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Article de méthode

Au-Interaction des SLP1 Polymères et monocouche de

10.8K vues

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DOI :

10.3791/53572

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19 janvier 2016

 ,  , 

Dans cet article

Résumé

Pour obtenir des informations de base sur la sorption et le recyclage de l’or à partir de systèmes aqueux, l’interaction des nanoparticules d’Au(III) et d’Au(0) sur les protéines de la couche S a été étudiée. La sorption des polymères protéiques a été étudiée par ICP-MS et celle des monocouches protéiques par QCM-D. L’AFM subséquente permet d’imager les nanostructures.

Résumé

Dans cette publication, le comportement de sorption de l’or des protéines de la couche superficielle (couche S) (Slp1) de Lysinibacillus sphaericus JG-B53 est décrit. Ces biomolécules s’organisent en réseaux bidimensionnels paracristallins sur les surfaces, lient les métaux et sont donc intéressantes pour plusieurs applications biotechniques, telles que les matériaux biosorptifs pour l’élimination ou la récupération de différents éléments de l’environnement et les processus industriels. Le dépôt de nanoparticules d’Au(0) sur les couches S, soit par synthèse dirigée de la couche S 1, soit par adsorption de nanoparticules, ouvre de nouvelles possibilités pour diverses applications sensorielles. Bien que de nombreuses études aient décrit les propriétés biosorptives des couches S 2 à 5, une compréhension plus approfondie de l’interaction protéine-protéine et protéine-métal reste encore un défi. Dans l’étude suivante, la spectrométrie de masse à couplage inductif (ICP-MS) a été utilisée pour la détection de la sorption des métaux par les couches S en suspension. Cela a été corrélé aux mesures de microbalance à cristal de quartz avec surveillance de la dissipation (QCM-D), qui permet la détection en ligne de la formation de monocouches protéiques et du dépôt de métal, et donc, une compréhension plus détaillée de la liaison métallique.

Les résultats de l’ICP-MS ont indiqué que la liaison de l’Au(III) aux polymères de la couche S en suspension dépend du pH. La liaison maximale d’Au(III) a été obtenue à un pH de 4,0. Les investigations QCM-D ont permis de détecter la sorption de l’Au(III) ainsi que le dépôt de NP Au(0) en temps réel pendant les expériences in situ. De plus, cette méthode a permis d’étudier l’influence de la liaison métallique sur la stabilité du réseau protéique de Slp1. Les propriétés structurelles et la stabilité de la couche protéique ont pu être visualisées directement après l’expérience QCM-D à l’aide de la microscopie à force atomique (AFM). En conclusion, la combinaison de ces différentes méthodes permet une compréhension plus approfondie de la liaison des métaux par les protéines bactériennes de la couche S en suspension ou sous forme de monocouches sur des cellules bactériennes ou des surfaces recristallisées.

Introduction

En raison de l'utilisation croissante de l'or pour plusieurs applications comme l'électronique, les catalyseurs, les biocapteurs, ou des instruments médicaux, à la demande de ce métal précieux a augmenté au cours du temps de ces dernières années 6-9. Or, ainsi que beaucoup d'autres métaux précieux et lourds sont libérés dans l'environnement par les effluents industriels à des concentrations diluées, à travers des activités minières, et l'élimination des déchets 7,8,10, bien que la plupart contamination de l'environnement par des métaux lourds ou précieux est un processus continu principalement causés par des activités....

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Protocole

1. Microorganismes et la culture Conditions

Note:. Toutes les expériences ont été effectuées dans des conditions stériles L. sphaericus JG-B53 a été obtenu à partir d'une culture de cryo-conservé 29,30.

  1. La culture (1,5 ml) sous le banc propre transfert cryo-conservés jusqu'à 300 ml de bouillon nutritif stérile (NB) médias (3 g / L extrait de viande, 5 g / l de peptone, 10 g / l de NaCl). Ensuite agiter la solution pendant au moins 6 heures à 30 ° C pour obtenir la pré-culture pour la culture.
  2. Cultiver les bactéries dans des conditions aérobies dans les médias NB à pH = 7,0, 30 ° C dans un bio....

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Résultats

La culture de micro-organismes et SLP1 Caractérisation

Les données enregistrées de la croissance bactérienne indique la fin de la phase exponentielle de croissance à environ 5 heures. Enquêtes précédentes ont montré que SLP1 peut être isolé à partir de ce moment de la récolte (4,36 g / biomasse humide L (≈ 1,45 g / L (BDW)) avec un rendement maximal 19. Néanmoins, l'optimisation de la culture en.......

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Discussion

Dans ce travail étudié la liaison aux protéines de Au S-couche a été étudiée en utilisant une combinaison de différentes méthodes analytiques. En particulier, la fixation de Au est très intéressante, non seulement pour la récupération des eaux de Au miniers ou des solutions de traitement, mais également pour la construction de matériaux, par exemple des surfaces sensorielles. Pour les études de l'UA interaction (Au (III) et Au (0) -NPs) avec sursis et monocouche de SLP1 recristallisé, la protéine a dû être .......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs ont rien à révéler.

Remerciements

Le présent travail a été partiellement financé par l'IGF-projet "S-Sieve" (490 ZBG / 1) financé par l'BMWi et le BMBF-projet "Aptasens" (BMBF / DLR 01RB0805A). Un merci spécial à Tobias J. Günther pour son aide précieuse pendant les études de l'AFM et à Erik V. Johnstone pour lire le manuscrit comme une langue maternelle anglaise. En outre, l'auteur de cet article tient à remercier Aline Ritter et Sabrina Gurlit (de l'Institut pour l'écologie des ressources de l'aide pour les mesures par ICP-MS), Manja Vogel, Nancy Unger, Karen E. Viacava et de la biotechnologie de groupe de la Helmholtz-Institut Freiberg pour Technology Resource.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
strong
Bioreactor, vapeur en place Système pilote 70LApplikon Biotechnology, Pays-BasZ6Xavec dO2, capteurs de pH d’Applikon Biotechnology et logiciel BioXpert V2
Moniteur de biomasse non invasif BugEye 2100BugLab, Concord (CA), USAZ9X---
Spectrometer Ultrospec 1000Amersham Pharmacia Biotech, Grande-Bretagne80-2109-10Entreprise maintenant GE Healthcare Life Sciences
MiniStar micro centrifugeVWR, Allemagne521-2844Pour la centrifugation d’échantillons de culture Système de
recherche microscope BX-61Olympus Germany LLC, Allemagne037006Microscope en combinaison avec le logiciel d’imagerie
Cell^P (version 3.1)Olympus Soft Imaging Solutions LLC, Mü ; nster, Allemagne---en collaboration avec le microscope
Powerfuge Pilot Separation System Série 9010-SCarr Centritech, Floride, États-Unis9010PLTPour la récolte de la biomasse
T18 basic Ultra TurraxIKA Labortechnik, Allemagne431-2601Pour l’élimination des flagelles et l’homogénéisation des échantillons
Sorvall Evolution RC Superspeed CentrifugeThermo Fisher Scientific, USA728411Utilisé dans l’isolement
des protéines Processeur de fluide mobile à haut cisaillement, M-110EH-30 Microfluidics pilote, Massachusetts, États-UnisM110EH30KUtilisé pour la rupture cellulaire
Alpha 1-4 LSC LyophilisateurMartin Christ Freeze dryers LLC, Osterode, AllemagneSpectrophotométrie 102041---
UV-VIS (NanoDrop 2000c)Thermo Fisher Scientific, USA91-ND-2000C-LPour la détermination de la protéine chambre
d’électrophorèse verticale Mini-PROTEANBio-Rad Laboratories GmbH, Munich, Allemagne165-3322SDS-PAGE
VersaDoc 3000Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich, Allemagne1708030Utilisé pour l’imagerie des gels SDS-PAGE
ICP-MS Elan 9000PerkinElmer, Waltham (MA), États-UnisN8120536Pour la détermination de la concentration
en métalZetasizer Nano ZSMalvern Instruments, Worcestershire Royaume-UniZEN3600Pour la détermination de la taille des nanoparticules
Dispositif Q-Sense E4  ;Q-Sense AB, Göteborg, SuèdeQS-E4commandé via LOT quantum design (logiciel inclus avec la plate-forme E4)
Q-Soft 401 (enregistrement de données)Q-Sense AB, Göteborg, Suède
Q-Tools 3 (évaluation et modélisation des données)Q-Sense AB, Göteborg, Suède
Modules de flux QCM-D QFM  ; 401  ;Q-Sense AB, Göteborg, SuèdeQS-QFM401commandé via LOT quantum design
QSX  ; 303 SiO2 capteurs piézoélectriques à quartz AT-CutQ-Sense AB, Göteborg, SuèdeQS-QSX303commandé via LOT quantum design
Chambre de nettoyage de l’ozoneBioforce Nanoscience, Ames (IA), ÉTATS-UNISQS-ESA006commandé via LOT quantum design
Atomic Force Microscope MFP-3D Bio AFMAsylum Research, Santa Barbara (CA), USAMFP-3DBioLogiciel de mesure et d’imagerie AFM
Logiciel AFM d’Asylum Research AR Version 120804+1223Asylum Research, Santa Barbara (CA), États-Unislogiciel d’imagerie inclus dans Cat. Non. MFP-3DBio
Igor Version Pro 6.3.2.3 LogicielWaveMetrics, Inc., États-Unis---Logiciel d’imagerie inclus dans Cat. Non. MFP-3DBio
BioHeaterAsylum Research, Santa Barbara (CA), États-UnisBioheaterChauffage d’échantillons pour les mesures AFM
Mini cantilever Biolever,  ; BL-AC40TS-C2Olympus Germany LLC, Allemagne&nbsp ; BL-AC40TS-C2Cantilever préféré pour les mesures AFM
WSxM 5.0 Develop 6.5 (2013)Nanotec Electronica S.L. , EspagnefreewareLogiciel pour l’analyse AFM
Nom><>Numéro de catalogueCommentaires
>Détergents et autres équipements
acide acide, 100 %, p.A.CARL ROTH GmbH+CO. KG3738.5Danger, liquide et vapeur inflammables et corrosifs. Provoque de graves brûlures de la peau et des lésions oculaires.
Antimousse 204Sigma-Aldrich Co. LLC.A6426Pour la suppression de la mousse
bleu de bromophénol, sel de sodiumSigma-Aldrich Co. LLC.B5525---
Coomassie Brilliant Blue R (C45H44N3NaO7S2)CARL ROTH GmbH+CO. KG3862.1---
Désoxyribonucléase II de la rate porcineSigma-Aldrich Co. LLC.D4138Typ IV , 2 000 - 6 000  ; Kunitz unités/mg de protéines
Éthanol, 95 %VWR, Allemagne20827.467inflammable
, p.A.CARL ROTH GmbH+CO. KG3783.1---
Chlorhydrate de guanidine (GuHCl)CARL ROTH GmbH+CO. KG0037.1---
Hellmanex IIIHellma GmbH & Co. KG9-307-011-4-507---
Acide chlorhydrique (HCl) (37 %)CARL ROTH GmbH+CO. KG4625.2Danger ; Corrosif, utilisé pour l’ajustement du pH
Lysozyme du blanc d’œuf de pouleSigma-Aldrich Co. LLC.L6876  ;Poudre lyophilisée, protéines = 90 %, = 40 000 unités/mg de protéines (Sigma)  ;
Agitateur magnétique avec chauffage,  ; MR 3000KHeidolph Instruments GmbH & Co.KG, Allemagne504.10100.00Agitateur standard dans le cadre de l’expérience
NB-Media DM180Mast Diagnostica GmbH121800---
Acide nitrique (HNO3)CARL ROTH GmbH+CO. KGHN50.1Danger ; Échelle
de protéines non colorées PageRulerThermoScientific-Pierce26614---
Poly(sodium 4-styrenesulfonat) (PSS)Sigma-Aldrich Co., LLC.243051Mw moyen ~70 000
polyéthylénimine (PEI), ramifiéSigma-Aldrich Co. LLC.408727Avertissement ; Nocif, irritant, dangereux pour l’environnement ; moyenne Mw ~25 000
Carbonate de potassium anhydre (K2CO3)Sigma-Aldrich Co. LLC.60108Avertissement ;
Ribonucase A nocive du pancréas bovinSigma-Aldrich Co. LLC.R5503Type I-AS, 50 à 100 unités de Kunitz/mg de protéines
Azoture de sodium (NaN3)Merck KGaA106688Danger ; très toxique et dangereux pour l’environnement
Chlorure de sodium (NaCl)CARL ROTH GmbH+CO. KG3957.2---
Dodécylsulfate de sodium (SDS)Sigma-Aldrich Co., LLC.L-5750Danger ; hydroxyde
de sodium (NaOH) toxiqueCARLROTH GmbH+CO. KG6771.1Danger ; Corrosif, utilisé pour la régulation du pH dans la culture et l’ajustement du pH
Spectra/Por 6, membrane de dialyse, MWCO 50 000CARL ROTH GmbH+CO. KG1893.1---
Acide sulfurique (H2SO4)CARL ROTH GmbH+CO. KGHN52.2Danger ; Corrosif, utilisé pour la régulation du pH dans la culture
Acide tannique (C76H52O46)Sigma-Aldrich Co. LLC.16201---
TRIS HCl (C4H11NO3HCl)CARL ROTH GmbH+CO. KG9090.2---
Triton X-100CARL ROTH GmbH+CO. KG3051.3Avertissement ; Nocif, Dangereux pour l’environnement
VIVASPIN 500, 50 000 MWCO Tubes d’ultrafiltrationSartorius AGVS0132---
&beta ;-mercaptoethanolSigma-Aldrich Co. LLC.M6250Danger, toxique
Pour le système d’imagerie --- Danger, glycérine oxydante et corrosive

Références

  1. Merroun, M. L., Rossberg, A., Hennig, C., Scheinost, A. C., Selenska-Pobell, S. Spectroscopic characterization of gold nanoparticles formed by cells and S-layer protein of Bacillus sphaericus JG-A12. Mater. Sci. Eng. C. 27 (1), 188-192 (2007).
  2. Raff, J., Soltmann, U., Matys, S., Selenska-Pobell, S., Bottcher, H., Pompe, W.

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Réimpressions et autorisations

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