Les injections intraveineuses de souriceaux nouveau-nés
Summary
Les modèles animaux de la maladie pédiatrique peuvent éprouver précoce et la progression de la maladie agressive. Cliniquement l'administration du traitement pertinent de jeunes modèles de souris peut être techniquement difficile. Ce protocole décrit une méthode d'injection intraveineuse non-invasive pour les souris nouveau-nés dans les deux premiers jours après la naissance de la vie.
Abstract
L'injection intraveineuse est une manière cliniquement applicable à délivrer thérapeutique. Pour les rongeurs adultes et les grands animaux, des injections intraveineuses sont techniquement réalisables et routine. Toutefois, certains modèles de souris peuvent avoir l'apparition précoce de la maladie avec une progression rapide qui rend l'administration de thérapies potentielles difficile. La veine temporale (ou faciale) est juste en avant de l'oreille bourgeon chez la souris et est clairement visible pour les deux premiers jours après la naissance de chaque côté de la tête à l'aide d'un microscope à dissection. Au cours de cette fenêtre, la veine temporale peut être injecté avec des volumes allant jusqu'à 50 ul. L'injection est sûr et bien toléré par les deux petits et des barrages. Une procédure typique d'injection est achevé dans les 1-2 min, après quoi le chiot est renvoyée à la cage d'accueil. Le troisième jour après la naissance de la veine est difficile de visualiser et de la procédure d'injection devient techniquement fiables. Cette technique a été utilisée pour la livraison d'un virus adéno-associé (AAV) vectRUP, qui à son tour peut fournir, l'expression du transgène stable presque corps à l'échelle de la vie de l'animal en fonction du sérotype viral choisi.
Introduction
Livraison de médicaments pour le système nerveux central (SNC) dans des modèles murins de la maladie pédiatrique reste un défi. Les souris qui modèle états pathologiques nouveau-nés sont trop petits et des troubles de développement, et donc peut être difficile à injecter directement dans des structures appropriées au sein du CNS. Injection intravasculaire de produits thérapeutiques est une méthode bien toléré le non-invasive de produire des cellules, des médicaments ou des vecteurs viraux pour l'ensemble du corps, y compris le système nerveux central et de la rétine 1-5 3,5-9. Publications antérieures décrivent injection visage de veine temporale en utilisant un transilluminateur 10,11, sans un microscope de dissection 11,12, ou nécessitant deux personnes à injecter 10. La technique d'injection décrite dans le présent protocole est avantageuse car une seule personne peut injecter chiots, et la source de lumière pour voir la veine temporale ne touche pas le chiot, éliminant le besoin de ruban adhésif chirurgical ou la fixation d'un chiot à une surface fixecomme un transilluminateur 11. Livraison de adéno-associé de sérotype 9 vecteur viral (AAV9) chez la souris produit une expression robuste dans les neurones et les astrocytes dans le cerveau et la moelle épinière (Figure 1). Livraison intravasculaire de vecteurs viraux dans la veine temporale superficielle du visage a été utilisé de manière fiable dans diverses études chez la souris néonatale pour traiter le trouble neuromusculaire pédiatrique amyotrophie spinale (SMA) 2,4,13,14 et finalement augmenté la durée de vie des souris traitées.
L'injection intravasculaire de souris néonatales vise aussi efficacement le système nerveux périphérique et les organes périphériques (Figure 2). Après l'injection de l'AAV, la transduction des ganglions de la racine dorsale, le foie, le cœur, le muscle squelettique, du poumon et du plexus myentérique de l'intestin a été observé 1,3,6,7,15. Transduction généralisée du SNC et la périphérie rend cette méthode d'idéal d'injection pour les maladies nécessitant une expression globale deun transgène, comme la maladie et 16 autres lysosomales les maladies de Gaucher 17,18, la maladie de Batten et ceroid lipofuscinoses neuronales connexes, 19 et syndrome de Bardet-Biedl, une maladie génétique multisystémique avec apparition des symptômes qui se produisent dans la petite enfance 20. L'injection intravasculaire dans des souris nouveau-né doit également être considérée comme une nouvelle méthode de maladies pédiatriques de l'ensemble du système de modélisation. Cette technique a été traduit en plus grands modèles animaux 5,21 et injection intravasculaire existe déjà comme une méthode cliniquement acceptable de fournir des traitements.
Le protocole actuel décrit une méthode simple, efficace d'agents à des souris néonatales fournir par le superficiel visage temporelle veine plus tard postnatal jour 2. Injection peut être complété par un seul individu pratiqué et est bien toléré par les deux petits et des barrages. Les chiots de détresse est minime et se rétablissent rapidement. ImportanTLY, injection réussie se traduira par la livraison globale de l'agent administré. Ce protocole est approprié pour la livraison de vecteurs viraux, les agents pharmaceutiques ou des cellules à des souris nouveau-nés.
Protocol
Representative Results
Discussion
Livraison intravasculaire de produits à la CSN ou dans tout le corps est difficile dans les modèles murins de la maladie néonatale. Le protocole décrit est un moyen rapide, relativement non invasive à administrer par voie intraveineuse à des souris nouveau-né solutions avec les besoins en équipement minimum. Bien que le visage veine temporale peut être vu par l'œil nu, les injections peuvent avoir une plus grande précision à l'aide du microscope et la source lumineuse à fibre optique, en particulier…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier le NINDS, FightSMA, et les familles de SMA pour un soutien financier. SEGL est pris en charge par la formation NINDS subvention # 5T32NS077984-02.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Thinpro Insulin Syringe | Terumo | SS30M3009 | 3/10cc, 3/8" needle, 30G, 1 per mouse |
| Evans Blue Dye | Sigma-Aldrich | E2129 | Dilute to 1% with 1X Phosphate Buffered Saline |
| Cotton Tipped Applicators | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Fiber Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Dissecting Microscope |
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