$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Qu'il s'agisse d'étudier une maladie auto-immune dirigés vers le système nerveux central (SNC), tels que encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE, 1), ou la réponse immunitaire à une infection du système nerveux central, telles que la poliomyélite, maladie de Lyme neuroborréliose ou neurosyphilis, il est souvent nécessaire d'isoler les cellules du SNC infiltrant immunitaire.
Dans cette vidéo-protocole que nous montrent comment isoler les cellules mononucléées (CMN) du SNC de rat avec une EAE. La première étape de cette procédure nécessite une perfusion cardiaque du rongeur avec une solution saline pour s'assurer que le sang ne reste dans les vaisseaux sanguins irriguant le SNC. Toute contamination du sang sera d'augmenter artificiellement le nombre de SNC-apparente infiltrer les multinationales et peut modifier la composition apparente du système immunitaire infiltrer. Nous avons ensuite montrer comment retirer le cerveau et la moelle épinière du rat pour dilacération ultérieure pour préparer une suspension à cellule unique. Cette suspension est séparé sur un dégradé de deux couches de Percoll à isoler les multinationales. Après lavage, ces cellules sont alors prêtes à subir une procédure requise.
Des cellules mononucléées isolées en utilisant cette procédure sont viables et peuvent être utilisés pour l'électrophysiologie, la cytométrie en flux (FACS), ou en biochimie. Si la technique est réalisée dans des conditions stériles (à l'aide d'instruments stériles sous une hotte de culture de tissus), les cellules peuvent également être cultivées dans un milieu de culture de tissus. Une population de cellules donné peut encore être purifié en utilisant soit des procédures de séparation magnétique ou un FACS.