Deux photons Imaging of Cellular Dynamics dans la moelle épinière de souris

Jason G. Weinger; Milton L. Greenberg; Melanie P. Matheu; Ian Parker; Craig M. Walsh; Thomas E. Lane; Michael D. Cahalan

doi:10.3791/52580

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Article de méthode

Deux photons Imaging of Cellular Dynamics dans la moelle épinière de souris

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DOI :

10.3791/52580

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22 février 2015

Jason G. Weinger¹ , Milton L. Greenberg² , Melanie P. Matheu⁴ , Ian Parker³ , Craig M. Walsh¹ , Thomas E. Lane⁵ , Michael D. Cahalan²

¹Molecular Biology and Biochemistry, University of California, Irvine, ²Physiology and Biophysics, University of California, Irvine, ³Neurobiology and Behavior, University of California, Irvine, ⁴University of California San Francisco Diabetes Center, University of California, San Francisco, ⁵Pathology, University of Utah

Dans cet article

Résumé

Une nouvelle préparation ex vivo pour l'imagerie de la moelle épinière de souris. Ce protocole permet l'imagerie à deux photons d'interactions cellulaires vivants tout au long de la moelle épinière.

Résumé

La microscopie à deux photons (2P) est utilisée pour révéler la dynamique cellulaire et les interactions profondes dans les tissus vivants et intacts. Ici, nous présentons une méthode d’imagerie de cellules vivantes dans la moelle épinière murine. Cette technique est particulièrement adaptée pour analyser la dynamique des cellules précurseurs neurales (NPC) après une transplantation dans la moelle épinière souffrant de troubles démyélinisants neuro-inflammatoires. Les NPC migrent vers les sites de lésions axonales, prolifèrent, se différencient en oligodendrocytes et participent à la remyélinisation directe. Les NPC constituent donc un traitement thérapeutique prometteur pour améliorer les maladies démyélinisantes chroniques. Étant donné que les NPC transplantés migrent vers les zones endommagées de la face ventrale de la moelle épinière, l’imagerie intravitale 2P traditionnelle est impossible, et seules les informations sur les interactions statiques étaient auparavant disponibles en utilisant les approches de coloration histochimique. Bien que cette méthode ait été générée pour imager des NPC transplantés dans la moelle épinière ventrale, elle peut être appliquée à de nombreuses études de cellules transplantées et endogènes dans toute la moelle épinière. Dans cet article, nous démontrons la préparation et l’imagerie d’une moelle épinière avec des axones exprimant des protéines fluorescentes jaunes améliorées et des NPC transplantés exprimant des protéines fluorescentes vertes améliorées.

Introduction

Des modèles murins de démyélinisation, y compris l'encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) et l'infection par le virus intracrânienne neuroadapted de l'hépatite de la souris (MHV), sont d'excellents outils pour étudier les voies moléculaires et interactions cellulaires associés à la maladie. Ils ont mené et soutenu l'efficacité des thérapies pharmaceutiques approuvé par la FDA, ciblant principalement la cessation de l'auto-immunité et l'inflammation ^1. Cependant, une fois la remyélinisation endogène a échoué, les thérapies actuellement approuvés ne réparent pas efficacement les lésions démyélinisées dans le système nerv....