Caracterización del tejido después de un nuevo método de desagregación para la piel micro-injertos Generación
Summary
El protocolo describe un nuevo método para desagregar los tejidos humanos y para crear autólogas micro-injertos que, combinado con esponjas de colágeno, dan lugar a complejos biológicos humanos listos para su uso en el tratamiento de lesiones de la piel. Además, este sistema preserva la viabilidad celular de micro-injertos en diferentes momentos después de la disgregación mecánica.
Abstract
Varios de los nuevos métodos han sido desarrollados en el campo de la biotecnología para obtener suspensiones celulares autólogas durante la cirugía, con el fin de proporcionar uno tratamientos paso para lesiones de la piel agudas y crónicas. Por otra parte, el tratamiento de las heridas agudas crónicas, sino también como resultado de un traumatismo, diabetes, infecciones y otras causas, sigue siendo un reto. En este estudio se describe un nuevo método para crear autólogas micro-injertos de tejido cutáneo de un solo paciente y su aplicación clínica. Por otra parte, también se llevó a cabo la caracterización biológica in vitro de tejido cutáneo derivadas de la piel, la dermis de-epidermized (DED) y la dermis de múltiples órganos y / o donantes de múltiples tejidos. Todos los tejidos se desagregan por este nuevo protocolo, que nos permite obtener micro-injertos viables. En particular, se informó de que este innovador protocolo es capaz de crear bio-complejos compuestos por autólogas micro-injertos y esponjas de colágeno lista para ser aplicada sobre lesiones en la piel. el CliniTambién se informó de aplicación cal de autólogas bio-complejos en una lesión de la pierna, mostrando una mejora tanto de proceso de re-epitalization y suavidad de la lesión. Además, nuestro modelo in vitro mostraron que la viabilidad celular después de la disgregación mecánica con este sistema se mantiene en el tiempo para un máximo de siete (7) días de cultivo. También se observó, por citometría de flujo análisis, que el grupo de células obtenidas de desagregación se compone de varios tipos de células, incluyendo células madre mesenquimales, que ejercen un papel clave en los procesos de regeneración y reparación de tejidos, por su alto potencial de regeneración. Por último, hemos demostrado in vitro que este procedimiento mantiene la esterilidad del micro-injertos cuando se cultiva en placas de agar. En resumen, se concluye que este nuevo enfoque regenerativo puede ser una herramienta prometedora para los médicos para obtener en un solo paso viable, estéril y listo para usar micro-injertos que se pueden aplicar solos o en combinación con más Scaffo biológica comúnLDS.
Introduction
En los últimos años, varios métodos nuevos han sido desarrollados en el campo de la biotecnología para obtener suspensiones celulares autólogas durante la cirugía con el fin de proporcionar tratamientos de un solo paso para lesiones de la piel agudas y crónicas. Por otra parte, el tratamiento de las heridas agudas pero sobre todo crónicas que resultan de un traumatismo, diabetes, infecciones y otras causas, sigue siendo un reto. Hay una creciente evidencia de que las heridas crónicas se han convertido en un grave problema de salud mundial, provocando una enorme carga financiera para los sistemas sanitarios en todo el mundo 1.
Para aumentar la tasa de éxito en el tratamiento de lesiones de la piel, la ausencia de manipulación extensa (incluyendo la mejora celular) y el mantenimiento de condiciones estériles son esenciales, con el fin de crear una suspensión celular que se puede aplicar inmediatamente sobre el área dañada de la los pacientes, evitando de ese modo un procesamiento más largo en salas limpias, como fábricas celulares. StArting de pequeñas biopsias de piel, molienda, centrifugación y otros métodos de separación (por ejemplo, enzimática o mecánica), se utilizan con frecuencia para obtener una suspensión celular, que pueden ser cultivadas en un medio de crecimiento. Todos estos métodos generalmente requieren mucho tiempo de ejecución, haciendo hincapié en las estructuras de las células, y que conduce a una reducción de la viabilidad celular. Otro aspecto importante es el de obtener una suspensión celular autólogo listo para ser utilizado por los médicos, por ejemplo, para reparar las áreas dañadas. Por otra parte, es bien sabido que los injertos de tejidos autólogos sobreviven los procedimientos de transferencia de sobrevivir el tiempo en el sitio receptor por los principios de la inducción y conducción 2, 3. El injerto de tejido ideal debe estar fácilmente disponible y tienen una baja antigenicidad y donantes morbilidad del sitio 4.
Sobre la base de estas evidencias, el primer objetivo de este estudio fue la creación de bio-complejos autólogos adecuados paraaplicación clínica en la reparación de tejidos. Para este fin, se describe un nuevo método para obtener autólogas micro-injertos a partir de los tejidos cutáneos que fueron desglosados por este protocolo. Presentación de un caso en el presente documento también se describe como una aplicación clínica de micro-injertos autólogos obtenidos mediante este protocolo en combinación con esponjas de colágeno. Este enfoque ya se ha informado que ser eficiente en la disgregación mecánica de los tejidos humanos 5 y se ha utilizado clínicamente para injertos y regeneración de los tejidos dérmicos 6,7, así como para terapias regenerativas de los tejidos conectivos en la cirugía oral y maxilofacial 8-10 .
Además, el segundo objetivo de este estudio fue la caracterización biológica de los tejidos cutáneos después de su desagregación por este protocolo. Para este fin, las diferentes muestras de tejido cutáneo homólogas derivan de la zona del tronco de diferentes multiorgánicay / o donantes múltiples tejidos fueron procesadas siguiendo las normas nacionales sobre la recolección, procesamiento y distribución de tejidos para trasplante (CNT 2013) en la piel de Emilia Romagna regional del Banco.
PRESENTACIÓN DEL CASO:
Una paciente de 35 años de edad, que muestra un trauma complejo debido a accidente de coche fue ingresado en la Unidad de Cuidados Intensivos del Hospital Ancona. El paciente presentó una infección en la pierna debido a una herida abierta y una fractura estabilizada con fijación externa. Dos desbridamiento radical y se llevaron a cabo cuando la herida se limpia después de la terapia de presión negativa (VAC) y el periostio parecían sanos, se les aplicó el protocolo después de dos meses de recuperación. Después de la disgregación con este sistema, se utilizaron los micro-injertos obtenidos para crear bio-complejos con una esponja de colágeno que se implanta posteriormente con el fin de investigar su eficacia en la reparación de la lesión.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este estudio preliminar demostró que micro-injertos obtenidos por este protocolo se pueden combinar con esponjas de colágeno, como ya se ha informado en otras aplicaciones clínicas, para optimizar la eficacia de los implantes de micro-injertos 9, 10. En particular, este estudio informó de la capacidad de bio -complexes, constituido por micro-injertos y esponjas de colágeno, el tratamiento adyuvante de la cicatrización de la herida de una lesión de la pierna después de 30 días a partir de la aplicaci?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer a la Dra Federica Zanzottera para contribuir a la realización de estudios de análisis de citometría de flujo.
Materials
| Rigenera Machine | Human Brain Wave | 79210R | |
| Rigeneracons | Human Brain Wave | 79450S | |
| MTT | Roche Diagnostic GmbH | 11465007001 | |
| RPMI medium | PBI International | 733-2292 | |
| DMEM medium | PBI International | F 0415 | |
| Antibiotics | Biological Industries PBI | 03-038-1 | |
| Antibodies for FACS Analysis | eBiosciences | code 12-1469 for CD146-P; code 17-0349 for CD34-APC | |
| Columbia agar | BioMerieux Company | 43041 | |
| Condress® | Abiogen Pharma | collagen sponge used for bio-complexes | |
| DMSO | Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL | ||
| NaCl solution | Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany | ||
| Xylene | Carlo Erba |
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