光化学誘起後方虚血性視神経障害のラットモデル
Summary
このプロトコルの目的は、光化学ラットにおける後部視神経に虚血損傷を誘導することです。このモデルは、後部の虚血性視神経症の病態生理学の研究、およびこれと他の視神経障害のためだけでなく、他のCNSの虚血性疾患の治療的アプローチに重要です。
Abstract
後方虚血性視神経症（パイ中間子）は、臨床診療における視覚壊滅的な疾患です。しかし、その病因と自然史はあまり理解残っていました。最近、我々は、パイ中間子の信頼性、再現可能な動物モデルを開発し、このモデル1のいくつかの神経栄養因子の治療効果を試験しました。このビデオの目的は、後部虚血性視神経障害の我々の光化学的誘発モデルを実証するために、および網膜神経節細胞の逆行性標識して、その効果を評価することです。後部視神経、光増感色素、エリスロシンBの外科的露出の後に、静脈内に注入されたレーザ光は、視神経の表面上に集束されます。血小板血栓症および浮腫性圧縮によって媒介微小血管閉塞を促すエリスロシンBと照射損傷時のレーザ血管内皮の光化学的相互作用、。結果として虚血性傷害は緩やかなもののpronouncをもたらしますリモート、損傷誘導と臨床的に関連する結果 – 軸索入力の喪失に起因して、網膜神経節細胞の枯死を編。したがって、このモデルは、パイ中間子の病態生理学的経路を研究するための新規のプラットフォームを提供し、さらに、視神経症、ならびに他のCNSの虚血性疾患の治療アプローチを試験するために最適化することができます。
Introduction
50歳以上の患者では、虚血性視神経症（ION）は、急性視神経2の最も一般的なタイプです。条件は、特定の影響を受けた血液供給および臨床プレゼンテーションのソースに応じて2つのサブタイプの一つとして提示することができます：前方（AION）または後部（パイオン）3。 AIONの病因とコースが広く4-7研究されてきたが、パイ中間子が不十分、その低い有病率、変数プレゼンテーション、不明確な診断基準と動物モデルの不足のために理解し続けています。また、何の治療が効果的に防止またはAIONやパイオンから失明を逆転することが証明されていません。したがって、パイ中間子の再現性と信頼性の高い動物モデルは、in vivoでの疾患プロセスを研究し、神経保護および軸索再生のための新しい治療法をテストするために非常に価値があります。
光化学vasogその結果微小血管系への虚血性損傷を誘発しましたENIC浮腫および血栓症を効果的に地域の組織虚血8-12を作成します 。血管循環系に注入した後、感光性色素エリスロシンBは、標的血管のレーザー照射による活性化の際に反応性一重項酸素分子を生成します。一重項酸素は、直接血小板の接着/凝集を刺激し、血栓形成を閉塞性につながる、血管内皮をperoxidizes。虚血性損傷は、近隣地域に広がり、さらにによる血管原性浮腫に微小血管の圧縮によって悪化します。このプロトコルの全体的な目標は、光化学パイ中間子による被害をミラーリングするために球後視神経に虚血を誘導することです。
我々の知る限り、これは後部視神経1における虚血性傷害の最初のモデルです。物理的な外傷を回避しながら、このモデルは虚血を生成するように、後部の虚血性視神経症の生理学的プロセスは、より良い模倣と検討されています。また、このモデルでは、視神経障害および他のCNS虚血性疾患の候補治療薬のスクリーニングのための新たなプラットフォームを提供しています。ここで、ラットパイオンモデルにおける大腿静脈カテーテル、視神経曝露、エリスロシンBの静脈内注射とレーザー照射のための詳細な手順を説明します。
Protocol
Representative Results
Discussion
Here we describe in detail a method for inducing PION in a rat model. The most critical part of the protocol is the exposure and irradiation of the optic nerve – to expose the nerve as long as possible while avoiding damage caused by the sharp fine tip forceps or from stretching. In rats, the ophthalmic artery enters the optic nerve ≤1 mm from the optic nerve head. Therefore, irradiation of the optic nerve 3-4 mm away from the optic nerve head should only result in ischemia of the capillaries feeding the nerv…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは、ビデオ編集のための畜産用Eleutヘルナンデス、顕微鏡の専門知識のためのゲイブGaidosh、およびKhueトランとZhenyang趙にお世話になっています。国立眼研究所によって資金を供給されたこの研究は、UMにUCSDとEY014801にJLGとP30の助成金EY022589にR01-EY022129を付与。米国心臓協会、ジェームズとエスター王財団、復旦大学大学院の博士課程の学生交流プログラム基金（第2010033）、及び失明防止社への調査から無制限の助成金
Materials
| 532-nm Nd:YAG laser | Laser glow | LRS-532-KM-200-3 | |
| Beam chopper | custom-made | custom-made | |
| Mechanical shutter and corresponding shutter drive timer | AAM Vincent Associates | SD-10 | |
| 25-cm focal length spherical lens | CVI/Mellles-Griot | 01 LPX 293 | plano-convexBK7 glass lens with HEBBARTM antireflection coating |
| Erythrosin B | MP Biomedicals | 190449 | |
| Fluorogold | Fluorochrome,LLC | ||
| Gelfoam | Cardinal Health | CAH1203421 | |
| Polyethylene tubing (PE10) | BD Intramedic | 427400 | |
| No. 10 Blade | Miltex | 4-110 | |
| Fine Forceps | F.S.T. | 91150-20 | DUMONT #5 RUSTLESS NON-MAGNETIC |
| Forceps with Teeth | F.S.T. | 11153-10 | Germany stainless |
| Forceps | F.S.T. | 18025-10 | Germany stainless |
| Vannas spring scissors | F.S.T. | 2-220 | JJECK Stainless |
| Polyglactin suture | Ethicon | J488G | 7-0 suture |
| hemostat | F.S.T. | 12075-12 | Germany stainless |
References
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