La préparation présentée ici pour le conditionnement des clignements d’yeux signalés par les moustaches chez les souris à tête fixe stimule précisément des moustaches spécifiques tout en permettant aux souris de se déplacer sur un tapis roulant cylindrique. Un stimulus conditionné par stimulation par moustache (CS) associé à un stimulus inconditionné par choc périorbitaire (US) permet un apprentissage associatif fiable sur cet appareil.
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Article de méthode
Moustaches de signalisation eyeblink conditionnement classique chez les souris de tête-fixe
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le conditionnement des yeux est un paradigme courant pour étudier les mécanismes neuronaux sous-jacents à l’apprentissage et à la mémoire. Pour mieux utiliser le vaste répertoire de techniques scientifiques disponibles pour étudier l’apprentissage et la mémoire au niveau cellulaire, il est idéal d’avoir une plate-forme crânienne stable. Parce que les souris ne tolèrent pas facilement la contention, elles sont généralement entraînées tout en se déplaçant librement dans une chambre. Les informations sur les stimuli conditionnés (CS) et les stimulus inconditionnés (US) sont délivrées et les réponses au clignement des yeux sont enregistrées via une attache connectée à la tête de la souris. Dans l’appareil à tête fixe présenté ici, les souris sont autorisées à courir comme elles le souhaitent tandis que leur tête est sécurisée pour faciliter l’expérimentation. Un conditionnement fiable de la réponse au clignement des yeux est obtenu avec cet appareil d’entraînement, qui permet l’administration d’une stimulation des moustaches comme le CS, d’un choc électrique périorbitaire comme l’US, et l’analyse de l’activité électromyographique (EMG) de la paupière pour détecter les réponses de clignement.
Introduction
conditionné eyeblink est une forme de conditionnement pavlovien et un système de modèle pour étudier les mécanismes neuronaux de l'apprentissage associatif et de la mémoire. Il a été étudié chez différentes espèces, y compris les humains, les lapins, les chats, les rats et les souris. Le paradigme implique la présentation de deux stimuli appariés: un stimulus neutre conditionné (CS, par exemple, un ton, un éclair de lumière, ou la stimulation de la moustache), et un stimulus inconditionné saillant (Etats - Unis, par exemple, une bouffée d'air à l'œil, ou choc périorbitaire). Les États - Unis suscite, une réponse eyeblink réflexive incond....
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Protocole
Toutes les procédures impliquant des souris ont été effectuées conformément aux protocoles approuvés par Institutional Animal Care de l'Université Northwestern et l'utilisation Comité sur la base des lignes directrices publiées par l'Institut national de la santé.
1. Le cylindre (figure 2A)
- Construire le cylindre comme décrit par Chettih et al. Et Heiney et al. À partir d' un long cylindre de mousse 14-15. Couper une longueur de 10 cm du cylindre et percer un trou dans le centre pour adapter l'axe, une tige de 12,7 mm de métal (0,5 po.) De diamètre. Monter le cylindre avec son ax....
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Résultats
8-10 semaine vieille souris mâles C57BL6 / J ont été formés sur la trace eyeblink conditionné sur l'appareil de tapis roulant tête cylindrique fixe. 8 souris ont été formés avec des présentations appariés CS-US (groupe conditionné) et 9 souris ont été formés avec des présentations non appariés CS et américains (groupe pseudoconditioned).
Exemple enregistrements EMG d'une réponse conditionnée à partir d' une souris .......
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Discussion
Classique eyeblink conditionné est une forme d'apprentissage associatif qui est un outil utile pour comprendre les substrats neuronaux sous-jacents apprentissage et la mémoire. Les méthodes précédentes utilisées pour le conditionnement eyeblink chez les rongeurs tels que les souris impliqués une chambre qui a permis à l'animal de se déplacer librement. Une préparation de tête fixe pour le conditionnement eyeblink chez la souris, en utilisant l'appareil décrit par Chettih et al. Et Heiney et al.<.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun intérêt financier concurrents.
Remerciements
Ce travail a été financé par le ministère de la Défense (W81XWH-13-01-0243) et les National Institutes of Health (R37 AG008796). Nous remercions Alan Baker dans la boutique de la machine de la Northwestern University pour la construction de l'appareil de culasse fixe. Nous remercions le Dr Shoai Hattori pour ses conseils en MATLAB et Solidworks. Nous remercions le Dr John Power pour le logiciel LabView qui contrôlait l'expérience.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Exervo TeraNova Rouleau en mousse 36 » x 6" ; | Amazon | B002ONUM0E | Pour cylindre |
| en plexiglas | Sur mesure ; Tiges métalliques de 1 cm d’épaisseur | ||
| (12,7 po) mm de diamètre) | |||
| Vis à métaux 4-40 sur mesure (.25 ; dans. long) | Amazon Supply | B00F33Q8QO | Pour Cylindre |
| Peigne à Cheveux Design Classique | Conair | 93505WG-320 | Pour la stimulation des moustaches |
| Actionneur de flexion rectangulaire à 2 couches | Systèmes Piezo | T220-A4-303X ; | Pour la stimulation des moustaches |
| Kit de soudure et de flux | Piezo Systems | MSF-003-NI | Pour la stimulation des moustaches |
| Base magnétique | Thor Labs | MB175 | Pour la stimulation des moustaches |
| Tige filetée pour base | Bandes sur mesure | ||
| basées sur les connecteurs de bande de nylon de la série 221 d’Electronic Connector Corp. | Sur mesure, basé sur Weiss et Disterhoft, 2008 | ||
| TO-220 Style Transistor | Amazon Supply | B0002ZPZYO ; | Pour le connecteur, pour les ailes |
| Relia-Tac Sockets | Electronic Connector Corp. | 220-S02 | Pour connecteur |
| Relia-Tac Pins | Electronic Connector Corp. | 220-P02 | Pour tête |
| Vis à métaux en acier inoxydable 0-80 (1 po de long) | Vis | de | blocage |
| acier inoxydable Amazon Supply Écrou hexagonal en acier inoxydable 0-80 (5/32 po d’épaisseur) | Amazon Supply | B000N2TK7Y Tête de vis de blocage | |
| Loctite Super Glue-Liquid | Loctite | 1365896 | Colle cyanoacrylique ; pour la vis de blocage |
| Quick Setting Epoxy | Ace Quincaillerie | 18613 | Pour le connecteur et le système de stimulation des moustaches |
| Fils de câble Ethernet Le | câble Ethernet peut être démonté pour utiliser les fils individuels du connecteur | ||
| Fils d’acier inoxydable revêtus de polyimide (2 ; dans. long, .005 po. diamètre) | PlasticsOne | 005sw/2.0 37365 S-S ; | Pour les fils de tête, d’EMG et de choc |
| Fil d’acier inoxydable non revêtu (.005 ; dans. diamètre) | AM Systems | 792800 | Pour la têtière, fils de terre Tenma |
| Autotransformateur variable | Tenma | 72-110 | Pour la stimulation des moustaches ; rhéostat pour régler le courant à l’actionneur de flexion |
| Amplificateur | A-M Systems | 1700 | Amplificateur pour filtrer et amplifier les signaux EMG |
| WPI A385R Isolateur de stimulus | World Precision Instruments | 31405 | Pour le choc électrique |
| Isothésie (Isoflurane) | Henry Schein : Santé animale | 50031 | Pour la chirurgie ; anesthésie |
| Buprenex Injectable CIII | Reckett Benckiser Pharmaceuticals Inc | NDC 12496-0757-1 | Pour la chirurgie ; analgésique |
| Akwa Tears : Lubrifiant Pommade ophtalmique ; | Akorn | NDC 17478-062-35 | Pommade lacrymale artificielle pour prévenir la sécheresse oculaire sous anesthésie |
| Tampons de préparation à la povidine-iode | PDI | NDC 10819-3883-1 | Pour la chirurgie ; antiseptique |
| Les coussinets | peuvent être achetés dans n’importe quelle pharmacie standard | ||
| Manches de scalpel chirurgical en acier inoxydable (n°3) | Integra Miltex ; | 4-7.Pour | chirurgie |
| Lames de scalpel chirurgical en acier inoxydable | Integra Miltex | 4-310 ou 4-315 | Pour la chirurgie ; lame de scalpel numéro 10 ou 15 |
| 3 % Peroxyde d’hydrogène | Peut être acheté dans n’importe quelle pharmacie standard | ||
| Micro Clip | Roboz | RS-5459 | Pour la chirurgie, pour retenir la peau |
| 00-90 Vis mécanique en acier inoxydable (0.0625 ; dans. long) | Amazon Supply | B002SG89X4 ; | Pour la chirurgie, pour enrouler le fil de terre autour |
| Outil rotatif professionnel | Walnut Hollow | 29637 | Perceuse à main pour la chirurgie, pour percer des trous dans le crâne |
| Cône inversé Burr | Roboz | RS-6282C-34 | Cône inversé taille 34 ; pour la chirurgie, pour percer des trous dans le crâne |
| Gravure Cutter Drill Bit | Dremel | 106 | Coupe-gravure ; 1,6 mm Embout ; pour la chirurgie, pour percer des trous dans le crâne |
| C& B Metabond-Vite ! Système de ciment « B » Quick Base | Parkell | S398 | Pour la chirurgie ; système de ciment de scellement adhésif ; important pour prévenir l’avulsion de la tête |
| C& B Metabond-Vite ! Système de ciment Clear L-Powder | Parkell | S399 | Pour la chirurgie ; système de ciment de scellement adhésif ; important pour prévenir l’avulsion de la tête |
| C& B Metabond-Vite ! Système de ciment « C » Catalyseur universel TBB 0,7 ml | Parkell | S371 | Pour la chirurgie ; système de ciment de scellement adhésif ; important pour prévenir l’avulsion de la têtière |
| C& B Metabond-Vite ! Système de ciment Bol de mélange en céramique avec bande de température | Parkell | S387 | Pour la chirurgie ; système de ciment de scellement adhésif ; important pour prévenir l’avulsion de la tête |
| Pince à épiler suisse, style #5 | World Precision Instruments | 504506 | Pour la chirurgie |
| Puritan Applicateurs à pointe de coton | VWR International | 10806-005 ; | Pour la chirurgie |
| Dental Caulk Grip Cement Kit | Dentsply | 675570 | Pour la chirurgie ; ciment dentaire |
Références
- Clark, R. E., Squire, L. R. Classical conditioning and brain systems: the role of awareness. Science. 280 (5360), 77-81 (1998).
- Thompson, R. F., Kim, J. J. Memory systems in the brain and localization of a memory. PNAS. 93 (24), 13438-13444 (1996).
- Solomon, P. R., Vande....
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Réimpressions et autorisations
