在新生小鼠肺肺流体体积的实时X射线成像
Summary
We present a protocol to assess the rate of alveolar fluid clearance or pulmonary edema in neonatal mouse lung using X-ray imaging technology.
Abstract
出生时，肺经历从分泌吸收了深刻的表型开关，它允许以适应自主呼吸。促进和维持这种表型是整个生命的正常肺泡生长和气体交换至关重要。几个 体外研究其特征关键调节蛋白，信号分子，和类固醇激素，可以影响肺液清除率的作用。然而， 在体内的检查，必须执行以评估这些调控因子是否在调节围产期肺液体吸收中起重要的生理作用。因此，实时X射线成像的使用情况，确定围产期肺液清，或肺水肿，代表在该领域的技术进步。在此，我们解释和说明的方法来评估在10后产后我们每天C57BL / 6小鼠肺部肺泡液体清除和肺泡洪水率ING X射线成像和分析。成功地执行本协议要求的体制动物护理和使用委员会（IACUC）， 体内小动物X射线成像系统，以及兼容的分子成像软件事先批准。
Introduction
在出生，新生儿肺部必须从流体分泌过渡到一个流体再吸收器官建立足够的通风和主体的氧合。有利于在出生时肺液有效地清除的机制（或妨碍）仍不清楚。在建模C57BL / 6新生小鼠的幼崽肺泡液体清除率将导致更好地理解监管因素，可以提高或降低液体的吸收率。它也可以适用于急性肺损伤或感染的其他新生模型，并可能导致对呼吸窘迫新生儿新的治疗策略。
由于新生儿的肺相比，成人肺是微不足道的，依赖于灌洗或gravimetrical测量肺泡液体清除常规措施可能不适合准确地研究新生儿肺部模型肺液清关。在这个协议中，我们证明的测定法，允许肺泡液体清除率的准确测定日龄10 C57BL / 6小鼠的幼崽用小动物成像仪。使用荧光方法的一个主要的好处是，将动物体内成像。他们在自由地呼吸，可能会为未来的观测和研究这种微创法恢复。该方法的总的目标是肺水肿在新生儿肺部建模，并评估在新生儿肺部肺泡液体清除的速率。这种技术被开发，部分作为减少策略，以减少所需的动物数量，然而最大化试验输出。这种技术还允许肺流体体积的优越检测用X射线成像，并需要在基本动物克制熟练度和处理1;小动物手术和气管滴入2，小动物成像仪，和基本的图像分析软件。谁愿意在体内评价肺流体体积研究者（BRE自如athing麻醉动物模型）可能会发现适合自己应用此过程。最后，该协议可能会增加在支气管肺发育不良，包括高氧性肺损伤，机械通气和肺部炎症3车型的机理研究中使用的新生儿肺损伤等现有车型。
Protocol
Representative Results
Discussion
使用X射线成像，新生儿肺部清晰的图像可以被分析为肺液的卷。我们7,3,11和10人，已成功地利用X射线成像，以确定自由呼吸麻醉动物模型肺液量动态变化，以及这种技术带来了巨大希望推进新生儿肺损伤的研究。在使用我们的方法来评估肺流体体积（相对于例如X射线相位constrast 10）的一个主要优点是，最多五个PN10小鼠幼仔可以使用成像系统，该系统是在研究设施和芯共?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work is supported by a grant awarded to MNH by Children’s Healthcare of Atlanta, the APS 2014 Short-Term Research Education Program to Increase Diversity in Health-Related Research (STRIDE) fellowship awarded to PT, and the University of Notre Dame Integrated Imaging Facility.
Materials
| Preclinical Imaging System (In- Vivo MS FX PRO) | Bruker; Billerica, MA | |
| Ketamine | Ketaset; Fort Dodge Animal Health, IA | 26637-411-01 |
| Xylazine | Lloyd Laboratories; Shenandoah, IA | 4821 |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (with Calcium and Magnesium) | Lonza; Walkersville, MD | 17-513F |
| Sodium chloride | Amresco; Solon, OH | 241 |
| Potassuim chloride | Fisher Scientific; Fair Lawn, NJ | P217-3 |
| Calcium chloride | Sigma-Aldrich; St. Loius, MO | C5080 |
| HEPES | Sigma-Aldrich; St. Loius, MO | H3375 |
| 0.3 mL insulin syringe with 31Gx5/16" (8mm) needle | BD Insulin Syringe; Franklin Lakes, NJ | 328438 |
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