Gewebecharakterisierung nach einer neuen Disaggregation Methode für Haut Micro-Grafts-Generation
Summary
Das Protokoll beschreibt eine neue Methode menschliche Gewebe zu disaggregieren und autologe Mikrotransplantate zu schaffen, die mit Kollagenschwämmen kombiniert, bereit Anstieg der menschlichen bio-Komplexe geben bei der Behandlung von Hautläsionen zu verwenden. Dieses System erhält die Lebensfähigkeit der Zellen von Mikrotransplantaten zu verschiedenen Zeiten nach der mechanischen Disaggregation weiter.
Abstract
Mehrere neue Methoden wurden auf dem Gebiet der Biotechnologie zu erhalten autologe Zellsuspensionen während der Operation, zu schaffen, um einen Schritt Behandlungen bei akuten und chronischen Hautläsionen entwickelt. Darüber hinaus ist die Behandlung der chronischen, aber auch akute Wunden von Trauma, Diabetes, Infektionen und andere Ursachen, bleibt eine Herausforderung. In dieser Studie beschreiben wir eine neue Methode autologe Mikrotransplantate aus Hautgewebe eines einzelnen Patienten und ihre klinische Anwendung zu erstellen. Darüber hinaus kann in vitro biologische Charakterisierung von Hautgewebe , die aus Haut, de-epidermized Dermis (DED) und Dermis von Multi-organ und / oder multi-Gewebespendern wurde ebenfalls durchgeführt. Alle Gewebe wurden durch dieses neue Protokoll aufgeschlüsselt, so dass wir tragfähige Mikrotransplantate zu erhalten. Insbesondere berichteten wir, dass dieses innovative Protokoll ist in der Lage Bio-Komplexe, die durch autologe Mikrotransplantate und Kollagenschwämme bereit, auf Hautläsionen aufgetragen werden zusammensetzt. Die clinical Anwendung autologer Bio-Komplexe auf einem Bein Läsion wurde auch eine Verbesserung sowohl der Wieder epitalization Prozess und Weichheit der Läsion berichtet, zeigt. Zusätzlich haben unsere in vitro Modell zeigte , dass die Lebensfähigkeit der Zellen nach der mechanischen Disaggregation mit diesem System im Laufe der Zeit bis zu sieben (7) Tagen Kultur gehalten wird. Wir beobachteten auch durch Durchflusszytometrie-Analyse, dass der Pool von Disaggregation erhaltenen Zellen aus mehreren Zelltypen zusammengesetzt ist, einschließlich der mesenchymalen Stammzellen, die eine Schlüsselrolle in den Prozessen der Geweberegeneration und -reparatur, für ihre hohe Regenerationsfähigkeit ausüben. Schließlich haben wir gezeigt , in vitro , dass dieses Verfahren die Sterilität von Mikro-Transplantate beibehält , wenn in Agar Gerichte kultiviert. Zusammenfassend schließen wir, dass diese neue regenerative Ansatz ein viel versprechendes Instrument sein kann, für Kliniker in einem Schritt durchführbar, steril und gebrauchsfertig Mikrotransplantationen zu erhalten, die allein oder in Kombination mit den meisten gängigen biologischen scaffo angewendet werden kann,lds.
Introduction
In den letzten Jahren haben mehrere neue Methoden auf dem Gebiet der Biotechnologie zu erhalten autologe Zellsuspensionen während der Operation, um in einem Schritt entwickelt Behandlungen für akute und chronische Hautläsionen bieten. Darüber hinaus, was die Behandlung von akuten, sondern vor allem chronische Wunden von Trauma, Diabetes, Infektionen und andere Ursachen, bleibt eine Herausforderung. Es gibt zunehmend Hinweise darauf , dass chronische Wunden ein ernstes Thema globale Gesundheit geworden sind, was eine enorme finanzielle Belastung für die Gesundheitssysteme weltweit 1.
Um die Erfolgsrate bei der Behandlung von Hautläsionen, die Abwesenheit umfangreiche Manipulation (einschließlich zelluläre Verstärkung) und die Aufrechterhaltung der sterilen Bedingungen sind wichtig, um erhöhen, um eine Zellsuspension zu erstellen, die auf den beschädigten Bereich der angewendet werden kann sofort Patienten, wodurch eine längere Verarbeitung in Reinräumen wie Zellfabriken zu vermeiden. Stervorragend als Start von kleinen Hautbiopsien, Mahlen, Zentrifugation und andere Trennverfahren (beispielsweise enzymatisch oder mechanisch), werden häufig eine Zellsuspension zu erhalten , verwendet, die in einem Wachstumsmedium kultiviert werden kann. Alle diese Methoden erfordern im allgemeinen eine lange Zeit der Ausführung, die Zellstrukturen Beanspruchung und zu einer Verringerung der Lebensfähigkeit der Zellen führt. Ein weiterer wichtiger Aspekt ist es, eine autologe Zellsuspension zu erhalten, bereit, durch Kliniker verwendet werden, beispielsweise beschädigte Bereiche zu reparieren. Darüber hinaus ist es bekannt, dass autologe Gewebetransplantate die Transferverfahren überleben 3 in der Empfängerstelle von den Grundsätzen der Induktion und Leitung 2, um schließlich zu überleben. Die ideale Transplantatgewebe sollte leicht zugänglich sein und haben eine geringe Antigenität und Entnahmemorbidität 4.
Auf der Grundlage dieser Beweise, war das erste Ziel dieser Studie autologe bio-Komplexe zu schaffen, geeignet fürklinische Anwendung bei der Reparatur von Gewebe. Zu diesem Zweck beschreiben wir eine neue Methode autologe mikro Transplantaten zu erhalten, aus Hautgewebe ausgehend, die durch dieses Protokoll wurden disaggregiert. Ein Fall Präsentation wird auch hier als eine klinische Anwendung von autologem Mikro-Transplantate durch dieses Protokoll in Kombination mit Kollagenschwämme beschrieben erhalten. Dieser Ansatz wurde bereits berichtet worden , in der mechanischen Zerlegung von menschlichen Geweben 5 effizient zu sein und es ist klinisch für Transplantate und Regeneration von Hautgewebe 6,7 sowie für regenerative Therapien von Bindegewebe in oral-Maxillofazialchirurg 8-10 verwendet worden .
Zusätzlich wurde das zweite Ziel dieser Studie die biologische Charakterisierung der Hautgewebe nach der Disaggregation durch dieses Protokoll. Zu diesem Zweck abgeleitet verschiedene homologe Proben von Hautgewebe von dem Rumpfbereich verschiedener Multi-Organund / oder Multi-Gewebespender wurden folgende nationale Vorschriften verarbeitet auf Ernte, Verarbeitung und Verteilung von Geweben zur Transplantation (CNT 2013) in der Region Emilia Romagna Hautjordanland.
CASE PRÄSENTATION:
Eine 35-jährige Patientin ein komplexes Trauma wegen Autounfall zeigte, wurde auf der Intensivstation von Ancona Krankenhaus eingeliefert. Der Patient zeigte eine Infektion am Bein aufgrund einer offenen Wunde und einer Verbindung Bruch mit Fixateur externe stabilisiert. Zwei radikale Debridement wurden durchgeführt, und wenn die Wunde wurde sauber nach Unterdrucktherapie (VAC-Therapie) und der Knochenhaut erschien gesund, wir angewendet, um das Protokoll nach zwei Monaten aus der Rückgewinnung. Nach Desaggregation mit diesem System wurden die Mikrotransplantate erhalten verwendet bio-Komplexe mit einem Kollagenschwamm zu erzeugen, das anschließend implantiert, um wurden auf ihre Wirksamkeit auf die Läsion Reparatur zu untersuchen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Diese vorläufige Studie zeigte , dass Mikrotransplantate dieses Protokoll erhalten werden , können mit Kollagenschwämmen kombiniert werden, wie bereits in anderen klinischen Anwendungen berichtet, um die Wirksamkeit von Mikrotransplantaten Implantate 9, 10 zu optimieren. Insbesondere diese Studie berichtet die Kapazität von bio -Komplexe, gebildet durch Mikrotransplantate und Kollagenschwämmen, die Wundheilung eines Beines Läsion adjuvanten nach 30 Tagen aus der klinischen Anwendung. Darüber hinaus <em…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren möchten dankt Dr. Federica Zanzottera zu der Studie beigetragen Durchflusszytometrie Analyse durchgeführt wird.
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
References
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