מכשיר פשוט להכין במהירות mounts כל ממעי העכבר
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
הכנת mounts של מעי הדק ומעי גס עכבר לניתוח או כימות שלאחר מכן כל יכולה להיות זמן רב וקשה. אנו מתארים את השימוש במכשיר פשוט לחתוך ומעיים עכבר 'גליל' להכין במהירות הכנות הר שלמות של איכות מעולה ואחידה לזה שיכול להיות מושגת על ידי יד. המכשיר כולל בסיס שמחזיק 4 מוטות נירוסטה ועליונה, הפועל מדריך חיתוך. המוטות מוכנסות לתוך חלל המעי הקטן [מחולק לשלישים] והמעי הגס. המוטות והדגימות לאחר מכן הניחו על פיסת נייר סינון או כרטיס לחריצי ההחזקה בבסיס של המכשיר. חלקיו העליונים של המכשיר ולאחר מכן ממוקם ומשמש כמדריך חיתוך. שני הסעיפים בזווית במרכז פיסה העליונה משמשים כדי להנחות את סכין או אזמל ולחתוך את המעיים longitudinally בחלק העליון של המוטות. ברגע שחלקי המעי קוצצו, העליון מוסר ואת הכרטיס, TissUE ומוטות להסיר בעדינות את המכשיר והניח על הספסל. המוטות אז בעדינות התגלגלו הצידה כדי לשטח ואת מקל מגזרי מעיים על פיסת נייר סינון או כרטיס הבסיסית. ההכנה הסופית ואז ניתן לבדוק או קבועה ומאוחסנות לניתוח מאוחר יותר. ההכנות רבות ערך לחקר שינויים במעי במודלים של עכברים נורמלים או מהונדסים גנטי. ההכנות כבר בשימוש למחקר וכימות של ההשפעות של דלקת (דלקת המעי הגס), נזק, נגעים טרום סרטניים (מוקדי קריפטה הסוטים (ACFs) וmucin מדולדלים מוקדים (MDFs)) ופוליפים או גידולים.
Introduction
העכבר והעכבר המהונדס גנטי 1-3 הם מודל לא יסולא בפז ללימוד פתולוגיות שונות במיוחד סרטן והקשר שלה לדלקת במערכת העיכול. זה בדרך כלל דורש ההכנה של mounts של המעי דק ו / או מעי גס כולו.
ההכנה של כל mounts ניתן לעשות עם זוג דיוק מספריים לקזז אבל זה יכול לקחת כ -20 דקות לכל עכבר 4. זה לא מעשי מאוד למחקרים השוואתיים, הדורשים כמות משמעותית של עכברים (10 אומרים לנושא הקבוצה לניתוח סטטיסטי). בנוסף, אורך הזמן שלוקח מגביר את הסיכון של השפלה רקמה. ניסיון להקל על בעיה זו הוביל למשפטו של עזרי הכנת חיתוך שונים. הראשון היה מבוסס על סדרה של לוחות מתכת, עם מטעי חיתוך, אבל הצלחות טשטשו את הרקמה והחיתוך היה קשה ובכך לשלוט.
Conventionaעיפרון שישה-צדדי l לבסוף סיפק השראה למכשיר החיתוך, כפי שאנו יכולים לראות כיצד צורת חצי עיפרון תעשה מדריך טוב לאזמל (איור 1). זה הביא לעיצוב מסגרת עם ארבעה מדריכי חיתוך 5. היעילות של מכשיר זה הייתה דרמטית כמו ההכנות באיור 4 מדגימות את ההבדל בין הכנת המספריים והכנת ההתקן.
צמרות המכשירים המקוריים נבנו מכמה חתיכות של מתכת, אך מאוחר יותר אלה, והמודל הנוכחי מכונה מתוך פיסת duralumin מוצקה. הבסיס היה במכונה מתוך שרף בצפיפות גבוהה באיכות הגבוהה ביותר.
המכשיר הוכיח להיות תועלת רבה להכנת mounts של מעי עכבר כל שהיא במידה רבה מאיצה את ומשפרת את האיכות ועקביות של ההכנות, שיש מגוון רחב של יישומים.
Protocol
Representative Results
Discussion
המכשיר מאוד מאיץ את התהליך, כך ששני מפעילים יכולים נתיחה לאחר מוות בעכבר באופן מלא בתוך 6 דקות. זה יכלול בדיקה חזותית לנגעי ברוטו ברורים ומשקל ותיקון האיברים העיקריים. זה גם יאפשר למפעילים לשטוף, למחוק ולשקול את הקיבה, מעי אטום, מעי דק ומעי גס ולהכין את כל mounts. הרקמה שיט…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
References
- Goodlad, R. A., Alison, M. R. Cancer Handbook. , 243-262 (2007).
- Ward, J. M., Treuting, P. M. Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models. Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).
- Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease. Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).
- Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice. Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).
- Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine. Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).
- Alferez, D., Goodlad, R. A. To best measure cell proliferation in samples from the intestine. Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).
- Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology. Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).
- Park, H. S., et al. Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently. Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).
- Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis. Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).
- Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
- Goodlad, R. A., et al. Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer. Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).
- Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development. Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).
