Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Évaluation de la viabilité de la graisse humaine injection dans des souris nude avec Micro-tomodensitométrie

10.9K vues

⸱

DOI :

10.3791/52217

⸱

7 janvier 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

La greffe de graisse est une technique essentielle pour reconstruire les déficits des tissus mous. Cependant, il s’agit d’une procédure imprévisible caractérisée par une survie variable du greffon. Notre objectif était de concevoir un modèle de souris qui utilise une nouvelle méthode d’imagerie pour comparer la rétention de volume entre différentes techniques de préparation et d’administration de greffes de graisse.

Résumé

Lipotransfer est un outil essentiel dans l'arsenal du chirurgien pour le traitement des déficits de tissu mou dans le corps. La graisse est la charge idéale des tissus mous car il est facilement disponible, facile à obtenir, peu coûteux, et intrinsèquement biocompatible. 1 Toutefois, malgré sa popularité en plein essor, la greffe de graisse est entravée par des résultats imprévisibles et la survie du greffon variable, taux de rétention publiés variant entre 10 -80%. 3/1

Pour faciliter les enquêtes sur la greffe de graisse, nous avons donc mis au point un modèle animal qui permet une analyse en temps réel de la rétention de volume graisse injectée. En bref, une petite incision est faite dans le cuir chevelu d'une souris CD-1 nu et 200 à 400 ul de lipoaspirat traité est placé sur le crâne. Le cuir chevelu est choisi comme site receveur en raison de son absence de graisse sous-cutanée d'origine, et en raison de l'excellent contraste de fond fourni par le calvarium, qui aide àle processus d'analyse. Tomographie micro-ordinateur (micro-CT) est utilisé pour balayer la greffe au départ et toutes les deux semaines par la suite. Les images TDM sont reconstruits, et un logiciel d'imagerie est utilisé pour quantifier les volumes greffés.

Traditionnellement, les techniques pour évaluer le volume de greffe de graisse ont nécessité euthanasier l'animal d'étude pour fournir simplement une évaluation unique de poids de greffe et le volume par mesure physique ex vivo. Comparaisons biochimiques et histologiques ont également requis l'animal d'étude pour être euthanasié. Cette technique d'imagerie décrit offre l'avantage de visualiser et de quantifier objectivement volume à de multiples points de temps après la greffe initiale sans avoir à sacrifier l'animal de l'étude. Cette technique est limitée par la taille de la greffe pouvant être injecté comme les greffes de peau plus grands risques et nécrose de graisse. Cette méthode a une utilité pour toutes les études évaluant la viabilité de la greffe de graisse et la rétention de volume. Il est particulièrement bien adapté à providing une représentation visuelle de greffe de graisse et à la suite des changements de volume au fil du temps.

Introduction

Les défauts des tissus mous résultent de diverses causes, notamment les traumatismes, la résection tumorale, le vieillissement et l’anomalie congénitale. Ils peuvent être débilitants pour les patients et représentent l’un des problèmes les plus courants, mais aussi les plus difficiles pour les chirurgiens reconstructeurs. De nombreuses méthodes existent pour traiter les carences des tissus mous, telles que les lambeaux locaux et libres, les injections de collagène et les charges synthétiques. 4-8 Cependant, depuis sa première utilisation documentée par Neuber en 18931, le transfert de graisse autologue reste l’étalon-or pour la réparation des déf....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

REMARQUE: Les protocoles expérimentaux et les formulaires de consentement des patients pour obtenir la graisse ont été examinés et approuvés par le Conseil de l'Université Stanford examen institutionnel (Protocole N ° 2188). Toutes les procédures d'animaux ont été approuvés par la commission administrative sur Stanford Laboratoire de protection des animaux (APLAC) en vertu du protocole # 9999. Toutes les expériences ont été menées dans le strict respect de la sécurité des animaux et des lignes directrices de soins humanitaires.

1. Fat récolte

  1. En utilisant la procédure Coleman 17-19, obtenir des tissus adipeux....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Greffe de graisse progressivement diminué en volume sur le cours de l'étude, résultant de la survie moyenne de 62,2% par semaine 8. (figure 4A) 24 À la fin de l'analyse Semaine 8, chaque greffe de graisse a été extrait en une seule pièce. Un test rang Wilcoxan somme a été utilisée pour comparer la différence entre les mesures de volume de greffe de graisse obtenus soit par micro-CT ou calculées de la masse physique. Aucune différence significative n'a été observée entre ces deux méthodes .......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

Jusqu'à ce point, la plupart des chercheurs se sont appuyés sur les modalités non-imagerie pour quantifier la survie à long terme de la greffe de graisse, mais ces méthodes nécessitent le sacrifice de l'animal de l'étude et produire une seule mesure. 3,10-12 Notre étude représente une méthode d'analyse qui permet une meilleure objectif, la quantification en temps réel de la survie du greffon de graisse dans un modèle de souris.

Critique dans ce processus est de se .......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

Aucun des auteurs n’a d’intérêt financier concurrent à signaler.

Remerciements

Cette étude a été soutenue par la Fondation Oak, le Laboratoire Hagey for Pediatric médecine régénérative, et l'Institut national de la santé, subventions NIHR21DE019274, NIHR01DE019434, NIHR01DE021683 et NIHU01HL099776 à MTLDCW a été soutenu par la bourse de recherche ACS Franklin H. Martin Faculté, le Hagey Laboratoire de médecine régénérative pédiatrique, et la Faculté Scholar Award Child Health Research Institute de l'Université de Stanford. Micro-CT a été menée au Centre de Stanford pour l'innovation en imagerie in vivo.

....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
à lipoaspiration
Beckman Coulter, Inc., Pasadena, CA
Tubes coniques de 50 mlBD Biosciences, San Jose, CA
Souris nues CD-1 (Crl :CD1-Foxn1nu)Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA
IsofluraneHenry Schein, Dublin, OH
2,5 % de bétadinePurdue Pharma, L.P., Stamford, CT
Solution d’éthanol à 70 %  ;Gold Shield, Hayward, CA
Seringue luer-lock 1ccBD Biosciences, San Jose, CA
Canule de calibre 14Shippert Medical, Centennial, CO
ForcepsFine Science Tools, Heidelberg, Allemagne
Ciseaux de ténotomieFine Science Tools, Heidelberg, Allemagne
Suture en nylon 6-0Ethicon, Blue Ash, OH
Saline tamponnée au phosphateGibco, Carlsbad, CA
microscope micro-CT  ;Siemens Healthcare, Pleasanton, Californie
Phantom  ;TriFoil Imaging, Northridge, CA
Logiciel d’analyse d’imagerieIRW, Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Scale  ;Mettler-Toledo International, Inc., Columbus, OH
Centrifugeuse SAL

Références

  1. Gir, P., et al. Fat grafting: evidence-based review on autologous fat harvesting, processing, reinjection, and storage. Plast Reconstr Surg. 130 (1), 249-258 (2012).
  2. Kaufman, M. R., et al.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Explorer plus d’articles

Greffe de graisseMicro-CTrétention volumétriquesurvie du greffontraitement du lipoaspiratinjection dans le cuir cheveluanalyse d'imagerieévaluation histologiqueévaluation de la viabilité