عزل خلايا الإنسان اللمفاوي البطانية التي كتبها متعدد المعلمة تنشيط الإسفار الفرز خلية
Summary
والهدف من هذا البروتوكول هو عزل الخلايا البطانية المبطنة اللمفاوية تشوه اللمفاوي السفن وغلفة مثل الكيس البشرية باستخدام الخلايا مضان تنشيط الفرز (FACS). زراعة الخلايا اللاحقة والتوسع في هذه الخلايا تسمح مستوى جديد من التطور التجريبي للدراسات الجينية، البروتين والفنية وتمايز الخلايا.
Abstract
اضطرابات الجهاز اللمفاوي مثل وذمة لمفية الأولية، والتشوهات اللمفاوية وأورام اللمفاوية هي الحالات النادرة التي تسبب اعتلال كبير ولكن لا يعرف الكثير عن علم الأحياء الخاصة بهم. ان عزل خلايا نقي للغاية الإنسان اللمفاوية البطانية (موظفين المدنيين المحليين) من الأنسجة المريضة والسليمة تسهيل الدراسات البطانة اللمفاوية عند مستويات الوراثية، الجزيئية والخلوية. ومن المتوقع أن هذه التحقيقات قد تكشف عن أهداف لعلاجات جديدة يمكن أن تغير الإدارة السريرية لهذه الشروط. ويرد بروتوكول يصف عزل القلفة البشرية موظفين المدنيين المحليين وتشوه اللمفاوي الخلايا البطانية اللمفاوية (LM موظفين المدنيين المحليين). للحصول على ومفروم واحدة الأنسجة تعليق خلية وتعامل إنزيمي استخدام dispase الثاني وكولاجيناز II. ثم وصفت مما أدى تعليق خلية واحدة مع الأجسام المضادة لمجموعة من التمايز (CD) علامات CD34، CD31، الأوعية الدموية غشائي عامل نمو 3 (VEGFR-3) وPODOPLANIN. STAIتم فرز خلايا قابلة للحياة نيد على فارز خلية تنشيط fluorescently (FACS) لفصل CD34 CD31 منخفضة نقاط البيع VEGFR-3 نقاط البيع PODOPLANIN نقاط البيع LM LEC السكان من البطانية وغيرها من الخلايا غير البطانية. وLM موظفين المدنيين المحليين مرتبة كانت مثقف وتوسعت في قوارير فبرونيكتين المغلفة للاستخدام مزيد من التجارب.
Introduction
وثمة وظيفة رئيسية من الأوعية الدموية اللمفية هي لاستيعاب الليمفاوية، وهو السائل الخلالي الزائد تحتوي على الدهون والبروتينات والمكونات الخلوية، وإجراء ذلك إلى الجهاز الوريدي الدم. وهناك شبكة من الشعيرات الدموية الليمفاوية توجه الليمفاوية إلى الغدد الليمفاوية حيث يتم عرض الفيلم لوجود مستضدات الخارجية، وهي عملية هامة في مراقبة المناعة ونشر خلايا الدم البيضاء لتحييد المستضدات الأجنبية.
يبدأ الجهاز اللمفاوي أحادي الاتجاه في الأنسجة مع الشعرية اللمفاوي الأولي، بنية فريدة من نوعها مع طبقة واحدة متقطعة من الخلايا البطانية مسطحة رقيقة الجدران مع تقاطعات الخلية المتخصصة التي تسمح دخول الليمفاوية 1،2. وترد هذه الشعيرات الدموية إلى المصفوفة النسيج الضام المجاورة عبر ترسيخ خيوط لمنع انهيار سفينة في وجود زيادة الضغط الخلالي 3. الشعيرات الدموية اللمفاوية الأولية فارغة إلى جمع الشعيرات الدموية اللمفاويةأن تتجمع في الأوعية الليمفاوية أو الأوردة الكبيرة. مقارنة المبدئي السفن الشعرية اللمفاوية، وجمع الأوعية اللمفاوية لها جدران الأوعية سمكا، والصمامات اللمفاوية تقرن والمغطى من قبل الغشاء القاعدي متقطع التي هي جزء لا يتجزأ بضع خلايا العضلات الملساء 4. افتتاح منسق وإغلاق الصمامات اللمفاوية وانكماش خلايا العضلات الملساء يسهل تدفق الليمفاوية 3. في البشر، والأوردة الليمفاوية من مناطق مختلفة من الجسم الانضمام لتشكيل جذوع اللمفاوية التي الاندماج لتكوين اثنين من القنوات اللمفاوية: القناة الصدرية والقناة اللمفية اليمنى. القناة الصدرية يستنزف الليمفاوية من الجانب الأيسر من الجسم ومن الجانب الأيمن تحت الصدر في حين أن الصحيح اللمفاوي تستنزف القناة الليمفاوية من الذراع الأيمن والجانب الأيمن من الرأس والعنق والصدر. كلا القنوات الليمفاوية تجري في عروق تحت الترقوة في الرقبة 5.
يتم تجميع اضطرابات في الجهاز الليمفاوي على نطاق واسع في اكتسبتالثاني الخلقية (الجدول 1). أمثلة للظروف التي حصلت هي التهاب الأوعية اللمفاوية وذمة لمفية ثانوية. التهاب الأوعية اللمفاوية هو التهاب سفينة اللمفاوية بسبب عدوى بكتيرية. الأوعية اللمفاوية المصابة تمدد وملء مع الافرازات التي تحتوي على خلايا النوى. في الجلد، وهذه الأوعية اللمفاوية واضحة كما أحمر، والشرائط تحت الجلد المؤلم كثيرا ما يكون مصحوبا توسيع استنزاف العقدة الليمفاوية المرتبطة بها (الغدد الليمفاوية) 6. تنشأ وذمة لمفية ثانوية نتيجة وقوع اضرار او عرقلة لاللمفاوية سفينة أو العقدة الليمفاوية انسداد. وهذا يؤدي إلى تورم التدريجي المزمن بسبب تراكم الليمفاوية البعيدة للضرر أو إعاقة. في البلدان المتقدمة، ويرتبط وذمة لمفية ثانوية الأكثر شيوعا مع الخباثة حيث تعرقل الأورام المتفاقمة الأوعية اللمفاوية أو الغدد الليمفاوية الإقليمية، أو نتيجة للعلاج مضاد للسرطان عقب الاستئصال الجراحي للالغدد الليمفاوية، والتليف بعد التشعيع وthrom آخر للالتهاباتbosis وتندب 7. في أجزاء أخرى من العالم، قد تكون وذمة لمفية ثانوية الثانوية لعرقلة اللمفاوية التي تسببها الديدان الطفيلية مثل الفخرية البنكروفتية 6.
| اضطرابات في الأوعية الدموية اللمفية | |||
| مكتسب | خلقي منذ الولادة | ||
| العقد اللمفية وذمة لمفية ثانوية | وذمة لمفية الابتدائية 10 | متفرقة تشوهات اللمفاوي 13 | اللمفاوية التشوهات المصاحبة المتلازمات 13 |
| على سبيل المثال ميلروي متلازمة ميج متلازمة | بسيطة: التشوهات اللمفاوية | على سبيل المثال كليبل-Tranaunay متلازمة الحدائق ويبر متلازمة متلازمة ستيرج ويبر | |
| جنبا إلى جنب: التشوهات-الشعرية اللمفاوي تشوه الشعرية-اللمفاوية-وريدي تشوه الشعرية-اللمفاوية-الشرايين والأوردة الشعرية-اللمفاوي تشوه وريدي شرياني- | |||
الجدول 1. نظرة عامة على اضطرابات الأوعية الدموية اللمفية.
وتشمل الاضطرابات الخلقية من الجهاز اللمفاوي الابتدائية (مجهول السبب) وذمة لمفية يعتقد أن سببها الطفرات الجينية، توسع الأوعية اللمفية والشذوذ من 8،9 الجهاز اللمفاوي. وذمة لمفية الأولية يمكن أن يكون متقطعا المفترض أنها ناتجة عن دي نوفو الطفرات، أو الموروثة. يمكن أن الاضطرابات اللمفاوية أيضا أن تكون معزولة أو تشمل جزءا من متلازمة أكثر عمومية 10. في عدد من الأطفال و 97٪ من الليمفاويةوذمة غير متقطعة مع تشوهات في الهيكل السفينة اللمفاوية التي تعيق الليمفاوية الإقليمي الصرف 11. مرض ميلروي مثال على ذمة لمفية الأولية الناجمة عن طفرة في الجين VEGFR-3 واضحا عند الولادة أو بعد وقت قصير من 12. على الرغم من حالة معظمها العائلية، كما يمكن التعرف على المرض ميلروي في الرضع دون تاريخ عائلي من مرض ميلروي 32. شدة أي وذمة لمفية تعتمد على كمية الإنتاج الليمفاوية والقدرة على نقل الليمفاوية مرة أخرى إلى الدورة الدموية الوريدية 6.
بناء على الأعراض السريرية وخارج الموقع تكاثر الخلايا البطانية في، تصنف الحالات الشاذة من الجهاز اللمفاوي كما الأورام اللمفاوية أو تشوهات اللمفاوية 13. Kaposiform lymphangiomatosis مثال ورم LEC 14. ويعتقد أن التشوهات اللمفاوية أن تنشأ أثناء التطور الجنيني والنمو في نسبة للطفل 15،16. ونادرا ما تتراجع ولكن يمكن remaiن أعراض حتى الصدمة أو الإصابة رواسب النمو السريع مما يؤدي إلى مضاعفات السريرية. وزعزع هيكل منظم للشبكة اللمفاوية والتوصيل الليمفاوية من الأنسجة إلى الدورة الدموية الوريدية المذكورة أعلاه في تشوهات اللمفاوية التي تتكون من مجموعات المترجمة من الهياكل الكيسي غير طبيعية مليئة السائل اللمفاوي. في حين لا يوجد أي دليل سريري أو التجريبية التي ترتبط هذه السفن الكيسي إلى الدورة اللمفاوية أو أنها تحتوي على صمامات اللمفاوية وظيفية، وتأكيد هويتهم اللمفاوية التي كتبها التعبير عن مجموعة من علامات الخلية اللمفاوية مثل PODOPLANIN، CD31، اللمفاوي سفينة غشائي مستقبلات 1 (LYVE-1)، بروسبيرو homeobox البروتين 1 (PROX-1) وVEGFR-3 15،17،18. ويمكن لهذه الهياكل الكيسي يكون إما صغيرة (التكيسات الدقيقة) أو كبيرة (macrocystic)، ولكن معظم التشوهات الليمفاوية تحتوي على كل التكيسات الدقيقة والمكونات macrocystic (الشكل 1) 16. بعد الجراحة، injectioن الطب النفسي و / أو الترددات اللاسلكية التشوهات اللمفاوية غالبا ما تتكرر.
الشكل 1. مورفولوجية الأوعية اللمفاوية البشرية والتشوهات اللمفاوية. اللمفاوية الإنسان العادي (A) والأوعية اللمفاوية تشوه (B و C) المسمى مع الأجسام المضادة لPODOPLANIN (التسمية البني، السهم). وتتميز السفن تشوه اللمفاوية البشرية من خلال التوسع الملحوظ والتفاوت الكبير في حجم التجويف. ويمكن لهذه الهياكل الكيسي غير طبيعية محلية تكون إما صغيرة (التكيسات الدقيقة، *) (B) أو كبيرة (macrocystic، #) (C). معظم التشوهات الليمفاوية تحتوي على كل مكونات التكيسات الدقيقة وmacrocystic. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم. </ P>
وقد اقترح بعض الباحثين أن التشوهات الليمفاوية تمثل اضطراب النمو من الأوعية الدموية اللمفية التي موظفين المدنيين المحليين لا تملك إمكانات نمو غير طبيعي ولكن بدلا من ذلك فشلت في الاتصال التداول العادي 19. ومع ذلك، فقد وجدنا أن موظفين المدنيين المحليين LM تتكاثر بشكل أسرع وأكثر مقاومة للموت الخلايا المبرمج من القلفة موظفين المدنيين المحليين 15 مما يدل على أن هناك خلل أساسي في LM موظفين المدنيين المحليين. عندما يتم زرعها LM موظفين المدنيين المحليين في نموذج الفأر طعم أجنبي، فإنها تشكل هياكل تذكر من التشوهات اللمفاوية 15. وهذا يدعم فرضية أن التشوهات اللمفاوية قد يكون سبب واحد أو أكثر الطفرات الجسدية التي تنشأ في LM موظفين المدنيين المحليين أثناء التطور الجنيني. في الواقع، وقد حددت التقارير الأخيرة واحدة من هذه الطفرة في الوحيدات الحفاز p110α من فسفوإينوزيتيد-3-كيناز (PIK3CA) جين 20.
وبالنظر إلى التقدم في تكنولوجيا تسلسل الحمض النووي، والطفرات ذات الصلة جولد تحديدها بسهولة أكبر في معزولة LM موظفين المدنيين المحليين، وتوجيه الدراسات المستقبلية من هذه الشروط. ان عزل موظفين المدنيين المحليين قابلة للحياة تسهيل المقارنات بين موظفين المدنيين المحليين غير طبيعية وعادية في المقايسات مثل الهجرة، والانتشار، أنبوب تشكيل القدرة والبقاء على قيد الحياة في استجابة لانخفاض توافر المواد الغذائية أو العوامل المؤيدة لأفكارك 15. سوف موظفين المدنيين المحليين معزولة كذلك تمكننا من تنفيذ خلية محددة التعبير الجيني والدراسات البروتين، لتحديد الفئات السكانية LEC جديدة واكتشاف كلاء الدوائية الرواية مناسبة لإدارة السريرية للتشوهات اللمفاوية.
نشرنا سابقا طريقة عزل LEC على أساس الفصل المغناطيسي حبة من موظفين المدنيين المحليين من القلفة حديثي الولادة والتشوهات اللمفاوية 15. أبلغنا استراتيجية فصل موظفين المدنيين المحليين السليمة والمصابة من خلايا بطانة الأوعية الدموية على أساس عدم وجود CD34 التعبير، تليها إخضاع CD34 NEG جزء الخلية لاختيار إيجابية للCD31.ومع ذلك، وقد أعاق هذا الأسلوب من خلال وجود خلايا غير البطانية المتبقية. كان هذا مستقلة عن إزالة البشرة قبل لاحق الهضم النسيج الضام. انتشرت هذه الملوثات عادة بسرعة أكبر، وبالتالي overgrew في نهاية المطاف مزارع الخلايا البطانية على الرغم من المحاولات اللاحقة لتكرار LEC العزلة. في الواقع، كان تلوث الأولي من الخلايا غير البطانية منخفضة تصل إلى 2٪ إلى 5٪ كافية لتطغى على السكان LEC 15. ودفع هذا لنا لاستكشاف تنشيط الخلايا fluorescently فرز طريقة كخيار لتحسين LEC العائد الخلية والنقاء. بالإضافة إلى ذلك، كنا متعددة المعلمة الفرز لتعزيز خصوصية السكان LEC، مضيفا VEGFR-3 وPODOPLANIN إلى علامات التحديد إلى تحديد CD34 CD31 منخفضة نقاط البيع VEGFR-3 نقاط البيع PODOPLANIN نقاط البيع موظفين المدنيين المحليين.
واستند الأساس المنطقي لاختيار هذه العلامات على التقارير أنه في حين أن موظفين المدنيين المحليين والأوعية الدموية الدم البطانية مLLS دينا العديد من علامات سطح الخلية المشتركة مثل CD31، تظهر موظفين المدنيين المحليين التباين المظهري في التعبير عنها من CD34، PODOPLANIN وVEGFR-3 خلية علامة السطح بالمقارنة مع خلايا الدم بطانة الأوعية الدموية 21-23. CD31 هو بروتين سكري الغشاء 130 كيلو دالتون المعروف أيضا باسم الصفائح الدموية جزيء التصاق الخلايا البطانية 1 (PECAM-1). وهو يعتبر أن يكون علامة الخلية عموم البطانية منذ يتم التعبير عن ذلك على جميع أنواع الدم والأوعية اللمفاوية 21،24،25. CD34 هو 110 كيلو دالتون عبر الغشاء بروتين سكري موجودة على معظم السلف المكونة للدم والخلايا، وخلايا بطانة الأوعية الدموية وبعض الأوعية اللمفاوية 26 الجذعية.
VEGFR-3، ومستقبلات للنمو بطانة الأوعية الدموية عوامل C و D، هو في البداية موجودة على الأوردة النامية في جنين الفأر، ولكن المواصفات التالية اللمفاوية التي تنظمها النسخ العوامل المرتبطة SRY-HMG-مربع (SOX) -18، ج hicken س valbumin ش pstreaم ص ر romoter ranscription و الممثل 2 (COUPTF-II) وPROX-1، يتم فقدان VEGFR-3 التعبير الوريدي ويصبح مقتصرا على الجنينية موظفين المدنيين المحليين 25،27. PODOPLANIN، وهو غشاء كيلو دالتون 38 بروتين مخاطي، ويلاحظ أولا على الأوعية اللمفاوية في الجنينية تقريبا يوم 11 (~ E11.0) من الماوس التطور الجنيني 28 وبينما هو أعرب بقوة من قبل الاوعية الدموية الدقيقة الأوعية اللمفاوية، PODOPLANIN التعبير البطانة اللمفاوية macrocystic في تشوهات اللمفاوية هو أكثر متغير 15. التدفق الخلوي التجارب تشير إلى أن ما لا يقل عن بعض الخلايا البطانية CD34 CD31 العليا بوس تعبر عن علامة اللمفاوية PODOPLANIN 29. على الرغم من أن التقييم المنهجي للLYVE-1 وPODOPLANIN تلطيخ في تشوهات اللمفاوية البشرية أظهرت أن كلاهما فعال في تلطيخ اللمفاوية تشوه البطانة 30، في الأنسجة الطبيعية، أفيد LYVE-1 أن يكون حاضرا بقوة في اللمفاوية الأوليالبطانة الشعرية لكنها خفضت وحتى غائبة في البطانة اللمفاوية جمع 31. كما هدفنا هو عزل كل من الخلايا البطانية اللمفاوية الأولية وجمع اخترنا عدم استخدام LYVE-1 كجزء من استراتيجية اختيار خلية لدينا. أخيرا، واستند قرار لتوظيف هذه العلامات أيضا على توافر الأجسام المضادة التي تستخدم في التشخيص لوصفها الأوعية اللمفاوية للتصوير المجهري، وهي الميزة التي من شأنها أن تسمح العلاقة بين التدفق الخلوي والدراسات مناعي.
هذه المادة سوف يصف طريقة الهضم الأنسجة، وتلطيخ الخلايا وضبط FACS المطلوبة لعزل الناجحة لCD34 CD31 منخفضة نقاط البيع VEGFR-3 نقاط البيع PODOPLANIN نقاط البيع موظفين المدنيين المحليين وكذلك الخلايا البطانية CD34 CD31 العليا بوس VEGFR-3 نقاط البيع PODOPLANIN نقاط البيع من القلفة وتشوه اللمفاوي الأنسجة.
Protocol
Representative Results
Discussion
موظفين المدنيين المحليين تلعب دورا هاما في الحفاظ على توازن السوائل، والاستجابة المناعية لمستضدات الخارجية وامتصاص ونقل بعض المواد الغذائية. يمكن أن يتأثر توازن LEC من خلال عمليات المرض مثل الالتهابات البكتيرية والورم ورم خبيث، ولكن يمكن أن موظفين المدنيين المحليي?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أن نعترف مؤسسة بيكر و "النساء في زمالة العلوم" مؤسسة الملكي للأطفال بدعم من Zerina Lokmic. أندرو G. Elefanty وإدوارد G. ستانلي هي NHMRC كبار زملاء الأبحاث. وأيد العمل في المختبرات من قبل NHMRC والخلايا الجذعية أستراليا.
Materials
| Name of Material/Equipment | Company | Catalogue Number | Description |
| DMEM | Life Technologies (Gibco) | 11965-092 | Used to collect tissue samples from the operating theatre. |
| EGM-2 MV Bullet Kit | Lonza | CC-3202 | EGM-2 MV Bullet Kit contains 500 ml of EBM-2 media and human EGF, hydrocortisone, gentamycin (GA-1000), fetal bovine serum (FBS), VEGF, human FGF-b, R3-IGF-1 and ascorbic acid. |
| VEGF-C | R&D Systems | 2179-VC-025 | Complete endothelial cell media is supplemented with 50 ng/mL VEGF-C |
| Antibiotic-antimycotic solution (100x) | Life Technologies (Gibco) | 15240-062 | This solution contains 10,000U/ml of penicillin, 10,000 mg/ml of streptomycin and 25 mg/ml of Fungizone antimycotic. Use at 1:100 dilution. |
| Fibronectin from human plasma | Sigma-Aldrich | F2006 | Used at 10 mg/ml concentrations. It can be re-used for up to 1 month if kept at 4 degrees and maintained sterile. Use 7 mL to coat 150 cm2 flask. |
| StemPro Accutase Cell dissociation reagent | Life Technologies (Gibco) | A11105-01 | StemPro®Accutase® is used at 0.05 ml per cm2 to cover the entire surface area of the flask. Using lesser volumes may result in incomplete cell detachment. |
| 0.4% Trypan Blue dye | Life Technologies (Gibco) | 15250-061 | Used as a viability stain. |
| Dispase II | Roche Applied Biosciences | 4942078001 | Used at 0.04% |
| Collagenase II | Worthington Lab | 4176 | Used at 0.25% |
| DNase I | Roche Applied Biosciences | 11284932001 | Used at 0.01% |
| 70 mm nylon cell strainers | BD Falcon | 352350 | |
| PE-conjugated VEGFR-3 clone 9D9F9, clone WM59 | BioLegend | 356204 | Used at 1:50 dilution |
| PE-Cy7-conjugated CD34, clone 581 | BioLegend | 343516 | Used at 1:200 dilution |
| APC-conjugated mouse anti human CD31, clone WM59 | BioLegend | 303116, | Used at 1:100 dilution |
| Alexa 488-conjugated rat anti human PODOPLANIN, clone NC-80. | BioLegend | 337006 | Used at 1:200 dilution |
| PE-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21 | BioLegend | 400112 | Used at 1:50 dilution |
| PE-Cy7-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21 | BioLegend | 400126 | Used at 1:200 dilution |
| APC-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21 | BioLegend | 400120 | Used at 1:100 dilution |
| Alexa 488-conjugated mouse IgG2a, k isotype, clone RATK2758 | BioLegend | 400525 | Used at 1:200 dilution |
References
- Baluk, P., et al. Functionally specialized junctions between endothelial cells of lymphatic vessels. J Exp Med. 204 (10), 2349-2362 (2007).
- Yao, L. C., Baluk, P., Srinivasan, R. S., Oliver, G., McDonald, D. M. Plasticity of button-like junctions in the endothelium of airway lymphatics in development and inflammation. Am J Pathol. 180 (6), 2561-2575 (2012).
- Zawieja, D. C. Contractile physiology of lymphatics. Lymphat Res Biol. 7 (2), 87-96 (2009).
- Witte, M. H., et al. Structure function relationships in the lymphatic system and implications for cancer biology. Cancer Metastasis Rev. 25 (2), 159-184 (2006).
- Andrade, M., Jacomo, A. Anatomy of the human lymphatic system. Cancer Treat Res. 135, 55-77 (2007).
- Kumar, V., Abbas, A. K., Aster, J. C., Ch Fausto, N. . Cotran Pathologic Basis of Disease. 43-78. 2, (2009).
- Shayan, R., Achen, M. G., Stacker, S. A. Lymphatic vessels in cancer metastasis: bridging the gaps. Carcinogenesis. 27 (9), 1729-1738 (2006).
- . . Mulliken & Young’s Vascular Anomalies Hemangiomas and. , 1059-1076 (2013).
- . . Mulliken & Young’s Vascular Anomalies Hemangiomas. 14, 562-594 (2013).
- Bellini, C., Hennekam, R. C. Clinical disorders of primary malfunctioning of the lymphatic system. Adv Anat Embryol Cell Biol. 214, 187-204 (2014).
- Schook, C. C., et al. Primary lymphedema: clinical features and management in 138 pediatric patients. Plast Reconstr Surg. 127 (6), 2419-2431 (2011).
- Brouillard, P., Boon, L., Vikkula, M. Genetics of lymphatic anomalies. J Clin Invest. 124 (3), 898-904 (2014).
- . for the Study of Vascular Anomalies (ISSVA) classification. Available from: http://www.issva.org/classification.com. , (2014).
- Croteau, S. E., et al. Kaposiform lymphangiomatosis: a distinct aggressive lymphatic anomaly. J Pediatr. 164 (2), 383-388 (2014).
- Lokmic, Z., et al. Isolation of human lymphatic malformation endothelial cells, their in vitro characterization and in vivo survival in a mouse xenograft model. Angiogenesis. 17 (1), 1-15 (2014).
- Smith, R. J. Lymphatic malformations. Lymphat Res Biol. 2 (1), 25-31 (2004).
- Chen, E. Y., et al. Similar histologic features and immunohistochemical staining in microcystic and macrocystic lymphatic malformations. Lymphat Res Biol. 7 (2), 75-80 (2009).
- Norgall, S., et al. Elevated expression of VEGFR-3 in lymphatic endothelial cells from lymphangiomas. BMC cancer. 7 (2), 75-80 (2007).
- Garzon, M. C., Huang, J. T., Enjolras, O., Frieden, I. J. Vascular malformations. Part I. J Am Acad Dermatol. 56 (3), 353-370 (2007).
- Osborn, A., Dickie, P., Adams, D., Dickie, B. . 20th International workshop on Vascular Anomalies. ISSVA. , (2014).
- Baluk, P., McDonald, D. M. Markers for microscopic imaging of lymphangiogenesis and angiogenesis. Ann N Y Acad Sci. 1131, 1-12 (2008).
- Lokmic, Z., Mitchell, G. M. Engineering the microcirculation. Tissue engineering. Part B, Reviews. 14 (1), 87-103 (2008).
- Lokmic, Z., Mitchell, G. M. Visualisation and stereological assessment of blood and lymphatic vessels. Histol Histopathol. 26 (6), 781-796 (2011).
- Hagerling, R., et al. A novel multistep mechanism for initial lymphangiogenesis in mouse embryos based on ultramicroscopy. EMBO J. 32 (5), 629-644 (2013).
- Pollmann, C., Hagerling, R., Kiefer, F. Visualization of lymphatic vessel development, growth, and function. Adv Anat Embryol Cell Biol. 214, 167-186 (2014).
- Breiteneder-Geleff, S., et al. Angiosarcomas express mixed endothelial phenotypes of blood and lymphatic capillaries: podoplanin as a specific marker for lymphatic endothelium. Am J Pathol. 154 (2), 385-394 (1999).
- Kaipainen, A., et al. Expression of the fms-like tyrosine kinase 4 gene becomes restricted to lymphatic endothelium during development. Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (8), 3566-3570 (1995).
- Schacht, V., et al. T1alpha/podoplanin deficiency disrupts normal lymphatic vasculature formation and causes lymphedema. EMBO J. 22 (14), 3546-3556 (2003).
- Kriehuber, E., et al. Isolation and characterization of dermal lymphatic and blood endothelial cells reveal stable and functionally specialized cell lineages. J Exp Med. 194 (6), 797-808 (2001).
- Florez-Vargas, A., et al. Comparative analysis of D2-40 and LYVE-1 immunostaiing in lymphatic malformations. Lymphology. 41 (3), 103-110 (2008).
- Makinen, T., et al. PDZ interaction site in ephrinB2 is required for the remodeling of lymphatic vasculature. Genes Dev. 19 (3), 397-410 (2005).
- Connell, F. C., et al. Analysis of coding regions of VEGFR3 and VEGFRC in Milroy disese and other primary lymphoedemas. Hum Genet. 124 (6), 625-631 (2009).
