Tissue Karakterisering efter en ny Disaggregering Metode til Skin Micro-udtagne transplantater Generation
Summary
Protokollen beskriver en ny metode til at opdele humane væv og skabe autologe mikro-podninger, der kombineret med collagen-svampe, giver anledning til menneskelige bio-komplekser klar til brug i behandlingen af hudlæsioner. Endvidere dette system bevarer cellelevedygtighed af mikro-transplantater på forskellige tidspunkter efter mekanisk opdeling.
Abstract
Der er udviklet en række nye metoder inden for bioteknologi til at opnå autologe cellulære suspensioner under operationen, for at give et trin behandlinger for akutte og kroniske hudlæsioner. Endvidere behandlingen af kronisk men også akutte sår efter traumer, diabetes, infektioner og andre årsager, stadig en udfordring. I denne undersøgelse beskriver vi en ny metode til at skabe autologe mikro-implantater fra kutant væv af en enkelt patient og deres kliniske anvendelse. Desuden blev in vitro biologisk karakterisering af kutant væv stammer fra hud, de-epidermized dermis (DED) og dermis af multi-organ og / eller multi-vævsdonorer også udført. Alle væv blev opdelt efter denne nye protokol, hvilket giver os mulighed for at opnå levedygtige mikro-podninger. Især rapporterede vi, at denne innovative protokol er i stand til at skabe bio-komplekser sammensat af autologe mikro-transplantater og collagen-svampe klar til at blive anvendt på hudlæsioner. Den kli-cal anvendelse af autologe bio-komplekser på et ben læsion blev også rapporteret, viser en forbedring af både re-epitalization proces og blødhed af læsionen. Derudover viste vores in vitro model, at cellelevedygtighed efter mekanisk opdeling med dette system opretholdes over tid for op til syv (7) dage kultur. Vi har også observeret, ved hjælp af flowcytometri analyse, at puljen af celler opnået fra disaggregering er sammensat af flere celletyper, herunder mesenchymstamceller, der udøver en nøglerolle i de processer af vævsregeneration og reparation, for deres høje regenerative potentiale. Endelig demonstrerede vi in vitro, at denne procedure opretholder sterilitet af mikro-implantater ved dyrkning i agar retter. Sammenfattende konkluderer vi, at denne nye regenerative tilgang kan være et lovende redskab for klinikere at opnå i et trin levedygtig, sterilt og klar til brug mikro-implantater, der kan anvendes alene eller i kombination med mest almindelige biologiske scaffoLDS.
Introduction
I de sidste år har flere nye metoder blevet udviklet inden for bioteknologi til at opnå autologe cellulære suspensioner under operationen for at give et-trins behandlinger for akutte og kroniske hudlæsioner. Desuden behandling af akut men hovedsagelig kroniske sår efter traumer, diabetes, infektioner, og andre årsager, stadig en udfordring. Der er stigende tegn på, at kroniske sår er blevet en alvorlig global sundhedsproblem, der forårsager en enorm økonomisk byrde for sundhedssystemerne i hele verden 1.
At forøge hastigheden af succes i behandlingen af hudlæsioner, fraværet af omfattende manipulation (herunder cellulær enhancement) og opretholdelse af sterile betingelser er afgørende, for at skabe en cellulær suspension, der umiddelbart kan anvendes på det beskadigede område af patienter og derved undgå en længere behandling i renrum såsom cellefabrikker. Starting fra små hudbiopsier, slibning, centrifugering og andre adskillelsesmetoder (f.eks enzymatisk eller mekanisk), anvendes ofte til opnåelse af en cellulær suspension, der kan dyrkes i et vækstmedium. Alle disse metoder kræver generelt lang tid for udførelse, understreger de cellestrukturer, og fører til en reduktion af cellelevedygtighed. Et andet væsentligt aspekt er at opnå et autologt cellulær suspension klar til at blive brugt af klinikere, for eksempel til at reparere beskadigede områder. Desuden er det velkendt, at autologe vævstransplantater overlever procedurerne for overførsel til sidst overleve i modtagerens sted ved principperne for induktion og ledning 2, 3. Den ideelle graft væv skal være let tilgængelige og har lav antigenicitet og donor websted sygelighed 4.
På grundlag af disse beviser, den første Formålet med denne undersøgelse var at skabe autologe bio-komplekser er egnede tilklinisk anvendelse i vævsreparation. Til dette formål, vi beskriver en ny metode til at opnå autologe mikro-podninger startende fra kutane væv, der blev opdelt efter denne protokol. En sag præsentation er også heri beskrives som en klinisk anvendelse af autologe mikro-podninger opnået ved denne protokol i kombination med collagen-svampe. Denne fremgangsmåde er allerede blevet rapporteret at være effektiv i den mekaniske opdeling af humane væv 5, og det er blevet anvendt klinisk til transplantater og regenerering af dermale væv 6,7 samt for regenerative terapier af bindevæv i oral-maxillofacial kirurgi 8-10 .
Derudover andet formål med denne undersøgelse var den biologiske karakterisering af de kutane væv efter deres disaggregering af denne protokol. Til dette formål forskellige homologe prøver af kutant væv afledt fra stammen område af forskellige multiorgansystemerog / eller multi-vævsdonorer blev behandlet efter de nationale regler om høst, forarbejdning og distribution af væv til transplantation (CNT 2013) på Emilia Romagna Regional Skin Bank.
CASE PRÆSENTATION:
En 35-årig kvindelig patient, som viser en kompleks traume grundet bilulykke blev indlagt på intensivafdelingen på Ancona Hospital. Patienten viste en infektion på benet grundet et åbent sår og en sammensat brud stabiliseret med ekstern fiksering. To radikale debridering blev udført, og når såret blev rene efter undertryk terapi (VAC-terapi), og periosteum optrådte sunde, vi anvendte protokollen efter to måneder opsving. Efter disaggregering med dette system, blev mikro-implantater fremstillet brugt til at skabe bio-komplekser med en kollagensvamp som efterfølgende blev implanteret med henblik på at undersøge deres virkning på læsionen reparation.
Protocol
Representative Results
Discussion
Denne indledende undersøgelse viste, at mikro-implantater fremstillet ved denne protokol kan kombineres med collagen-svampe, som allerede rapporteret i andre kliniske anvendelser, for at optimere effektiviteten af mikro-transplantater implantater 9, 10. Især denne undersøgelse rapporteret kapaciteten af bio -complexes, udgøres af mikro-grafts og collagen-svampe, på adjuverende sårhelingen af et ben læsion efter 30 dage fra klinisk anvendelse. Desuden in vitro resultater dokumentere om ef…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne ønsker at takke Dr. Federica Zanzottera for at bidrage til undersøgelsen udfører flowcytometri analyse.
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
References
- Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).
- Ellis, E., Sinn, D. Use of homologous bone grafts in maxillofacial surgery. J Oral Maxillofac Surg. 51, 1181-1193 (1993).
- Nguyen, A., Pasyk, K. A., Bouvier, T. N., Hassett, C. A., Argenta, L. C. Comparative study of survival of autologous adipose tissue taken and transplanted by different techniques. Plast Reconstr Sur. 85, 378-389 (1990).
- Abuzeni, P. Z., Alexander, R. W. Enhancement of Autologous Fat Transplantation With Platelet Rich Plasma. AJCS. 18 (2), 59-70 (2001).
- Trovato, L., et al. A New Medical Device Rigeneracons Allows to Obtain Viable Micro-Grafts from Mechanical Disaggregation of Human Tissues. J Cell Physiol. , (2015).
- Zanzottera, F., Lavezzari, E., Trovato, L., Icardi, A., Graziano, A. Adipose Derived Stem Cells and Growth Factors Applied on Hair Transplantation Follow-Up of Clinical Outcome. JCDSA. 4 (4), 268-274 (2014).
- Giaccone, M., Brunetti, M., Camandona, M., Trovato, L., Graziano, A. A New Medical Device, Based on Rigenera Protocol in the Management of Complex Wounds. J Stem Cells Res, Rev & Rep. 1 (3), 3 (2014).
- Aimetti, M., Ferrarotti, F., Cricenti, L., Mariani, G. M., Romano, F. Autologous dental pulp stem cells in periodontal regeneration: a case report. Int J Periodontics Restorative Dent. 34 (3), s27-s33 (2014).
- Graziano, A., Carinci, F., Scolaro, S., D’Aquino, R. Periodontal tissue generation using autologous dental ligament micro-grafts: case report with 6 months follow-up. AOMS. 1 (2), 20 (2013).
- Brunelli, G., Motroni, A., Graziano, A., D’Aquino, R., et al. Sinus lift tissue engineering using autologous pulp micro-grafts: A case report of bone density evaluation. J Indian Soc Periodontol. 17 (5), 644-647 (2013).
- Ellner, P. D., Stoessel, C. J., Drakeford, E., Vasi, F. A new culture medium for medical bacteriology. Am J Clin Pathol. 45, 502-504 (1966).
