x applicateurs à pointe de coton salin tamponné au phosphate
	Fisher Scientific	23-400-101
Source lumineuse à fibre optique	Fisher Scientific	12-562-36
Dissection microscope