בידוד של תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם EAE
Summary
בסרטון הזה אנחנו מדגימים כיצד לבודד תאים mononuclear ממערכת העצבים המרכזית של חולדות עם Encephalomyelitis אוטואימונית ניסיונית.
Abstract
אם לומד מחלה אוטואימונית מכוונת למערכת העצבים המרכזית (CNS), כגון Encephalomyelitis אוטואימונית ניסויית (EAE, 1), או את התגובה החיסונית לזיהום של מערכת העצבים המרכזית, כגון שיתוק ילדים, ליים neuroborreliosis, או הנאורוסיפיליס, היא לעתים קרובות יש צורך לבודד את CNS-הסתננות תאים חיסוניים.
בפרוטוקול-video זה אנו מדגימים כיצד לבודד תאים mononuclear (MNCs) של מערכת העצבים המרכזית של עכבר עם EAE. השלב הראשון של הליך זה דורש זלוף הלב של מכרסם עם מלוחים פתרון על מנת להבטיח כי לא נשאר דם בכלי הדם להשקיית העצבים המרכזית. כל זיהום דם מלאכותי יהיה להגדיל את מספר ניכר CNS-הסתננות MNCs ועשויים לשנות את הרכב לכאורה של החיסון לחדור. לאחר מכן, אנו מדגימים כיצד להסיר את המוח ואת חוט השדרה של חולדה על dilaceration הבאים להכין ההשעיה תא בודד. השעיה זו מופרדים על שיפוע Percoll שתי שכבות על מנת לבודד את MNCs. לאחר כביסה, תאים אלה אז מוכן לעבור כל הליך הנדרש.
Mononuclear תאים מבודדים באמצעות הליך זה הם קיימא יכול לשמש electrophysiology, cytometry זרימה (FACS), או ביוכימיה. אם הטכניקה מבוצעת בתנאים סטריליים (בעזרת מכשירים סטריליים במנדף בתרבית רקמה) תאים יכול גם להיות מבוגר בינוני בתרבית רקמה. האוכלוסייה תא נתון יכול להיות מטוהרים נוסף או באמצעות הליכים הפרדה מגנטית או FACS.
Protocol
Discussion
הליך זה, כמו כל ההליכים הקשורים בבעלי חיים, חייב להיות מאושר על ידי שימוש בבעלי חיים המוסד שלך וועדת אכפת. אנו ממליצים כי וטרינר או טכנאי וטרינרי להיות נוכח בעת ביצוע perfusions הלב הראשון, כדי להבטיח רמה מספקת של ההרדמה ניתנת לבעל החיים לפני ובמהלך ההליך, וכי בעלי החיים אינם עוברים כא…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS, 1x, sterile | Reagent | Gibco / Invitrogen | 14190-250 | |
| Cell strainer, 70 um | Tool | Fisher | 08-771-2 | |
| Percoll | Reagent | Sigma | P1644 |
References
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Visualized Experiments. 5, .
